摘要目的：探讨肺泡巨噬细胞在纤维性间质性肺病胶原纤维异常沉积中的作用。方法：应用HE染色、Masson三色染色和免疫组织化学染色。结果：在纤维性间质性肺病组和疾病对照组之间，肺泡巨噬细胞TGF-β₁和bFGF阳性表达率差异均有显著性(P＜0.05)；肺泡巨噬细胞PDGF-α受体阳性率差异亦有显著性(P＜0.05)。在增生性肺泡Ⅱ型上皮细胞 ，PDGF-α受体阳性表达率，无胶原沉积组高于胶原沉积组(P＜0.05)；而TGF-β₁阳性表达率胶原沉积组高于无胶原沉积组(P=0.01)。结论：肺泡巨噬细胞参与了纤维性间质性肺病及其胶原纤维异常沉积的发生发展过程。

分类号R563.13文献标识码A

文章编号1001-7399(1999)05-0420-03

The role of pulmonary macrophages in fibrotic interstitial lung disease of human

Sun Shaohua, Yang Guorong, Sun Xiaowei et al

(Dept of Pathol, Lanzhou Medical College, Lanzhou730000)

ABSTRACTPurposeTo study the role of pulmonary macrophages in the collagen deposition of fibrotic interstital lung disease (FILD).MethodsHE staining, Massons trichrome staining and immunohistochemistry.ResultsIt was demonstrated that the positivity-rates of TGF-β₁, bFGF and PDGF-α receptors in the pulmonary macrophages of FILD cases were significantly higher than those of disease control cases(P＜0.05).ConclusionPulmonary macrophages could play a part in the process of abnormal collagen deposition in FILD.

KEY WORDSpulmonary fibrosis; immunohistochemistry; macrophages, alveolar

随着细胞因子研究工作的逐渐深入，人们发现巨噬细胞能够产生并表达多种细胞因子，如转化生长因子(transforming growth factor, TGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)等。TGF-β1和bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)主要参与组织的修复和纤维化过程。作者应用HE、Masson三色染色和免疫组织化学方法，研究巨噬细胞内TGF-β₁，bFGF和PDGF_-α的表达与肺组织纤维化关系。

1材料与方法

1.1标本来源65例标本选自本教研室1980～1995年的活检和尸检肺组织蜡块，其中支气管肺炎24例，慢性细支气管炎8例，间质性肺炎14例，肺间质纤维化17例，另选2例正常肺组织做为正常对照。尸检标本占65.08%(41/63)，开胸肺活检标本占4.76%(3/63)，经支气管镜肺活检标本占30.16%(19/63)。标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4～6 μm，每例均连续切片6张，其中4张贴于经明胶-铬明矾处理过的洁净载玻片上，另2张贴于常规处理的洁净载玻片上，全部切片60℃干燥、脱蜡至水后，分别进行免疫组织化学、HE和Masson三色染色。结合HE和Masson染色对所有病例进行筛选和分组。纤维性间质性肺疾病组由上述传统意义上的间质性肺炎和肺间质纤维化病例组成，并按肺泡间隔是否有胶原纤维异常沉积进一步分为胶原沉积组和无胶原沉积组。疾病对照组由支气管肺炎和慢性细支气管炎病例组成。

1.2主要试剂抗TGF-β₁抗体、抗bFGF抗体、抗PDGF-α受体抗体(美国Santa Cruz公司)，免疫组化染色S-P_TM试剂盒(美国Zymed公司)均购自北京中山生物技术有限公司。抗TGF-β₁抗体、抗bFGF抗体和抗PDGF-α受体抗体都是亲合纯化的兔多克隆抗体。TGF-β1与TGF-β2和TGF-β3无交叉反应，bFGF与酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor, aFGF)无交叉免疫反应，PDGF-α受体与其β型受体无交叉反应。

1.3实验方法HE及Masson三色染色按常规方法进行。免疫组织化学染色按S-P_TM试剂盒提供的步骤进行。

1.4统计学处理阳性率用四格表χ²检验法和四格表确切概率法进行检验。

2结果

2.1组织病理学纤维性间质性肺病组中，间质性肺炎表现为细支气管壁及其周围、小叶间隔以及肺泡壁等肺间质充血水肿，有数量不等的淋巴细胞和单核细胞浸润，肺泡壁明显增宽。肺泡腔内可有浆液渗出，也可有多量肺泡巨噬细胞存在，呈脱屑样改变。肺间质纤维化多有肺泡间隔胶原纤维异常沉积，使肺泡壁增厚变形，肺泡结构紊乱，毛细血管数量减少。部分病例，肺泡腔变小，呈裂隙状，内衬以增生的肺泡Ⅱ型上皮细胞。

Masson三色染表明，胶原纤维呈蓝绿色。31例纤维性间质性肺病中，12例无胶原纤维沉积，19例有胶原纤维沉积。胶原纤维沉积的程度依据肺泡间隔内胶原沉积量分为四级：“-”为无胶原或仅有少量细丝状胶原；“+”为胶原纤维轻度增多，呈细束状：“”为胶原纤维中度增多，融合成细带状：“”为胶原纤维明显增多，融合成宽带状或小片状(图1～4)。

图1 Masson 染色,正常肺组织,肺泡间隔无胶原沉积(-).×400

图2 Masson 染色,纤维间质性肺病,胶原沉积期,肺泡间隔无胶原沉积(+).×400

图3 Masson 染色,纤维间质性肺病,胶原沉积期,肺泡间隔无胶原沉积().×400

图4 Masson 染色,纤维间质性肺病,胶原沉积期,肺泡间隔无胶原沉积().×400

2.2免疫组织化学在纤维性间质性肺病中，三种表达物的阳性强度从强到弱依次为bFGF，TGF-β₁，PDGF-α受体。三种表达物的定位和分布模式基本相似，主要在肺泡巨噬细胞和肺泡Ⅱ型上皮细胞表达(图5～12)，细支气管粘膜上皮细胞、细支气管平滑肌细胞和血管平滑肌细胞亦有表达。

图5 纤维间质性肺病,无胶原沉积,TGF-β₁在肺泡巨噬细胞呈阳性反应(+).×400

图6 纤维间质性肺病,胶原沉积(),TGF-β₁在肺泡巨噬细胞呈阳性反应().×400

图7 纤维间质性肺病,无胶原沉积,bFGF在肺泡巨噬细胞呈阳性反应(+).×400

图8 纤维间质性肺病,胶原沉积(),bFGF在肺泡巨噬细胞呈阳性反应().×400

图9 纤维间质性肺病,无胶原沉积,PDGF-α受体在肺泡巨噬细胞呈阳性反应(+).×400

图10 纤维间质性肺病,胶原沉积(),PDGF-α受体在肺泡巨噬细胞呈阳性反应().×200

图11 纤维间质性肺病,无胶原沉积,PDGF-α受体在肺泡Ⅱ型上皮细胞呈阳性反应(+)