摘要目的：探讨贲门癌组织中多药耐药基因（MDR1)表达与其病理特征的关系。方法：应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法，对51例贲门癌组织、癌旁及35枚淋巴结中MDR1基因的表达进行检测分析。结果：贲门癌组织中MDR1阳性18例(35.3％），癌旁组织MDR1阳性 2例（3.9％），两者比较差异具有显著性（P＜0.05）。21枚转移淋巴结组织MDR1阳性6例（28.6％），14枚非转移淋巴结中未见MDR1阳性表达；MDR1表达阳性与肿瘤大小、浸润程度、病理分期及淋巴转移与否虽无统计学意义，但在TNMⅢ、Ⅳ期和肿瘤侵犯深肌层以上的MDR1基因表达阳性率增高；低分化贲门癌的MDR1阳性分布明显高于高分化肿瘤(P＜0.05)。对部分病例随访发现，MDR1阳性者肿瘤复发与转移的总发生率(46.2%)高于MDR1阴性者（21.1%）。结论：贲门癌组织中存在着原发性MDR1基因表达，并与转移淋巴结组织的MDR1基因表达具有一致性，MDR1的表达除了表现肿瘤的多药耐药外，还可能是贲门癌恶性行为的观察指标，提示预后不良。

中图分类号R735.2文献标识码A文章编号1001-7399(2000)02-0129-02

Expression of MDR1 gene and its relationship with pathological feature of cardiac carcinoma

Wang Yanming, Wang Aimin, Gao Ping, Chen Zhixia

(Dept of Thoracic Surg, 252th Hospital of PLA, Baoding071000)

ABSTRACTPurposeTo evaluate the expression of MDR1 gene and its relation to pathological feature of cardiac cancer.Methods A serious of 51 resected tumor tissues from cardiac cancer patients and 51 paracancerous tissues and 35 lymph node tissues were analyzed for MDR1 gene expression by RT-PCR method.Results The MDR1 positivity rate differed significantly between cardiac cancer tissue (35.3%) and paracancerous tissue (3.9%) (P＜0.05). The MDR1 positivity rate in metastatic lymph node was 28.6%. There was not positive expression of MDR1 gene expression in nonmetastatic lymph node. The MDR1 gene expression in undifferentiated tumor was significantly higher in comparison with well-differentiated (P＜0.05). In deeper-muscle invaded by tumor, positivity rate of MDR1 gene expression (37.5%) was higher in comparison with invasion to superficial-muscle(18.2%). The MDR1 positivity rate in stage Ⅲ、Ⅳ tumor tissues (41%) wss still higher than that in stage Ⅰ、Ⅱ(25%). In addition, positive expression of MDR1 gene did not be associated with tumor size and lymph node metastases. The recurrence or metastasis rate with MDR1 positive cases was higher(46.2%) than that with MDR1 negative (21.1%) by follow up of these patients.Conclusion Overexpression of MDR1 gene in untreated cardiac cancer is consistant with that of its metastatic lymph node tissues, and may be regarded as a prognositic marker.

KEY WORDS cardiac neoplasms; genes, MDR1; gene expression

肿瘤的多药耐药性(MDR)是目前研究的热点问题，有关报道多集中于肿瘤多药耐药基因(MDR1)表达与其耐药性的探讨，对于MDR1表达与肿瘤病理特征方面的研究较少。从1996年12月～1998年12月，我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测了51例贲门癌、癌旁及35枚肿大淋巴结组织中MDR1基因的表达，以探讨贲门癌组织中MDR1表达与其病理特征的关系。

1材料与方法

1.1一般资料51例贲门癌中，男性39例，女性12例，平均年龄57岁。全部病例经病理检查为贲门腺癌，术前均未行任何形式的抗肿瘤治疗。标本取自手术结束时肿瘤组织，癌旁（距离肿瘤约3 cm）及随机采取21例患者的35枚肿大淋巴结组织各1块，即投入液氮保存。

1.2主要试剂及仪器AMV逆转录酶、RNA酶抑制剂等均购自Promega公司；毛细管PCR仪为美国Idaho公司产品；MDR1引物由上海生工公司合成；凝胶成像系统:Kodak digital science system dc-40。

1.3RT-PCR方法按照Chomczynski^〔1〕方法提取组织RNA， cDNA合成采取用 20 μl逆转录反应体系，42℃反应1 h， 95℃ 5 min灭活AMV。RT-PCR参照Noonan^〔2〕方法，PCR反应体系内含cDNA 2 μl，10×buffer 2 μl，4×dNTP 2 μl，MDR1、β-actin引物各2 μl，Taq酶1U，用水补至20 μl。PCR反应在0.2 ml薄壁管中进行，毛细管PCR仪扩增反应参数为：94℃预变性2 min、变性20 s，55℃退火20 s，72℃延伸30 s；30个循环；72℃后延伸7 min。

