国外医学输血及血液学分册2000年第23卷第3期

成都市血液中心（610041）杨 英（综述）孙启凤刘衡川（审校）

摘要输血传播病毒（TTV）是日本首次发现的与转氨酶异常升高相关的病毒，是一种可能引起输血后肝炎的新的DNA病毒，从而引起了世界各国学者的关注，分别对其DNA的基因结构、基因分型、传播途径、流行病学调查及其致病机理进行了广泛的研究，但尚存很多争议。本文就TTV的基因结构、传播途径及致病性等方面的最新研究成果作一综述。

关键词：输血传染病输血传播病毒基因型聚合酶链反应

可导致人类肝炎的嗜肝性病毒在1995年以前已被认识到有甲、乙、丙、丁、戊等五种，除由非甲-戊肝炎及已知的其它致病因素外，仍有3.5%～20%的肝炎病人病因不明。1995年美国学者报道发现了庚型肝炎病毒（HGV/GBV-C）。新近研究表明，HGV不是非甲-戊型肝炎病人的主要致病因素。临床资料及流行病学研究提示，存在甲-庚型肝炎以外的病原因子，1997年12月Nishizawa等^[1]首次从1例不明原因的输血后肝炎病人血清中分离到一种非甲-戊和庚型肝炎病毒并与转氨酶异常升高相关的肝炎病毒，暂命名为输血传播病毒（transfusion-transmitted virus,TTV）,Nishizawa等用巢式PCR技术进行DNA扩增，引物来自克隆N22（500个碱基）。初步研究表明，TTV为一单链DNA病毒，无包膜，约由3739个碱基组成，其在蔗糖中的浮密度为1.26g/cm³，在氯化铯中的浮密度为1.31～1.32g/cm³，均高于HBV的浮密度。并对DNase i酶敏感，抗RNase A。作为一种新的DNA病毒，其基因型、病因学机理及传播途径尚不完全清楚。

1 TTV DNA的基因结构及其类型分布

各国学者对不同TTV病毒株的DNA序列进行了分析，发现有不同的基因类型，并对其基因结构进行了广泛的探讨。

1.1 TTV的基因结构

TTV是一种单链DNA病毒，其序列测定数据表明，该病毒基因没有细小病毒的典型终端结构，为进一步阐明其基因组的全部结构特征，Miyata等^[8]采用倒置巢式长距离PCR，引物设计采用nt3025-3739和nt1～216两个片段中的序列，对4例TTV携带者进行DNA扩增，获得1.0-kb的核酸产物，新序列比原来（931nt）长～100nt。将从样株TA278中获得的基因序列与基因库中已注册的序列相比较发现，完整的环状TTV基因组中介于已知的3′-和5′-末端包含一段新的约113个核苷酸的序列（nt3740～3852），形成了一个富含GC（GC含量为90.6%）且具有117个核苷酸（nt3736～3852）的延伸段。还发现其中有一个包含36个核苷酸的延伸段（nt3816～3851）与鸡贫血病毒（CAV）的同源性可达80.6%，而与富含GC段相关的有争议的SP-1位点（nt3834～3839）、TATA盒（nt85～90）、启动子VP₂（nt107～109）、终止密码子VP₁（nt2899～2901）及PolyA（nt3073～3078）信号的结构排列均与CAV相似，其AP-2及ATF/CREB的联系位点和NF-κB位点也与CAV一样，位于富含GC的区域，可以认为TTV是人类第一个环状病毒。

Mushahwar等^[11]对一名西非人的TTV核酸全部的序列进行了分析，他采用PCR技术对病毒基因组的重叠区进行扩增发现，其对mung bean核酸酶敏感，认为病毒基因是环状、单链，并由3852个核苷酸组成，比日本的分离株序列还长113个核苷酸，用过滤法分析病毒颗粒大小为30～50nm，表明其与已知的环状病毒属（Circoviridae）（感染植物和脊椎动物）类似，但已有数据表明其序列与其他病毒并不相同。可将其暂时命名为Circinoveridae。

Erker等^[10]采用反转PCR技术将9株散在的TTV序列扩展到全长或近全长，用种系发育分析法将其分为三种基因型和两种亚型，同时还发现有三个保守的开放读码框（ORFs），在所有的分离株中均可发现ORF1和ORF3，ORF1中有一段Kozak^[20]序列和唯一的加A信号，其对蛋白质的功能和形成均很重要，而ORF2则并非存在于每一个分离株中，没有Kozak序列，ORF3位于ORF1的下游，是读码框中变异最小的，也没有Kozak序列。若要了解其功能还需对病毒蛋白质进一步分离分析。

