第四军医大学学报1999年第20卷第2期

汤群辉王禾陈宝琦丛义平邵国兴雷芳王文勇

摘要目的：研究bcl-2在肾癌组织中的表达与意义.方法：采用鼠抗人单克隆抗体及SABC免疫组织化学染色法.结果：bcl-2蛋白在肾癌组织中的阳性率为52.1%(25/48)，正常肾组织中为16.1%(5/31)，肾癌组织中bcl-2表达阳性率明显高于正常肾组织（P＜0.05），但不同病理细胞类型及不同临床分期的肾癌组织间bcl-2表达阳性率无明显差异(P＞0.05).结论：bcl-2在肾癌组织中有高表达，其阳性率明显高于正常肾组织，但与肾癌病理细胞类型、分期无关，bcl-2可能参与了肾癌的发病.

关键词：肾癌bcl-2免疫组织化学

0引言

肾癌是目前泌尿外科常见的恶性肿瘤，它的发生与发展受到多种基因的调控，bcl-2是一种细胞抗凋亡基因，其在肾癌的发病中可能具有不可忽视的重要性，bcl-2 在肾癌细胞逃避凋亡的作用上较突变型p53作用更大，有关这方面的报道较少. 我们利用免疫组织化学染色方法对48例肾癌组织标本中的bcl-2 蛋白进行了检测.

1材料和方法

1.1标本48例肾癌组织手术切除标本，来自本院病理科和西安医科大学附属二院病理科存档标本，其中透明细胞癌37例，颗粒细胞癌10例，混合细胞癌1例，按Robson临床分期，Ⅰ期18例，Ⅱ期18例，Ⅲ期10例，Ⅳ期2例. 经100 mL/L福尔马林固定，石蜡包埋，并用HE染色证实. 取31例肾癌旁正常组织作对照.

1.2试剂鼠抗人bcl-2蛋白单克隆抗体购自丹麦DAKO公司，工作浓度1∶80. SABC免疫组织化学检测试剂盒购自武汉博士德公司.

1.3方法及结果判断标准采用SABC法进行免疫组织化学染色，同时以PBS代替一抗作阴性对照. 以31例癌旁正常肾组织作正常组织对照. 以胞浆染色黄色或棕黄色者为阳性细胞标志. 在10×40倍光镜下随机观察10个视野，(-)者无阳性细胞，(+)者阳性细胞数＜25%，(++)者阳性细胞数26%～75%，（+++）者阳性细胞数＞76%.

2结果

2.1正常组织及肾癌组织中bcl-2蛋白的表达及分布31例癌旁正常组织中，阳性者5例，阴性26例，阳性率16.1%，阳性细胞主要分布于肾小管上皮细胞及肾小球壁层细胞. 48例肾癌组织中，阳性者25例，阴性者23例，阳性率为52.1%，bcl-2蛋白表达主要位于癌细胞的胞浆及核膜，呈棕黄色颗粒状（Fig 1～3）. 肾癌组织中bcl-2表达明显高于正常组织，经χ²检验，二者间有显著差异（P＜0.05）.

图1癌旁正常肾组织中bcl-2表达阴性

fig 1bcl-2 (-) expression in normal renal tissue×400

图2肾颗粒细胞癌bcl-2表达阳性（++）

fig 2bcl-2 (++) expression in granular cell carcinoma of kidney×400

图3肾透明细胞癌bcl-2表达阳性（++）

fig 3bcl-2 (++) expression in clear cell carcinoma of kidney×400

2.2bcl-2表达与肾癌病理细胞类型的关系48例肾癌标本中，透明细胞癌37例，其中bcl-2阳性者18例，阴性者19例；颗粒细胞癌10例，其中bcl-2阳性者6例，阴性者4例；混合细胞1例，bcl-2为阳性. 经χ²检验，三种细胞间两两比较，bcl-2的表达阳性率无显著差异（P＞0.05）,说明bcl-2的表达与肾癌病理细胞类型无明显相关性.

