摘要目的：探讨EB病毒在霍奇金淋巴瘤（HL）潜伏感染和p53蛋白表达的关系。方法：应用EBER-1寡核苷酸探针以原位杂交（ISH）方法检测72例HL组织中的EBER；用免疫组化方法检测p53蛋白表达。结果：发现HL中R-S细胞EBER-1和p53蛋白的阳性率分别为53.20%和47.22%。HL中EBER-1检出率明显高于淋巴结反应性增生组（P＜0.05），同时HL中的R-S细胞含有EBV潜伏感染期中高拷贝（RNA，EBER-1）含量丰富，阳性信号在核仁蛋白膜表达。检测HL淋巴细胞衰减型p53的阳性率较高。结论：HL发生可能与EB病毒潜伏感染有关。EB病毒、p53之间可能存在内在联系并相互影响，p53蛋白阳性者预后不良。

中图分类号R733文献标识码A文章编号1001-7399(2000)02-0121-02

The significance of Epstein-Barr virus infection and expression of p53 protein in Hodgkin's lymphoma

Ye Shenghua, Zhang Sheng, Chen Linying, Lin Hua

(Dept of Pathol, the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou350005)

ABSTRACTPurposeTo study the relationship between EBV infection of Hodgkin's lyphoma(HL) and expression of p53 protein.Methods EBER and p53 protein expression in 72 cases of HL were studied with EBER-1 oligonucleotide probe and immunohistochemistry respectively.Results The rate of EBER positive R-S cells and p53 expression in HL were 53.20% and 47.22%, the former was higher than that in group of lymph node hyperplasia(P＜0.05). Meanwhile R-S cell in HL contained a wealth of high-copy EBER-1 in EBV latency.Conclusions HL might be related to EBV latent infection. Mutation of p53 gene may be related to the in fection of EBV and prognosis of patients who has p53 positive-expression are poor.

KEY WORDSHodgkin's lymphoma； herpesvirus 4, human; protein p53；in situ hybridization；immunohistochemistry

近年来的一些研究^〔1～3〕发现霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma, HL）与EB病毒潜伏感染有关。霍奇金淋巴瘤EB病毒感染和p53基因之间关系未见报道。我们应用原位杂交技术检测HL中R-S细胞的EBER-1表达率，同时观察p53蛋白阳性率，探讨HL中R-S细胞EB病毒潜伏感染与p53基因突变之间的关系。

1材料与方法

1．1材料选取福建医科大学附属第一医院病理科、协和医院病理科和福建医科大学病理学教研室1980～1997年外检中的72例HL材料。原标本为各部位浅表淋巴结，经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，5 μm厚切片，HE染色，光镜观察。按国际Rye分类标准进行组织分型。并行免疫组化检测，其中，＞80%病例CD15阳性；90% CD30阳性。取其中双项或一项阳性典型的HL病例进行原位杂交实验。EBER-1寡核苷酸探针由美国明尼苏达州病理系提供；抗地高辛抗体由德国宝灵曼公司提供；显色剂（BCIP，NBT）、p53、CD15和CD30试剂均购自福州迈新公司。阳性对照组为已知的HL阳性组织片，阴性对照组用杂交液替代EBER探针。

1．2原位杂交实验用三蒸水配制各种缓冲液。组织切片经二甲苯脱蜡60 min，乙醇梯度入水；PBS-5 mmol/L MGC×2次洗涤10 min×2；蛋白酶K37.0℃水浴恒温箱中消化20min；PBS洗涤2min/次以脱去蛋白酶K，加滴EB病毒寡核苷酸探针（1∶20）在42.0℃水育恒温箱中孵育杂交4 h；2×SSC洗涤5 min；1×SSC洗涤5 min；0.5×SSC洗涤5 min;（Buffer A）A液洗涤3 min；滴加碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体（1∶200）Ab片段在37.0℃水浴恒温箱中孵育2 h；A液洗涤3 min；（Buffer C）C液洗涤3 min；显色剂避光显色20 min～1 h；水洗涤；苏木精浅染，封片。

