［摘要］目的：研究非钙依赖性的磷脂酶A₂ (PLA₂)和ATP敏感性钾通道(K_ATP)在大鼠心肌缺血再灌注（I/R）心律失常中的作用。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支造成缺血10 min，然后放开再灌注10 min。在心肌缺血前5 min分别给予PLA₂抑制剂5,5-dithio-bis(2-nitrobenzoic acid)(DTNB)(16 mg/kg)，K_ATP开放剂pinacidil(0.2 mg/kg)，K_ATP阻断剂glibenclamide(0.3 mg/kg)。结果：与对照组相比，DTNB可降低心律失常评分、磷酸肌酸激酶（CPK）和乳酸脱氢酶 (LDH)值（P＜0.05）；而glibenclamide对I/R心律失常无影响，但升高CPK，LDH值（P＜0.05）；与glibenclamide组比，在glibenclamide阻断K_ATP后，DTNB可引起致死性心律失常，并可升高LDH值（P＜0.05）；pinacidil可完全抑制I/R引起的室颤和室速。结论：PLA₂抑制剂DTNB可减轻I/R损伤，表明PLA₂在I/R心律失常中起着重要作用，同时也表明激活的K_ATP具有抗I/R心律失常的作用。但DTNB对抗I/R心律失常的作用与K_ATP的关系仍有待进一步研究。

［中图分类号］R 541.7［文献标识码］A

［文章编号］1000-4718(2000)03-0222-04

The effect of phospholipase A₂ inhibitor DTNB on the rat ischemia reperfusion arrhythmia

MENG Fan-xue, JIAO Xiao-hui, HAN Da-ying

(Department of Cardiovascular Physiology, Capital University of Medical Sciences， Beijing 100054, China)

［Abstract］AIM: To determine the effects of phospholipase A₂ (PLA₂) and K_ATP on rat ischemia/reperfusion(I/R)-induced arrhythmia.METHODS: Myocardial ischemia and reperfusion were produced by occlusion and reirregation of the left anterior descending artery（LAD）. An inhibitor of PLA₂, 5,5-dithio-bis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB) (16 mg /kg), a K_ATP opener pinacidil (0.2 mg/kg), a K_ATP blocker glibenclamide (0.3 mg/kg) was used 5 min prior to 10 min regional ischemia and 10 min reperfusion.RESULTS: DTNB (16 mg/kg) reduced the scores of arrhythmia, creatine kinase (CPK) and lactate dehydrogenase(LDH) (P＜0.05). Glibenclamide had no effect on I/R arrhythmia, but increased CPK and LDH (P＜0.05). After K_ATP was blocked by glibenclamide, DTNB led to lethal ventricular fibrillation and increase LDH, higher than without DTNB (P＜0.05). Pinacidil depleted ventricular fibrillation and ventricular tachycardia.CONCLUSIONS: PLA₂ inhibitor DTNB enhances membrane stability both in structure and function, so that reduces myocardial damage caused by I/R, and suggests that PLA₂ plays an important role on myocardial I/R arrhythmia, and also implies that activated K_ATP prevents rats from I/R arrhythmia under condition of our experiments, but the relationship between DTNB protective effect and K_ATP activity remains indefinite.

［MeSH］Myocardium; ischemia; Arrhythmia; Nitrobenzenes; Calcium; Phospholipases A; Potassium channels

大量研究表明心肌细胞膜磷脂的减少与心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤有着密切的关系^［1］。心肌I/R时，磷脂酶A₂(phospholipase A₂, PLA₂)被激活，不但引起磷脂的减少,而且对K_ATP活性具有调节作用。但目前尚未有关于PLA₂在I/R心律失常中作用的报道。DTNB全名5，5二硫代-二（2硝基苯甲酸），是一种巯基抑制剂，可通过共价修饰作用抑制PLA₂^［2］。离体组织细胞实验表明DTNB对K_ATP有一定的抑制作用^［3］。本实验选用PLA₂抑制剂DTNB观察PLA₂在大鼠I/R心律失常中的作用，并探讨了DTNB对抗I/R心律失常的作用与K_ATP激活的关系。

