摘要：在室旁核(PVN)假损毁兔与PVN损毁兔血量扩张(VE)引起尿流量增加, 峰值分别为0.59±0.09与0.31±0.03 ml/min(P＜0.01), 排钠量增加峰值分别为66.76±6.74与36.05±3.44μmol/min (P＜0.01), 而在PVN假损毁兔与PVN完好兔对VE的反应无显著差别(P＞0.05),表明PVN损伤可明显减弱 VE 引起的促钠排泄与利尿效应。颈迷走神经切断并不能改变 PVN损伤的上述作用。双侧肾神经切断兔损毁 PVN对VE引起促钠排泄效应无显著影响,但显著减弱其利尿效应 (P＜0.02)。PVN损毁对VE时肾小球滤过率(GFR)与肾血浆流量(RPF)无显著影响。结果表明PVN参与VE通过迷走传入神经引起促钠排泄与利尿反应的调节,而肾交感传出神经参与其中促钠排泄的作用。Henry与Gauer在60年代提出了血量神经调节学说, 但迄今对血量调节中枢部位的研究报告极少。有文献报道［1］,电损毁下丘脑AV3V区显著减弱血量扩张(VE)引起促钠排泄与利尿效应, 表明下丘脑前部脑室周围的结构可能是血量调节的重要中枢部位。我们根据下丘脑室旁核(PVN)与垂体、前脑、脑干和脊髓的自主神经系统中枢均有广泛神经联系的独特特征［2］,和室旁核-脊髓径路参与VE引起肾交感神经活动的抑制作用［3］, 推断在下丘脑AV3V区的PVN很可能是VE引起促钠排泄与利尿反应的一个重要中枢部位。本工作研究了PVN对VE引起促钠排泄和利尿的作用,以及这些作用与迷走传入神经与肾交感传出神经的关系。

实验用兔68只(2.5～3.5 g), 雌雄不拘, 乌拉坦(700 mg/kg)与α-氯醛糖(35 mg/kg)混合静脉麻醉, 手术后静脉输注生理盐水,输液量0.1 ml/(min.kg)以补充手术中体液损失。接动脉导管并经MPU-05型血压换能器和AT600G型心率计数器在多道生理仪(RM6000,日本光电公司)上记录血压与心率。插膀胱导管, 每间隔10 min收集尿液一次, 并用E2A型钠钾自动分析仪(美国Beckman公司)测定尿钠与尿钾浓度,测定尿流量(ml/min), 并计算出排钠量与排钾量(μmol/min)。

使用脑立体定位仪(Johnson型)按Sawyer氏兔脑图谱定位, PVN坐标为: AP: 0.0 mm; L: ±0.5 mm; H: －13.5 mm。前囱不规则的家兔按金观源方法［4］进行校正。用1 μl微量注射器针头(外径0.5 mm, 内径0.2 mm)按坐标插入PVN。PVN损毁组兔注入1%红藻氨酸(美国Sigma公司);对照组兔注入0.05%抗坏血酸进行假损毁。红藻氨酸与抗坏血酸均溶入人工脑脊液(NaCl: 7.46 g; KCl: 0.19 g; MgCl2: 0.19 g; caCl2: 0.14 g, 加蒸馏水至1?000 ml, pH 4.0)。兔每侧PVN内注射溶液的容积0.1 μl, 注射时间5～10 min, 留针5 min以上。注射后在原位注射美蓝0.1 μl。PVN损毁兔与PVN假损毁兔在间隔4 h后进行VE实验。实验结束后, 向兔脑灌注10%中性福尔马林,固定后冰冻切片, 1%中性红染色, 在光镜下观察。针道及针尖着色范围局限于PVN的留用, 损毁在PVN外的不用。

定随后, 分别先后分离两侧颈迷走神经及两侧肾神经, 并切断之。对动物进行肾菊糖清除率(CIn)与对氨基马尿酸清除率(CPAH)的测定［5］。经一侧颈外静脉输入菊糖(In)和对氨基马尿酸钠(PAH)［初次量: in: 10 mg/kg; PAH: 4 mg/kg; 维持量: In: 0.24 mg/(min.kg); PAH: 0.9 mg/(min.kg)］。实验时分别于VE前1～10 min, VE开始后21～30与61～70 min的中点时间于股动脉采血1.2 ml,同时通过静脉补充等量另一家兔新鲜血液。用751型分光光度计测定血浆及相应10 min尿液的In和PAH, 并计算出肾小球滤过率(GFR)与肾血浆流量(RPF)。

实验时记录动物平均动脉压和心率, 每10 min收集尿液1次作为对照值。然后从颈外静脉输入6%右旋糖酐生理盐水,扩容量为家兔预计平均血量的20%(家兔平均血量按56.4 ml/kg计算)［6］, 于15 min内匀速输入, 在血量扩张开始后连续观察70 min。所得结果用x±s表示。各组数据分别用t检验。

实验结果为:

1.红藻氨酸损毁室旁核对VE引起促钠排泄与利尿效应的影响

9只PVN完好兔与9只PVN假损毁兔VE均引起尿流量、排钠量和排钾量明显增加, 在VE开始后21～30 min内达到高峰, 持续时间60 min。对比两组在峰值期的尿流量、排钠量与排钾量增加值及平均动脉压的变化, 均无显著差异(P＞0.05)(图1)。结果表明PVN假损毁组兔注射酸性物质(pH4.0)和针道损伤对VE引起促钠排泄与利尿效应均无明显影响。

