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文章编号1001-7399(2000)02-0164-01
编者按：为了推动病理新技术的开展，福州迈新公司有志赞助本刊《技术交流》栏目，支持学术交流，促进病理新技术的普及和应用，凡其客户在本栏发表的优秀论文一律给予奖励，欢迎投稿。
在日常的术中快速病理诊断工作中，当淋巴结仅有小巢或单个癌细胞发生转移时，不容易与组织细胞等相区别。通常可加作组织化学如网状纤维和爱先蓝等染色，但这些方法既费时，灵敏度和特异性又都不高。为此，介绍一种在冷冻切片上利用微波炉进行免疫组化染色快速检测癌微小转移灶的方法。
1材料与方法
1.1材料所有的免疫组化试剂均购自福州迈新公司，且都是即用型（便于操作和节省时间）。使用微波炉时均选在低火档。
1.2染色方法(1) 在低温冷冻切片机上作常规冰冻切片；(2) 固定：在固定液（95%乙醇和乙醚按1∶1的体积比混合而成）中浸泡1 min；(3) 滴加3%的H2O2,微波炉2 min；(4)PBS冲洗1 min；(5) 滴加胰酶消化液，微波炉2 min（仅需要用胰酶修复的抗原才进行本步和下一步操作）；(6)PBS冲洗1 min；(7)滴加正常血清，微波炉3 min；(8)滴加一抗（如 AACT、CEA、EMA、keratin、LCA、L26、lysozyme、Mac387、UCHL-1等），微波炉15 min；(9)PBS冲洗1 min；(10)滴加二抗，微波炉5 min；(11) PBS冲洗1 min；(12)滴加S-P复合物，微波炉5 min；(13)PBS冲洗1 min；(14) DAB显色，苏木精复染，电吹风吹干，中性树胶封片。
2结果
整个染色过程约需时间40～45 min。我们主要将本法用于术中检测乳腺癌患者腋窝无明显增大的哨兵淋巴结有否发生了微小癌的转移，在检测的 39例中，除2例因染色结果欠佳而不能确诊外，其余 37例均能准确判断，未出现假阳性或假阴性（图1，2）。另外，还应用于淋巴瘤和其他一些判断肿瘤组织来源的术中病理诊断中，均取得满意的效果。
3讨论
过去已有多种检测癌转移的方法，如常规HE染色、连续切片、组织化学染色、细胞培养等，但这些方法都有一定的局限性。近年来， PCR技术尤其是RT-PCR作为一种高敏感度、高特异性的方法，在检测肿瘤微小和隐匿性转移中得到应用，但该方法较费时，还需要有专门的贵重的设备和有掌握分子生物学技术的人员进行操作。免疫组化则可克服这些缺点，故冷冻切片快速免疫组化染色可常规应用于术中病理诊断中。
图1冷冻切片，淋巴结乳腺癌微小转移灶EMA呈阳性。S-P×200
2冷冻切片，淋巴结乳腺癌微小转移灶LCA呈阴性。S-P×200
基金项目：广东省科研重点项目资助课题(No 99M04914G)
作者简介：李海刚，男，35岁，硕士，主治医师
收稿日期：1999-11-17修回日期：2000-02-28