1.2 TTV的基因类型及地区性分布

Okamoto等^[2]通过序列分析将TTV DNA的基因分为G1和G2两种型，下分四个亚型，即1a,1b,2a,2b。Ukita等^[7]通过进一步的分析，在胆汁和血清中发现了另外两种新的TTV的基因型和三种亚型，暂时将其命名为3型和4型。而Takayama等^[6]则对感染TTV的血友病患者的基因序列进行了分析，并将其测定的DNA的类型分成G1-G6型，将另外一种新发现的基因型暂时命名为G7，提示在日本的血友病患者中存在多种TTV基因型的持续性感染，为进一步了解TTV的持续性感染情况提供了有价值的信息。德国学者Hohne等^[9]将在德国病人中发现的TTV dNA与日本株比较后，也分为G1和G2两型，但在其亚型中增加了一种新的2c亚型。各国学者对TTV基因的分型均有差异，Prescott等^[22]对不同地区的TTV基因型进行了系统的分析后认为其分布具有一定的地区性，不同地区存在不同的变异株，同时又有交叉重叠的现象。如1b型序列在除了巴基斯坦和沙特阿拉伯以外的地区均可找到，日本则主要是1a和2b型。Viazov等^[23]认为在很多地区均可发现1型株。

Wanatabe等^[15]对两个不同地区（HCV高发区和低发区）的TTV dNA基因型的测定表明其地区性分布的差异具显著性。Mushahwar等^[11]采用种系发育分析法对全球性分布的151个TTV分离株中的一段含有260个nt的区域进行了分析，他认为只存在三种基因型，一些通过非肠道途径传播的高危个体则可同时具有不只一种基因型。但他认为，基因型的分布与地理性区域无相关性。

1.3 引物的影响

引物的设计是影响TTV基因型检测的重要因素，目前TTV的测定只能采用PCR技术。Desai等^[14]采用两套引物对TTV基因进行了分析，同时采用Southern杂交技术进行了辅助检测，结果发现引物1（Nishzawa^[1]采用）和引物2（Simmonds^[5]采用）单独使用和同时使用检测的基因型均不一样，单独使用时会降低基因型的分辨率，而且引物2的灵敏度相对要高一些，但不能检测到血清中所有的TTV，为正确分析人群中TTV的感染率，在保守区设计一条可检测到多种基因型的多态性引物是非常必要的。

Leary等^[21]也对PCR的检测方法进行了改进，在病毒基因组中三个独立的区域设计了三对套式引物，且处于病毒基因的非编码区，检测结果发现比原先报道的方法要灵敏的多，大大地提高了TTV的检出率。如捐血者中为34.1%，非甲-庚型肝炎中为59.6%，毒品吸食者为81.7%，血友病患者为95.9%，均比以前报道的比率高。

2 TTV的传播途径及其在体内的分布

2.1 TTV与输血的关系

TTV是从一输血后肝炎患者体内分离出来的，被认为是一种经输血传播的病毒^[1]，但对于其是否经血传播尚有许多争议，很多学者做了这方面的研究。Kobayashi等^[16]对55例在肝细胞癌切除术前后接受过输血（全血和成份血）治疗的患者进行了TTV dNA的检测，结果发现受试者中TTV的感染率很高（12.7%），输血后感染TTV的比率也很高（14.6%），虽然TTV在其中一些病人体内可持续存在达6个月之久，但并未发现有临床肝疾病的症状。Desai等^[14]也对美国的捐血人群及静脉吸毒（IVDAs）等高危人群进行了TTV的检测，他除了采用巢式PCR技术，还采用了Southern斑点杂交技术进行双重检测，结果发现，受试人群中TTV的感染率也比较高（捐血者为10%；卖血者为13%；IVDAs为17%），表明血液传播可提高TTV的感染率。

而Macdonald等^[18]对涉及性及非肠道传播的高危人群（包括52个妓女，81个同性恋者，65个静脉吸毒者）进行了TTV的检测，阳性率约为4.5%～13%，与对照组的4.5%之间无显著性差异，但与艾滋病毒的感染无相关性。表明性接触或静脉吸毒不是引起TTV广泛传播的主要途径。

2.2 粪-口传播

Okamoto等^[13]发现TTV除了可经输血传播外，还可经粪-口途径传播，Ukita等^[7]采用半巢式PCR检测了5名TTV病毒血症患者的胆汁，这5名患者均接受了胆汁排出术或胆囊切除术，结果均检测到TTV dNA，且胆汁中TTV DNA的效价比血清中高10～100倍，且其中一名测试病人胆汁中TTV的浮密度与其粪便中的相同（1.33～1.35g/cm³），提示TTV可能通过从肝脏分泌到胆汁中，再分泌到粪便中的方式进行传播，然后通过粪-口传播途径进一步扩展到一般人群。

南非、中非及巴比亚新几内亚等属TTV高发地区^[17]，Davidson等^[17]对刚果共和国农村的初生婴儿进行了调查，其中产前就诊的妇女中有58%（61/105）TTV阳性，初生婴儿中54%（36/68）TTV阳性，多数婴儿是分娩后3个月内感染，奇怪的是，大多感染TTV的婴儿的母亲TTV却呈阴性，且婴儿的TTV的基因型也与母亲中的不同，提示TTV的感染可能与甲肝及其他肠道传播疾病的途径相同。

2.3 其它途径

Leary等^[21]采用PCR技术对家禽中TTV的感染进行了检测，在19%的鸡、20%的猪、25%的牛及30%的绵羊中发现有TTV的感染，序列测定及种系发