摘要：目的探讨白介素1β(IL-1β)对精氨酸加压素(AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞(CF)胶原合成的影响。方法采用3H脯氨酸掺入法，观察IL-1β对AVP诱导的CF胶原合成的影响。结果(1)在基础状态下，1×105U/LIL-1β组CF3H脯氨酸掺入率为(94.7±21.4)cpm/5×103细胞，较对照组〔(165.7±31.2)cpm/5×103细胞〕显著降低(P∨0.05)；(2)CF3H脯氨酸掺入率随AVP作用浓度的增加而增高，其中10^-7，10^-6mol/LAVP组的CF3H脯氨酸的掺入率分别为：(541.3±95.8和565±72.4)cpm/5×103细胞，明显高于对照组〔(165.7±31.2)cpm/5×103细胞，P均∨0.01〕；(3)IL-1β可以浓度依赖的方式抑制10^-7mol/LAVP诱导的CF3H脯氨酸掺入率，其中1×105U/LIL-1β＋AVP组和2×105U/LIL-1β＋AVP组CF3H脯氨酸的掺入率分别为：(271.3±42.2和219.7±37.1)cpm/5×103细胞，较AVP组明显降低(分别为P∨0.05，P∨0.01)。结论IL-1β可抑制基础状态下和AVP诱导的CF合成胶原，对逆转高血压病心肌肥厚可能有一定的作用。

中图号：R392文献标识码：A文章编号：1007－8738(2000)03－0234－03▲

The inhibitory effects of IL-1β on the collagen synthesis in rat cardiac fibroblasts induced by arginine vasopressin

XU Hai-liZHAO Lian-youYANG Xue-dongQIAO Huai-yuPENG Yu-hongCHEN Yong-qing

（Department of Cardiology, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038， Shaanxi Province， China ）

Abstract: Aim To investigate the effect of IL-1β on collagen synthesis in CF of neonatal SD rat under basal and AVP induced conditions. Methods Collagen synthesis was measured by 3H proline incorporation. Results (1)Under basal condition, 3H proline incorporation value of 1× 105U/L IL-1β group〔(94.7± 21.4)cpm/5× 103 cells〕 was lower than that of control group〔(165.7± 31.2)cpm/5× 103 cells〕 (P∨ 0.05); (2)AVP increased 3H proline incorporation in CF in a concentration dep endent manner. 3H proline incorporation values of 10 7 and 10 6 mol/L AVP group(541.3± 95.8 and 565± 72.4 cpm/5× 103 cells,respectively)were higher than those of control (165.7± 31.2 cpm/5× 103 cells)(both P∨ 0.01); (3)IL-1β decreased 3H proline incorporation in CF in a concentration dependent manner under 10 7 mol/L AVP induced condition. 3H proline incorporation values of 1× 105U/L IL-1β ＋ 10 7 mol/L AVP and 2× 105U/L IL-1β ＋ 10 6mol/L AVP group (271.3± 42.2 and 219.7± 37.1 cpm/5× 103 cells, respectively) were lower than those of 10 7 mol/L AVP group(P∨ 0.05 and P∨ 0.01, respectively). Conclusion IL-1β decreases collagen synthesis in CF under basal and AVP induced conditions, which may be beneficial to the treatment of myocardial hypertrophy during hypertension.

Keywords: interleukin 1β ; collagen synthesis; cardiac fibroblat; arginine vasopressin▲

心肌间质细胞的异常增殖及胶原合成的异常增多，是高血压导致左室肥厚重要病理变化的原因之一，表现为心肌胶原过度增生、沉积和心肌纤维化，并使心肌胶原增多的程度超过心肌细胞肥大的程度。现已证实，精氨酸加压素(AVP)作为心血管调节肽与高血压所致左室肥厚有关^〔1,2〕。文献报道^〔3〕，白介素1(IL-1)可抑制基础状态下心肌CF增殖，但对胶原合成的影响尚未见报道。我们采用培养的SD大鼠CF，以3H脯氨酸掺入法，观察了不同浓度的IL-1β，AVP及AVP加IL-1β共同干预，对大鼠CF胶原合成的影响，旨在探讨IL-1β与高血压病心肌间质胶原合成的关系。

1材料和方法

1.1材料AVP为美国PeninsularLab产品。DMEM培养液购于Gibco公司。胰蛋白酶购于美国Sigma公司。胎牛血清为浙江金华市清湖犊牛利用研究所产品。3H脯氨酸为中国原子能研究所产品，放射性浓度为3.7×10¹⁰Bq/L。IL-1β为北京邦定生物医学公司产品。闪烁液为18.1mmol/L

