［摘要］目的：观察内、外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在大鼠心脏缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用。方法：在大鼠离体心脏I/R模型上分别给以bFGF和bFGF抗血清，以生理多导仪测定心率、±LV dp/dt_max及左心室终末舒张压(LVEDP)变化，并测定冠脉流量、冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量、乳酸盐脱氢酶(LDH)活性以及心肌组织钙、丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)含量和蛋白激酶(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果：I/R组心功能显著低于对照组，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量、LDH活性及心肌MDA、钙含量显著升高，ATP含量显著降低(均P＜0.01)。bFGF组±LV dp/dt_max较I/R组分别高42.8％和25.6％，LVEDP低40.0％，再灌末心率/预灌末心率(HRr/HRi)及冠脉流量的(B/A)分别高42.3％和20.3％，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量及LDH活性分别少28.8％、30.2％(均P＜0.01)和32.3％(P＜0.05)，心肌MDA和钙含量分别少44.4％和35.6％，ATP含量高33.8％。心肌PKC、MAPK活性分别高41.3％和10.1％(均P＜0.01)；bFGF抗血清组±LV dp/dt_max较I/R组分别低35.1％和38.1％，LVEDP高92.5％，HRr/HRi及冠脉流量的B/A分别少36.0％和45.4%，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白和LDH漏出分别多54.3%、96.2%和34.4%，心肌MDA和钙含量分别高23.6%和49.7%，ATP含量低27.8%，心肌PKC及MAPK活性分别低20.9%和7.7%(均P＜0.01)。结论：内源性bFGF是大鼠对抗心脏缺血/再灌注损伤的保护因子。观察内、外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在大鼠心脏缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用。方法：在大鼠离体心脏I/R模型上分别给以bFGF和bFGF抗血清，以生理多导仪测定心率、±LV dp/dt_max及左心室终末舒张压(LVEDP)变化，并测定冠脉流量、冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量、乳酸盐脱氢酶(LDH)活性以及心肌组织钙、丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)含量和蛋白激酶(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果：I/R组心功能显著低于对照组，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量、LDH活性及心肌MDA、钙含量显著升高，ATP含量显著降低(均P＜0.01)。bFGF组±LV dp/dt_max较I/R组分别高42.8％和25.6％，LVEDP低40.0％，再灌末心率/预灌末心率(HRr/HRi)及冠脉流量的(B/A)分别高42.3％和20.3％，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白含量及LDH活性分别少28.8％、30.2％(均P＜0.01)和32.3％(P＜0.05)，心肌MDA和钙含量分别少44.4％和35.6％，ATP含量高33.8％。心肌PKC、MAPK活性分别高41.3％和10.1％(均P＜0.01)；bFGF抗血清组±LV dp/dt_max较I/R组分别低35.1％和38.1％，LVEDP高92.5％，HRr/HRi及冠脉流量的B/A分别少36.0％和45.4%，冠脉流出液中蛋白、肌红蛋白和LDH漏出分别多54.3%、96.2%和34.4%，心肌MDA和钙含量分别高23.6%和49.7%，ATP含量低27.8%，心肌PKC及MAPK活性分别低20.9%和7.7%(均P＜0.01)。结论：内源性bFGF是大鼠对抗心脏缺血/再灌注损伤的保护因子。

［中图分类号］R541.4［文献标识码］A

［文章编号］1000-4718(2000)06-0486-05

Endogenous basic fibroblst growth factor is a protective factor against myocardial ischemia/reperfusion injury of rats

JIANG Zhi-sheng， WANG Xiao-hong， FU Min-gui，ZHAO Wen， LI Shu-lian, TANG Chao-shu

(Institute of Cardiovascular Research, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034, China)

