摘要 目的：研究中药丹参(SM)对心肌低氧／复氧损伤的保护作用。方法：运用³¹P-NMR技术对离体灌流大鼠心脏的高能磷酸化合物含量及细 胞内的pH值(pHi)进行动态跟踪。结果：丹参注射液能明显减轻低氧期间心 肌高能磷酸合物含量的下降，促使复氧期间PCr、ATP相对含量的恢复，减少低氧及复氧阶段 心肌pHi的下降。结论：丹参能改善低氧及复氧期间心肌能量代谢水平，减 轻心肌低氧／复氧损伤，并能显著改善细胞内酸碱平衡状况。

中图分类号：Q493．8文献标识码： A

文章编号：1000-6834(2000)04-0324-03

THE STUDIES ON PROTECTIVE EFFECTS OF SM AGAINST

MYOCARDIAL HYPOXIA/REOXYGENATION INJURY

LIN Li-zheng

（ NMR Laboratory, Analytic Center, East China Normal University , Shanghai, 200062;）

WU Chang-lin

（ NMR Laboratory, Analytic Center, East China Normal University , Shanghai, 200062;）

LU Zhi

（ NMR Laboratory, Analytic Center, East China Normal University , Shanghai, 200062;）

HUANG Yong-ren

（ NMR Laboratory, Analytic Center, East China Normal University , Shanghai, 200062;）

ZHUANG Jian- guo

（Shanghai Institute of Physiology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai, 200031）

ZHOU Zhao-nian

（Shanghai Institute of Physiology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai, 200031）

ABSTRACTAim and Methods: To assess the myocardial effects of Salvia Miltiorr hiza (SM) injection against hypoxia-reoxygenation injury,³¹P NMR was used to trace the time courses of high energy phosphates (HEP) content and intracell ular pH (pHi) of the isolated perfused rat hearts under hypoxia (30min) and su bsequent reoxygenation (40 min). Results: It was discovered that SM significantly preven-ted the decrease in the myocardial HEP content dur ing hypoxia, enhanced the recovery of myocardial phosphocreatine (PCr),adenosine triphosphate (ATP) and the PCr/Pi (inorganic phosphate) ratios during reoxygena tion, and lightened the decrease of the myocardial pHi value caused by hypoxia. Conclusion: SM improves the myocardial energy metabolism level d uring prolonged hypoxia and subsequent reoxygenation and protects myocardium aga inst hypoxia/reoxygenation injury. SM significantly attenuates acidosis during h ypoxia and prevents the appearance of very acidic areas of the myocardium after reoxygenation.

KEY WORDS:³¹PNMR; salvia miltiorrhiza; high-energy phosphate;isolated rat heart；hypoxia/reoxygenation

中药丹参(salvia miltiorrhiza， SM)是一种传统的活血化瘀药，近年来的研究表明 它对心肌缺血、缺氧损伤具有保护作用。通过研究离体大鼠心脏缺血再灌注过程中心肌组织 SOD含量的变化，表明复方丹参胶囊有抑制脂质过氧化从而减轻心肌缺血。再灌注损伤的作 用^［1］。心肌超微结构的观察研究丹参液对小白鼠缺氧的保护作用^［2］。还 有人采用高效液相色谱法(HPLC)动态观测了人及家兔注射丹参制剂后缺血再灌注过程能量物 质的变化^［3，4］，并用原子吸收分光光度计测定了缺血不同阶段心肌组织中钙离子 浓度的变化^［5］。本文利用核磁共振谱技术的无损伤性和动态、实时以及能对心脏 进行整体测定的特点，采用³¹P-NMR图谱技术，研究丹参注射液对Langendorff离体 灌流大鼠心脏低氧／复氧过程中心肌高能磷酸化合物含量及细胞内pH值(pHi)的影响。

1材料与方法

1．1材料

丹参注射液(上海第一制药厂，批号：970902)，规格：每2 ml相当于3 g丹参；剂量： 每升灌流液含16 ml丹参注射液，恒流灌流，流量为10 ml／(min*300 g w)。