POPOP的二甲苯溶液，系西安化学试剂厂产品。

1.2方法

1.2.1CF的培养与鉴定①CF的培养：在无菌条件下，取出生后2～3dSD大鼠(本校实验动物中心提供)的心室，用胰蛋白酶消化法分离CF，并以反复差速贴壁法纯化CF，然后接种于100mL培养瓶中(培养基的组成：DMEM＋100mL/L胎牛血清＋1g/L青链霉素，pH7.2～7.4)，于37℃，50mL/LCO2条件下培养。实验采用3～4代的细胞。②CF的鉴定：培养的细胞在倒置相差显微镜下具有成纤维细胞的典型形态：即细胞呈梭形、多角形，细胞质透明、显得很薄，细胞核明显大呈椭圆形，颜色淡，常含有2～3个核。经免疫组织化学SABC法染色，纤维连接蛋白呈阳性，血管平滑肌肌动蛋白呈阴性，符合成纤维细胞的染色特征。

1.2.23H脯氨酸掺入实验取对数生长期的CF，经2.5g/L胰蛋白酶消化后，用含100mL/L胎牛血清的DMEM液调节细胞密度为2.5×10⁷个/L，加入96孔培养板中，每孔分别加入200μL，静置培养至细胞接近融合。弃上清，加入无血清DMEM，继续培养24h。分别加入不同试剂，继续培养48h后，加入3H脯氨酸(92.5mBq/L)和维生素C(5×104μg/L)，再经4h用2.5g/L胰蛋白酶消化细胞至呈细胞悬液，收集细胞至玻璃纤维滤纸上，烤干。将玻璃纤维滤纸置于闪烁计数管中，每管加入闪烁液0.5mL，用液态闪烁计数仪测定每管的cpm值。每个浓度设4个复孔。实验数据以均数±标准差(±s)表示，组间差别采用t检验。

1.3实验分组(1)IL-1β组：又分为两个亚组，即对照组和1×105U/LIL-1β干预组。(2)AVP组：按加入AVP的浓度(0，10－9，108，107，10－6mol/L)的不同，又分为5个亚组。(3)AVP＋IL-1β组：在给予107mol/LAVP干预的基础上，分别加入0，0.2，0.5，1，2×105U/L的IL-1β。

2结果

2.1IL-1β对3H-脯氨酸掺入CF的影响基础状态下，空白对照组与1×10⁵U/LIL-1β干预组对CF掺入3H脯氨酸的值分别为(165.7±31.2)cpm和(94.7±21.4)cpm，IL-1β干预组明显低于对照组(P∨0.05，图1)。

图11×10⁵U/LIL-1β对胶原合成的影响

Fig 1 Effect of IL-1β of 1× 10⁵U/L on collagen synthesis in CF aP∨ 0.05, vs control group.

2.2AVP对3H脯氨酸掺入CF的影响用不同浓度(109，108，107，106mol/L)的AVP刺激CF48h后，掺入3H脯氨酸的cpm值分别为：184±58.9，226±40.6，541.3±95.8和565±72.4。其中107和106mol/LAVP组与对照组相比较明显升高(P∨0.01，图2)。

图2不同浓度的AVP对CF胶原合成的影响

Fig 2 Effects of different concentrations of AVP on collagen synthesis in CF aP∨ 0.05, vs control group.

2.3IL-1β对AVP诱导的CF3H脯氨酸掺入的影响于1×10⁷mol/L的AVP刺激48h培养的CF中，分别加入不同浓度(0，109，108，107，106mol/L)的IL-1β，继续培养48h，检测3H脯氨酸掺入的cpm值依次为：541.3±95.8，523±72.6，419.3±65.1，271.3±42.2和219.7±37.1，其中1×105U/L和2×105U/LIL-1β组与对照组相比较明显降低(P∨0.05，图3)。

图3不同浓度IL-1β对AVP诱导的CF胶原合成的影响

Fig 3 Effects of different concentrations of IL-1β on collagen synthesis in CF induced by AVP aP∨ 0.05, bP∨ 0.01 vs control group.

3讨论

脯氨酸是CF胶原合成的重要底物，测定3H脯氨酸掺入率可灵敏地反映CF胶原合成的能力〔4〕。本文结果显示，1×105U/L的IL-1β可使基础状态下CF3H脯氨酸的掺入率降低，说明IL-1β在基础状态下能够抑制CF合成胶原。结果还显示，1×10⁹mol/L和1×10⁸mol/L的AVP对CF3H脯氨酸的掺入率无明显影响；而1×10⁶mol/L和1×10⁷mol/L的AVP对CF摄取3H脯氨酸的cpm值则明显增加，说明AVP有明显的促进CF合成胶原的作用，而且具有浓度依赖性，随着AVP刺激浓度的增加，促进CF合成胶原的作用越明显。但用1×10⁵<