9只PVN假损毁兔与13只PVN损毁兔在VE后尿流量增加峰值分别为0.59±0.09与0.31±0.03 ml/min (P＜0.01),排钠量增加峰值分别为66.76±6.74与36.05±3.44 μmol/min (P＜0.01), 排钾量增加峰值分别为6.90±0.54与3.10与0.42μmol/min (P＜0.01), 两组兔平均动脉压增加峰值分别为0.73±0.05与0.81±0.08 kPa (P＞0.05)(图1)。结果表明PVN损毁显著减弱VE引起促钠排泄与利尿的效应。

2.迷走神经切断与PVN损毁对VE引起促钠排泄与利尿效应的影响

为观察VE引起肾钠水排出增加效应中PVN与迷走传入神经之间的关系, 我们进行了下列观察。颈迷走神经切断+PVN完好兔(n=8)与迷走神经切断+PVN损毁兔(n=13)VE引起尿流量增加的峰值分别为0.16±0.03与0.14±0.02 ml/min (P＞0.05), 排钠量增加峰值分别为17.76±0.92与20.02±1.18 μmol/min(P＞0.05),排钾量增加峰值分别为1.80±0.11与1.52±0.08μmol/min (P＞0.05, 图2), 两组兔平均动脉压升高值无显著差异(P＞0.05)。结果表明, 颈迷走神经切断后进一步损毁PVN对VE引起促钠排泄与利尿效应无明显影响。

图1.红藻氨酸损毁室旁核神经元对血量扩张引起促钠排泄与利尿效应的影响

fig.1.Effect of kainic acid lesion of PVN on natriuresis and diuresis induced by volume expansion in rabbits. ○──○ and □: group of PVN intact rabbits, n=9;●──● and ■: group of rabbits with sham lesion of PVN, n=9;┈┈and: group of rabbits with kainic acid lesion of PVN, n=13. VE: volume expansion. columns show the peak increases in urine flow, sodium and potassium excretion induced by volume expansion in three groups of rabbits.*P＜0.05,**P＜0.01 compared with PVN sham-lesioned group.

PVN损毁+迷走神经完好兔(n=8)与PVN损毁+迷走神经切断兔(n=13) VE引起的尿流量增加峰值分别为0.31±0.03与0.14±0.02 ml/min (P＜0.001), 排钠量增加峰值分别为36.05±3.44与20.02±1.18μmol/min (P＜0.001),排钾量增加值分别为3.10±0.42与1.52±0.08 μmol/min (P＜0.001, 图2),两组兔平均动脉压升高值无显著差异(P＞0.05)。结果表明 PVN损毁后再切断颈迷走神经仍显著减弱VE引起促钠排泄与利尿效应。

3.肾神经切断与PVN损毁对VE引起促钠排泄与利尿效应的影响

肾神经切断+PVN完好兔(n=8)与肾神经切断+PVN损毁兔(n=8) VE引起尿流量增加峰值分别为0.45±0.06与0.28±0.02 ml/min(P＜0.02), 排钠量增加峰值分别为46.35±5.23与39.01±5.02 μmol/min (P＞0.05),排钾量增加峰值分别为4.25±0.84与3.83±0.28 μmol/min (P＞0.05, 图3),两组平均动脉压升高均值无显著差异(P＞0.05)。结果表明, 肾神经切断后再损毁PVN对VE引起促钠排泄效应无显著影响, 但显著减弱利尿效应。

图2.颈迷走神经切断与PVN损毁对血量扩张引起促钠排泄与利尿效应的影响

fig.2.Effect of cervical vagotomy and PVN lesion on natriuresis and diuresis induced by volume expansion in rabbits. ○┈┈○ and □: group of rabbits with PVN lesion and vagus nerve intact, n=13; ●──● and ■: group of rabbits with PVN lesion and vagotomy, n=8; ┈┈ and : group of rabbits with PVN intact and vagotomy, n=8. VE, volume expansion. Columns show the peak increases in urine flow, sodium and potassium excretion induced by volume expansion after cervical vagotomy and pVN lesion in rabbits.**P＜0.001 compared with PVN lesion and cervical vagotomy in rabbits.

4.PVN损毁对血量扩张前后GFR与RPF的影响

6只PVN完好兔与6只PVN损毁兔在VE前后GFR与RPF的变化如下: (1)两组兔在VE前的GFR分别为4.50±0.15与4.36±0.23 ml/(min.kg)(P＞0.05); VE开始后21～30 min分别为4.67±0.25与4.52±0.14 ml/(min.kg) (P＞0.05), 在61～70 min分别为4.53±0.18与4.41±0.11 ml/(min.kg) (P＞0.05)。(2)两组兔在VE前RPF分别为12.50±0.87与11.76±1.09 ml/(min.kg) (P＞0.05); VE开始后21～30 min分别为13.69±1.83与12.66±1.21 ml/(min.kg)(P＞0.05), 在61～70 min分别为12.11±0.79与11.98±0.93 ml/(min.kg) (P＞0.05)。(3)对比PVN完好兔或PVN损毁兔各自VE前后的GFR与RPF,均无显著差别 (P＞0.05)。结果表明, PVN损毁对VE前后的GFR与RPF无显著影响; PVN完好与PVN损毁兔各自在VE前后的GFR与RPF也无显著变化。

本工作观察到: (1) PVN假损毁组与PVN完好组兔对VE引起促钠排泄与利尿<