2.3bcl-2表达与肾癌临床分期的关系按Robson分期法，48例肾癌中，I期18例，其中bcl-2 (-)7例，（+）7例，（++）4例；Ⅱ期18例，其中bcl-2 (-)9例，（+）3例，（++）6例；Ⅲ期10例，其中bcl-2（-）6例，（+）2例，（++）2例；Ⅳ期2例，bcl-2（-）和（+）各1例. 经χ²检验，肾癌各临床分期间bcl-2表达无显著差异（P＞0.05），说明bcl-2的表达不随着肾癌临床分期的增加而增加.

3讨论

bcl-2基因是本世纪80年代初发现于造血系统肿瘤的一个原癌基因，正常时位于18q21.3染色体，在B细胞滤泡型淋巴瘤中，其常易位至14q32 染色体，但正常与易位的基因均表达分子质量为25 ku的蛋白. bcl-2主要通过抑制细胞凋亡而参与肿瘤的发病^［1～3］，同时，一些研究也认为bcl-2的表达是一些肿瘤产生耐药的机制之一. bcl-2蛋白主要分布于核膜外层、内质网及线粒体外膜上.

本研究发现，在各个病理分级及临床分期的肾癌组织中均有bcl-2蛋白高表达，但bcl-2的高表达又与肿瘤的病理细胞类型、临床分期，无明显相关性，说明bcl-2 蛋白在肾癌的发病与进展中具有持续作用，可能与其它癌基因联合作用引起了肾癌的发生. 另外，由于本实验所用标本绝大多数术前行肾动脉栓塞，细胞坏死严重，细胞病理分级较困难，故未作这方面的比较. 也有作者报告bcl-2在肾癌中的表达与肾癌的病理分级、临床分期及预后明显相关，这可能是因为运用了不同的单克隆抗体和不同的免疫组织化学方法研究造成的结果差异^［4，5］. 另外，肾癌细胞对于化疗和放疗不甚敏感，而化疗、放疗后的细胞死亡方式是凋亡^［6，7］，bcl-2基因导入培养的肿瘤细胞能够有效地抑制多种化疗药物及射线引起的细胞凋亡^［8］. 因此，我们认为bcl-2 可能参与了肾癌的发病，它的高表达可能是肾癌细胞对化疗、放疗不敏感的一个重要原因，阻断bcl-2的表达可能是治疗肾癌的一个重要途径.

作者简介：汤群辉，男，1961-07-01生，浙江省杭州市人，汉族. 1985年第四军医大学军医系毕业，主治医生，讲师，硕士学位，已发表论文7篇. 电话：（029）3375321

作者单位：汤群辉王禾陈宝琦丛义平邵国兴雷芳第四军医大学西京医院泌尿外科王文勇第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033

参考文献

1.Tsujimoto Y,Finger LR,Yunis J et al.Cloning of the chromosome breakpoint of neoplastic B cells with the t (14;18) chromosome translocation.Science,1984;226(4678):1097-1099

2.Bakhshi A,Jensen JP,Goldman P et al.Cloning the chromosomal breakpoint of t (14;18) human lymphoma:Clustering around JH on chromosome 14 and near a transcriptional unit or 18.Cell,1985;41(4):899-906

3.Korsmeyer SJ.Bcl-2: an antidote to programmed cell death.Cancer Surveys,1992;15(1):105-108

4.王思齐，刘同才，张铭铮 et al.凋亡抑制基因bcl-2产物在肾细胞癌中的表达及其意义.中华泌尿外科杂志，1997；18（3）：168

5.邹高德，葛根，孙锡林 et al.肾细胞癌抗凋亡基因bcl-2的免疫组化研究.中华泌尿外科杂志，1997；18（6）：329-331

6.Stephens LC,Ang KK,Schultheiss TE et al.Apoptosis in radiated murine tumors.Radiat Res,1991;127(3):308-316

7.Johnston JB,Lee K,Verburg L et al.Induction of apoptosis in CD⁺₄ prolymphocytic leukemia by deoxyadenosine and 2'-deoxycoformycin.Leuk Res,1992;16(8):781-788

8.Migashita T,Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human leukemic cell line.Blood,1993;81(1):151-157