中华结核和呼吸杂志2000年第23卷第9期

罗显荣伍伟玲叶小群王琳程治增程涛郑曲波

关键词：香烟烟雾提取物；肺泡巨噬细胞；白细胞介素8

吸烟是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的重要致病因素之一。白细胞介素（IL）8是前炎症介质，由肺泡巨噬细胞(AM)、内皮细胞、上皮细胞和成纤维细胞等产生。在肺部炎症性疾病的发病中起重要作用。已证实香烟烟物提取物(CSE)可增加人支气管上皮细胞IL-8的释放^［1］。我们采用体外培养人肺泡巨噬细胞（hAM），观察CSE对hAM分泌IL-8的影响，探讨吸烟在肺部疾病发病中的作用。

对象与方法8名健康男性，均为非吸烟者，年龄20～24岁，近2个月内无上、下呼吸道感染，未服用任何药物。

CSE制备：按Nakamura等^［2］方法，2支去过滤嘴燃烧的香烟烟雾由注射器驱动装置连续抽吸，吸入烟雾经三通另一个出口入20 ml RPMI 1640培养液（美国Sigma公司提供）制成悬液，密封瓶内，摇动使其充分溶解，调pH至7.4，过滤除菌，其浓度计算为煤焦油850 mg/L和烟碱55 mg/L。并于1 h内用于实验。

支气管肺泡灌洗(BAL)：用Olympus BF P10型纤维支气管镜（日本）常规检查，选右肺中叶B₄或B₅灌洗，将纤支镜顶端严密楔入段或亚段支气管开口处，从活检孔分10次注入37℃无菌生理盐水共200 ml^［3］。立即在80～100 mm Hg（1mm hg=0.133 kPa）负压下吸引回收至无菌硅化瓶内，经双层纱布过滤备用。

实验分组及标本收集：支气管肺泡灌洗液(BALF)经4 ℃ 1 500 r/min离心10 min ，弃上清，Hanks液洗细胞2次，细胞用无血清RPMI1640液培养制成细胞悬液，于培养皿中，置于37 ℃ 5% CO₂、100%湿度培养箱孵育贴壁2 h ，除去未粘附细胞，粘附生长在培养皿壁的细胞即为AM。吹打下AM，调细胞为1×10⁹/L，分为：（1）对照组：在无血清的RPMI1640液中培养；（2）香烟组：向培养基中加入煤焦油(CSE 8.5 mg/L、烟碱0.55 mg/L) 以刺激细胞。（3）干预组：如上刺激同时，以地塞米松（DEX）2μmol加入培养液。12 h收集细胞，离心，留上清，-70 ℃保存，用于IL-8的测定。

IL-8测定：酶联免疫吸附实验（ELISA）检测，试剂盒购至深圳晶美（美国Genzyme公司产品）公司，敏感度为8 ng/L，操作按说明书进行。

统计分析：数据以X±s表示，用SPSS8.0统计软件行t检验。

结果CSE刺激后，AM上清IL-8含量由对照组（126±34) ng/L升高至（172±26) ng/L，两组比较差异有显著性（P＜0.01）；DEX干预后IL-8分泌降为（103±39) ng/L，明显低于CSE刺激组(172±26）ng/L，前后比较（P＜0.01）。

讨论AM和气道上皮细胞暴露于外界环境各种刺激物中，吸烟烟雾首先与之接触，引起炎症反应，进而释放各种炎症介质和细胞因子。IL-8是中性粒细胞趋化因子，对包括中性粒细胞在内的各种炎症细胞具有趋化和激活作用。IL-8对机体作用是双向的，小剂量时对防御感染和调节免疫反应起重要作用，过量时则诱发炎症反应和组织损伤。研究表明COPD稳定期痰液中IL-8明显高于哮喘和健康人，痰液的中性粒细胞计数也明显增高，是COPD炎症反应中的主要细胞^［4］。且发现稳定期COPD和哮喘患者BALF中IL-8水平与中性粒细胞数、中性粒细胞髓过氧化物酶、嗜酸细胞阳离子蛋白呈正相关，与肺功能［一秒钟用力呼气容积/用力肺活量（FEV₁/FVC）］呈负相关^［5］。表明IL-8在COPD患者肺组织中中性粒细胞及其他炎性细胞聚集，介质释放等炎症过程中起关键作用。

本组研究表明，用CSE短暂刺激AM（12 h）后可增加IL-8分泌，DEX可明显降低IL-8的产生。表明AM与上皮细胞一样，受CSE刺激后IL-8分泌增高，AM是人类经香烟烟雾刺激后IL-8的主要来源之一。动物实验表明，豚鼠暴露于香烟烟雾5 h后，AM IL-8 mRNA表达明显增加^［6］，与我们的研究结果一致。本组研究所选择志愿者均为无吸烟史的青年男性，因此推测，吸烟致AM大量分泌IL-8可能是COPD的发生、发展和加重的一个重要原因。但CSE刺激AM产生IL-8的机制尚不清楚。抑制AM IL-8产生可能是预防或治疗COPD的重要环节。本组试验还表明，DEX能抑制CSE致AM分泌IL-8作用。DEX可在转录和转录后水平抑制IL-8 mRNA的表达和IL-8的产生^［7］。

作者单位：罗显荣（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

伍伟玲（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

叶小群（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

王琳（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

程治增（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

程涛（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科)

郑曲波（510602广州市，解放军第四五八医院呼吸内科）

参考文献

［1］Mio t, Romberger DJ, Thompson AB, et al. Cigarette smoke induces interleukin-8 release from human bronchial epithelial cell. AM J Respir Crit Care Med, 1997,155:1770-1776.

［2］Nakamura Y, Romberger DJ, Tate L, et al. Cigarette smoke inhibits lung fibroblast proliferation and chemotaxis . AM J Respir Crit Care Med,1995,151:1497-1504.

［3］Margues LJ, Zheng L, Poulakis N, et al. Pentoxifylline inhibits TNF-α production from human alveolar macrophages. AM J Respir Crit Care Med,1999,159:508-511.

［4］Keatings VM, Collins PD,Scott DM, et al.Differences in interleukin-8 and tumor necrosis factor-alpha in induced sputum from patients with chronic obstructive pulmonary disease or asthma. Am J Respir Crit Care Med,1996,153:530-534.

［5］Nocker RE, Schoonbrood DF, Van de Graaf EA, et al. Interleukin-8 in airway inflammation in patients with asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Int Arch Allergy Immunol, 1996,109:183-191.

［6］Nishikawa M, Kawemizu N, Ito T, et al. Superoxide mediates cigarettes smoke induced infiltration of neutrophils into the airways through nuclear factor-kappa B activation and IL-8 mRNA expression in guinea pigs in vivo. AM J respir Cell Mol Biol, 1999, 20:189-198.

［7］Barnes PJ, Pedersen S,Busse WW. Efficacy and safety of inhaled corticosteroids. New developments. AM J Respir Crit Care Med, 1998,157:1-53.