材料和方法

一、实验动物

健康雄性Wistar大鼠体重200～300 g，由本校实验动物中心提供。

二、主要试剂

药品：DTNB（Sigma，美国）；Glibenclamide（RBI，美国）；Pinacidil(RBI，美国）；Isoptin(Knoll，德国）。

试剂盒：磷酸肌酸激酶（creatine phosphokinase, CPK）测定试剂盒（中国北京化工厂精细产品有限公司）；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）测定试剂盒（中国北京化工厂精细产品有限公司）。

三、主要仪器

FZG-81直流前置放大器(中国上海嘉龙）；SR54超低频双线示波器（中国宁波东风无线电厂）；奔腾计算机（中国联想）；微型动物呼吸机（中国第二军医大学）；生物信号采集板（中国南京隆海科技实业公司生理科学研究所）；全自动生化分析仪（瑞士,COBAS）。

四、实验方法

1．大鼠心肌I/R模型复制大鼠用乌拉坦（20%，1g/kg ip）麻醉后，气管插管，微型动物呼吸机维持呼吸，频率50～60次/min，潮气量5 mL/100 g。左侧第4肋间开胸，暴露心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间左冠状动脉起始点下方2～3 mm处，垫一薄乳胶圈，用4号线结扎左冠状动脉前降支，对照组只穿1条4号线但不结扎。实验组于结扎前5 min给药，结扎左冠状动脉前降支10 min后，放开再灌注10 min。整个实验过程中用Ⅱ导联记录心电，经FZG-81直流前置放大器放大。 一方面由SR54超低频双线示波器监测，另一方面经生物信号采集板采集心电图数据，用GNSA软件记录在奔腾计算机。然后断头取血3～5mL测定LDH和CPK。实验结束后进行统计分析。

2．心律失常实验分组（每实验组大鼠6只）a. 对照组：给予0.9% NaCl 1.0 mL(Con组)；b. DTNB(16 mg/kg)组 (D组)；c. K_ATP阻断剂glibenclamide(0.3 mg/kg)组(G组)；d. glibenclamide(0.3 mg/kg)+DTNB(16 mg/kg)组(GD组)；e. K_ATP开放剂pinacidil(0.2 mg/kg)组(P组)。

3． LDH，CPK水平测定见试剂盒说明书。

4．心律失常评分标准心律失常分析遵守Lambeth规则。心律失常评分标准参考Curtis等^［4］标准。其中非持续性与持续性室颤以2 min为限。早搏（premature ventricular contraction，PVC）：1分； 二联律/齐射（bigeminy/salvos）：2分；室速（ventricular tachycardia，VT）：3分；非持续性室颤（non-sustained ventricular fibrillation，non-sustained，VF）：4分；持续性室颤（sustained ventricular fibrillation， sustained VF）：5分。

5．数据处理本实验心律失常评分，血清酶数据均以均数±标准差（±s）表示，用单因素方差分析进行统计分析。

结果

近年来，K_ATP在I/R时对受损心肌的保护作用受到广泛的关注，有作者指出PLA₂阻断剂对心肌保护作用可能与K_ATP有关^［3］。

图1示心律失常评分：Con组为4.33±0.51。D组为3±0，P组为1±0，后两组与Con组相比，P＜0.01，均有明显的抗心律失常作用。G组为4.17±0.42，与Con组相比，对I/R心律失常无影响。但GD组，大鼠产生严重心律失常，并全部死亡，心律失常评分为5±0，与G组相比，P＜0.05。

图2示CPK值：Con组为2 133±125。D组为1 636±311，低于Con组，P＜0.05。G组为3 663±269, 高于Con组，P＜0.05。GD组为3 974±306, 高于G组，但P＞0.05。

图3示LDH值：Con组为1 245±130。D组为1 039±115，低于Con组，P＜0.05。G组为1 512±326, 高于Con组，P＞0.05。GD组为1 785±147, 高于G组，P＜0.05。

Fig 1Effect of DTNB, glibenclamide, isoption and pinacidil on the severity of reperfusion-induced arrhythmias (arrhythmia score) in rat hearts

±s,n=6;*P＜0.05,**P＜0.01,vs Con；▲▲P＜0.01,vs GD

Con=control； D=DTNB; G=glibenclamide; GD=glibenclamide+DTNB; P=pinacidil

1DTNB, glibenclamide, isoption 和 pinacidil对大鼠I/R心律失常的影响

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