实验动物为12只雄性SD大鼠，体重200～250 g。分为对照组(Con，n=6)和丹参组(SM， n=6)。丹参组采用含丹参的灌流液灌流。

1．2仪器

MSL－300 MHz NMR仪(德国 Bruker)

1．3方法

实验采用本实验室建立的适于NMR研究的Langendorff离体心脏灌流模型^［6］。 灌流液采用改进的 Kreb-Hense-Leit缓冲液配方，成分如下(mmol/L)：NaHCO₃ 24．8 8, NaCl 118．00， KCl 4．70，KH₂PO₄ 1．18，Clucose 5．55，MgSO₄ 1.64，Na Pyruvate 2．00，CaCl₂2.52，Na EDTA 0．50。灌流液的pH值为7．40±0．05，温度 保持在37℃。每只心脏开始记谱前有15min富氧(95％ O₂+5％CO₂)平衡灌流过程，保 持对照水平，然后30 min低氧(20％O₂+5％CO₂+75％N₂)后加富氧灌流40 min。

1．4³¹P-NMR谱的测量条件

³¹P的共振频率121．497 MHz，谱宽60 ppm，采样点数40 w，脉冲宽度25 μs， 延迟时间50 μs，脉冲间隔600 ms，累加次数500。

1．5结果及数据分析

平衡洪流15 min后开始记录第一张谱。第一张谱所得的PCr、ATP、PCr／Pi及pHi作为各 自的初始值进行归一化，对无机磷 Pi共振峰、磷酸肌酸PCr共振峰和三磷酸腺苷ATP的β共 振峰进行积分，考虑到实验动物可能存在个体差异， PCr和ATP采用相对含量，第一张谱所 得的PCr、ATP含量都记为100％。由于灌流液中含无机磷，以亚甲基二磷酸(methylene dip hosphonic acid，MDP)为外标，心脏所含Pi的量为NMR谱上计算的量减去心脏灌流时样品管 中灌流液中 Pi的量。各个数据以均值±标准差(±s)表示，显著性差异采用t 检验。

2结果

图1～4显示Con组及SM组90 min内所得PCr、ATP的相对含量及PCr/Pi、pHi的变化。

Fig.1 Changes in PCr relative content

^*P＜0.05,^**P＜0.01 compared with control

Fig.2 Changes in ATP relative content

^*P＜0.05,^**P＜0.01 compared with control

Fig.3 Changes of PCr/Pi

^*P＜0.05,^**P＜0.01 compare d with control

Fig.4 Changes of intracellular pH

*P＜0.05 compared with control

由图1～3可见：

(1)丹参注射液明显减轻低氧期间心肌高能磷酸化合物含量的下降幅度。低氧10 min后，对 照组心肌PCr相对含量只有26％±4％，而丹参组有43％±7％(P＜0．05)。低氧期间，AT P相对含量丹参组为74%±7%，而对照组已降到64%±8％(P＜0．05)。到低氧30 min时， 丹参组和对照组的心肌ATP相对含量分别降为42％±7％与26％±6％(P＜0．05)。(2)复 氧显著地引起心肌高能磷酸化合物含量的恢复，丹参组与对照组在复氧30 min时的心肌PCr 相对含量分别恢复至66％±9％与50％±9％，丹参组的恢复比对照组好(P＜0．05)。复氧 期间，对照组的心肌ATP含量经过一个复氧初期延迟后缓慢增长，而丹参组心肌ATP含量却能 随着复氧的开始就逐步恢复。(3)对于丹参组，在复氧阶段心肌PCr／Pi值非常明显地大于对 照组(P＜0．01)，而在低氧初期两者的差异也是明显的(P＜0．05)，丹参组要好于 对照组。在低氧后期，两组的心肌PCr／Pi值都很小。丹参组在低氧及复氧阶段的心肌pHi比 对照组高（P＜0．05)，复氧30 min期间，丹参组心肌pHi由6．99逐渐上升至7．10，而 对照组心肌pHi在6．77～6．97波动，说明丹参能减少低氧及复氧阶段心肌pHi的下降。

3讨论