［Abstract］AIM: To observe the role of exogenous and endogenous basic fibroblst growth factor (bFGF) on myocardial ischemia/reperfusion(I/R) injury of rats.METHODS:bFGF and bFGF antiserum were applied to rat isolated I/R heart. Myocardial function, coronary effluent volume,protein and myoglobin content as well as LDH activity in coronary effluent fluid, myocardial calcium， MDA and ATP concentration as well as PKC， MAPK activity were measured.RESULTS:Compared with control, myocardial function in I/R group significantly decreased. Protein, myoglobin content and LDH activity in coronary effluent liquid as well as myocardial MDA and calcium content increased, while myocardial ATP concentration decreased(all P＜0.01). Compared with I/R group, ±LV dp/dt_max in bFGF group increased by 43% and 26%, respectively. LVEDP decreased by 40%. HRr/HRi and B/A augmented by 42% and 20%, respectively. Protein and myoglobin content as well as LDH activity lowered by 29%，30％ (all P＜0.01) and 33％ (P＜0.05) respectively. Myocardial MDA and calcium content decreased by 44% and 35%, respectively, while myocardial ATP level as well as PKC and MAPK activity increased by 34%，41％ and 10% (all P＜0.01), respectively. In bFGF antiserum group, ±LV dp/dt_max were 35% and 38% lower than those in I/R group. LVEDP increased by 93%. HRr/HRi and B/A decreased by 36% and 45%, respectively. Protein and myoglobin content as well as LDH activity augmented by 54%，96％ (all P＜0.01) and 34％ (P＜0.05) respectively. Myocardial MDA and calcium content increased by 24% and 50%, respectively, while myocardial ATP level as well as PKC and MAPK activity lowered by 28%，21％ and 8% (all P＜0.01), respectively.CONCLUSION:Endogenous bFGF is a protective factor against myocardial ischemia/reperfusion injury of rats.

［MeSH］Fibroblast growth factor,basic; Heart; Reperfusion injury; Signal transduction; Rats

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)广泛分布于体内各组织中，具有促进细胞分化、发育、迁移、增殖等与丝裂作用有关的多种生物学效应。近来研究发现，该因子还可诱导血管壁一氧化氮合酶(NOS)活性，促进一氧化氮(nitric oxide，NO)产生^［1］，舒张血管，拮抗高血压的形成^［2］，并能缩小心肌梗塞的面积^［3］等。提示bFGF的非丝裂作用亦具有重要的生理、病理意义。有报道，心肌缺血、缺氧时，bFGF的产生增加^［4］，但内源性bFGF在心脏缺血缺氧损伤中的作用尚不十分清楚。本工作在离体大鼠心脏缺血/再灌损伤模型上，通过使用bFGF抗体，观察内源性bFGF的作用。

材料和方法

一、 大鼠离体心脏灌流模型制备^［5］及实验分组

雄性Wistar大鼠24只，体重(220±10) g。术前禁食过夜，自由饮水。以20％乌拉坦(5 mL/kg,ip)麻醉动物，摘取心脏迅速悬挂于Langendorff灌流装置上，用37℃、95％O₂-5％CO₂持续平衡的Krebs-Henseleit(KH)液自主动脉逆行恒压灌流，灌流压为7.8 kPa。实验分为4组：(1)对照组，持续灌流90 min。(2)缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组，预灌15 min，停灌(保温、保湿)45 min，再灌注30 min。(3)bFGF组，灌流方法同I/R组，再灌注的最初5 min给予8 μg bFGF。(4)bFGF抗体组，灌流方法同I/R组，再灌注的最初5 min给予1％bFGF抗血清灌流。

二、心功能测定

从左心耳插入球囊，通过压力换能器连接生理多导仪，记录预灌末及再灌末左室内压最大变化速率(±LV dp/dt_max)和左室舒张末期压(LVEDP)。

三、冠脉流量及冠脉流出液中乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、蛋白及肌红蛋白含量的测定

分别收集预灌末5 min或相应时间(对照组)及再灌末5 min或相应时间(对照组)的冠脉流出液，测定冠脉流量，并用Brabford法^［6］、Elz法^［7］及全自动生化分析仪分别测定冠脉流出液中蛋白含量、肌红蛋白含量及LDH活性。

四、心肌组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)及钙含量的测定

灌流结束后，取约50 mg心室肌以硫代巴比妥酸法测定MDA含量，以原子吸收分光光度法测定心肌组织钙含量，以放免药盒测定三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量。

五、心肌组织蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性测定^［8］

将心肌组织以穿细胞液(mmol/L: HEPES 12.5,EGTA 12.5,pH 7.4,MgCl₂ 5.2, KCl 194.0, CaCl₂ 8.2, PKC底物肽0.2 IU/管, streptolysin 0.3 IU/管)匀浆(4℃)，取匀浆液150 μL，37℃孵育10 min，加入［γ-³²P］(ATP(37 kBq/管)启动反应，再孵育10 min后加入冷终止液(25%三氯醋酸-2mol/L乙酸 )100 μL终止反应。冰浴10min 后离心(3000 r/min,15 min)，取上清液120 μL点于p81离子交换色谱滤纸上，晾干后以洗脱液(30%乙酸-1%磷酸)洗2次，再以无水乙醇洗1次，干燥后加入闪烁液，以液闪仪(Backman LS6000)测定放射活性。同时作不加PKC底物肽的对照检测，实验管与对照管的差值表示PKC活性(counts*min^-1/3×10⁵ cells) 。

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