1．3免疫组化染色p53免疫组化染色采用微波抗原修复。应用显微图像观察10个高倍视野，阳性细胞数＞10%为异常表达。

1．4统计学处理实验结果数据使用χ²检验分析。

2结果

2．1临床资料72例HL活检前均未经化疗，病程1周～1年。临床表现为浅表淋巴结肿大。男58例，女14例，男女之比为4.1∶1。发病年龄第一高峰为3～15岁，32例；第二高峰为50～72岁，30例；其余10例分布于16～50岁。

2．2原位杂交检测EBER-172例中，总阳性率为53.2%。其中23例淋巴细胞为主型（LP）中阳性11例（47.82%），25例混合细胞型（MC）中阳性16例（64.10%），15例结节硬化型（NS）中阳性5例（33.34%），9例淋巴消减型（LD）中阳性6例(66.67%)。EBER-1探针表达在R-S细胞的胞膜和胞浆为浅紫蓝色，核仁均呈深紫色，背景淋巴细胞为阴性（图1）。各亚型HL的EB病毒潜伏感染检出率分析显示LD明显高于LP型（P＜0.05）。5例淋巴结反应性增生应用EBER-1（寡核苷酸探针原位杂交）无阳性表达。

图1霍奇金淋巴瘤MC型，R-S细胞呈深紫色。ISH×400

2．3p53蛋白表达p53蛋白在HL的R-S细胞核内呈棕色颗粒状阳性表达。72例中p53蛋白异常表达率为47.2%，其各组阳性率分别为：LP，39.1%；MC，64.0%；NS，40.0%；LD，66.7%。以LD和MC组阳性率为高。

3讨论

笔者应用原位杂交技术检测HL组织中EBER-1的表达，同时使用免疫组化方法观察HL中p53突变率，旨在探讨EB 病毒和p53蛋白在HL中的表达及其可能的相互关系^〔4，5〕。

同其他发展中国家一样，我国受EB病毒感染的高峰年龄是儿童和老年人。本组72例HL中15岁以下者占32例（44.4%），其中男童占78.1%(25/32)，50岁以上占(41.66%)，两者和占(86.1%)，这说明EB病毒感染与HL的发病有密切关系，这和文献报道相符^〔6〕。

从原位杂交和p53检测结果看，HL中EBER-1阳性率为53.20%，各亚型间LD阳性检出率66.67%（6/9）明显高于其他各亚型(P＜0.05)。72例HL p53异常表达率为47.2%,其中MC型p53异常表达率明显高于LP型和NS型（P＜0.05）；虽然LD型的p53异常表达率也高于LP型和NS型，但经统计学处理差异无显著性（P＞0.05）。HL受EB病毒感染后的细胞转化中，EBER-1均参与细胞的转化复制DNA。当淋巴细胞中含有EB病毒的基因产物潜在淋巴组织蛋白膜LMP-1中，后者能阻止细胞凋亡，促进淋巴细胞向肿瘤转化。

有关HL中p53蛋白表达的研究报道较少。但HL的LD型 和MC型，p53阳性率较高，提示它有可能参与淋巴细胞转化发生突变。众所周知，LD型和MC型是HL各亚型中预后较差的类型，其p53检出率较高，故认为检测p53蛋白表达可作为评价HL预后的重要参考。

作者简介:叶圣华，男，主治医师

张声，35岁，硕士，副主任医师。研究方向:胃癌

参考文献

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5，林华,叶圣华,张声. p53过表达与胃癌患者淋巴结转移的关系.临床与实验病理学杂志,1996;12(2):125～127

6，李佩娟,周小鸽,刘樟荣等,小儿何杰金淋巴瘤与EB病毒的关系. 中华病理学杂志,1994;23(4):224～226

收稿日期：1999-07-07修回日期：1999-11-17