文献标识码A文章编号1001-7399(1999)02-0182-01
碳酸锂苏木素法是显示髓鞘的经典方法,该法结果比较稳定、试剂来源方便、且易于掌握,但其染色时间长、易脱片。为此我们利用微波处理可大大缩短染色时间,解决脱片问题,且结果更满意,现介绍如下。
1材料和方法
1.1标本6例慢性炎性脱髓鞘多神经根神经病(CIDP)患者,2例非神经系统疾病死亡病人,分别取腓肠神经1~2 cm,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,6 μm连续切片,粘附剂(slide adhesive, Pacific Trade Service Co, USA)贴片,54℃烤24 h备用。
1.2主要试剂配制
1.2.110%苏木素无水乙醇液苏木素10 g,无水乙醇加至100 ml。用小口瓶盛装,混合溶解后放置2~3周成熟。
1.2.2碳酸锂苏木素染液10%苏木素无水乙醇液(成熟)10 ml,碳酸锂饱和水溶液2 ml,蒸馏水88 ml。
1.2.3Loyez分化液四硼酸钠1 g,铁氰化钾1.25 g,蒸馏水100 ml。
1.3仪器采用日本National IEC-705微波炉(700 W)。
1.4方法切片脱蜡至水→5%重铬酸钾水溶液中,于中火档微波处理3 min→4%硫酸铁铵媒染液中,于中火档微波处理3 min→蒸馏水洗2×3 min→碳酸锂苏木素,在低火档微波下染色5 min→自来水洗2×5 min→4%硫酸铁铵分化(显微镜下控制)至背景呈淡黄色,髓鞘深蓝色→自来水洗2×2 min→Loyez分化液中分化2 min,水洗→脱水、透明、封片。
1.5对照采用凌启波〔1〕介绍的经典碳酸锂苏木素染色法作对照。
2结果
髓鞘呈深蓝色,背景浅。髓鞘环绕神经轴索外周,纵切面呈竹节状,横切面呈小圆圈状(图1)。与经典方法比较图例象更清晰,特别是染色时间从96 h减少至1 h,且无脱片现象。
图1髓鞘呈深蓝色,背景浅。髓鞘环绕神经轴索外周,纵切面呈竹节状,横切面呈小圆圈状。×200
3讨论
经典碳酸锂苏木素染色法的主要缺陷是染色时间长和极易脱片,在常规病理检验中不太适用。以前为防止脱片,在切片脱蜡后用0.5%火棉胶处理,但并不能完全解决脱片问题。我们利用粘附剂贴片,各主要部步骤(媒染和染色)用微波处理,既大大缩短了操作时间,又可完全避免脱片,故特别适合病理科的临床诊断,值得推广。
根据我们的经验,在操作中应特别注意选用合适的微波强度和处理时间,微波强度过高或(和)处理时间太长,不但增加脱片机率,而且试剂挥发增多,造成浪费;微波强度太弱或(和)处理时间不足,则染色过浅,故在实验中应根据切片厚度和固定时间长短进行摸索。作者认为,固定时间不超过1周,6μm的切片,在5%重铬酸钾和4%硫酸铁铵中媒染时用中火档微波处理3 min;碳酸锂苏木素染色时则用低火档微波处理5 min,可获满意结果。
作者简介:郑辉,女,35岁,实验师
参考文献
1凌启波. 实用病理特殊染色和组化技术. 广州:广东高等教育出版社,1989:158~161
收稿日期:1998-05-15
修回日期:1998-09-09