1.4电泳及成像扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，凝胶成像系统进行定量分析，MDR1/β-actin比值表示MDR的相对表达水平，MDR1/β-actin＞0.5为阳性。

1.5统计学方法MDR1阳性率比较行χ²检验。

2结果

不同组织中MDR1的RT-PCR扩增产物凝胶电泳结果，其扩增产物分别为536 bp和336 bp。在贲门癌组织中MDR1基因阳性表达是18例（35.3％），癌旁组织MDR1阳性2例（3.9％），癌组织的MDR1阳性率与癌旁组织比较差异有显著性（P＜0.05）；在35枚肿大淋巴结组织中，病理证实为癌转移的21枚，6枚MDR1表达阳性（28.6％），并且转移淋巴结组织MDR1阳性者，相应癌组织中均阳性。而14枚非转移淋巴结组织未检测到MDR1阳性表达。不同肿瘤大小及淋巴结转移与否的MDR1阳性率相近;但在肿瘤侵犯深肌层或浆膜层的阳性率（37.5%）高于肿瘤侵犯浅肌层以下者（18.2%）;Ⅲ、Ⅳ期贲门癌的MDR1阳性率（41%）也高于Ⅰ、Ⅱ期（25%）;在不同分化贲门癌组织中，MDR1阳性表达分布分别是：高分化腺癌 6例（24%），中度分化 4例（33.3%），低分化 8例（57.1%）。低分化贲门癌的MDR1阳性率与高分化者比较差异有显著性(P＜0.05)。

32例患者经术后1～2年追踪随防，13例癌组织MDR1阳性者，1例复发、5例远处转移，复发与转移的总发生率为46.2%，并且在转移淋巴结组织中MDR1阳性的3例均在术后1年内发生肿瘤复发或转移；而同期随访的19例MDR1阴性者，4例复发或转移，发生率为21.1%。

3讨论

肿瘤细胞的MDR机制复杂，MDR1作为肿瘤细胞的重要耐药基因已被公认，而且在造血肿瘤中的研究较多^〔3，4〕，但在贲门癌组织中的研究少见报道。本研究发现，MDR1在贲门癌组织中表达增高，与癌旁组织比较差异具有显著性（P＜0.05），表明贲门癌组织中具有原发的肿瘤耐药性，这可能是病情进展过程中，肿瘤细胞自身MDR1基因扩增的结果，有人认为^〔5〕MDR1在晚期肿瘤中表达增高，并可反映肿瘤的浸润、转移及预后。本组资料显示，不同肿瘤大小和不同病理类型的贲门癌组织中MDR1阳性率相近，但在侵犯超过深肌层的肿瘤MDR1阳性率（37.5%）高于侵犯粘膜下和浅肌层者（18.5%），Ⅲ、Ⅳ期贲门癌的MDR1阳性率（41%）也高于Ⅰ、Ⅱ期（25%），这一结果似与上述报道相一致。另外，MDR1阳性还多见于低分化肿瘤中（P＜0.05)，这说明MDR1基因表达不仅表现了贲门癌的多药耐药性，还可能反映了肿瘤细胞的恶性程度。

从本组资料的整体分析看，MDR1表达与淋巴结的有否癌转移并无明显关系，但在有癌转移的淋巴结组织中，MDR1基因表达与原发癌组织具有一致性。这提示淋巴结中MDR1阳性表达是肿瘤侵犯淋巴组织的信号，可预示术后肿瘤的复发、转移倾向。虽然本组资料随访时间较短，病例数也少，生存率比较尚无统计学意义。但随访结果显示：MDR1阳性者复发、转移率（46.2%）明显高于MDR1阴性者（21.1%）,由此可见，MDR1表达可能提示贲门癌患者预后不良。

作者简介：王延明，男，主治医师。研究方向：肿瘤的多药耐药性

参考文献

1，Chomczynski P, Sacchi N. Single step method of RNA isolation by acid guanuanianium thiocyante-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem, 1987;162:156

2，Noonan KE, Bech C, Holzmayer TA et al. Quantiative analysis of MDR1 gene expression in human tumor by polymerase chain reaction. Proc Natl Acad Sci USA,1990;87:7160

3，Kruh GD, Chan A, Myers K et al. Expression complementary DNA transfer establishes map as a multidrug resistance gene. Cancer Res,1994;54:1649

4，Abbaszadigan MR, Futsher BW, Klimechi WT et al. Analysis of multidrug resistance associated protein messenger RNA in normal and malignant hematopoitic cells. Cancer Res,1994;54:4676

5，Krissnamachary N, Center MS. The map gene associated with a non pglycoprotein multidrug resistance encodes a 190-kDa membrane bound glycoprotein. Cancer Res,1993;53:3658

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