现根据讲习班资料整理介绍于下,供大家参考。
一、加藤氏玻璃纸厚层涂片法的特点
本法和以往直接涂片法的主要不同点在于:
1、用于检查的粪便量较多,大约为100毫克。
2、用经过一定处理的吸水性玻璃纸代替盖玻片。
3、不使用水或其他液体稀释,直接在载玻片上涂抹,压平。
4、显微镜观察前,使标本适当干燥以提高其透明度而易于识别虫卵。
二、玻璃纸(Cellophane赛路芬)
如上所述,制作一个标本需要粪便量比以往涂片法的量要多(约100毫克)。因此玻璃纸的大小也应考虑在加压时检查物不致逸出为度。一般加图所示的大小即可。
(实物大小)
注:玻璃纸的大小也应考虑以不影响镜检面积为度。因有吸水性及防水性两种,故应注意选用吸水性者。玻璃纸的规格为#300。
三、浸泡液
平时需配制下列处方的混合液。3%马拉凯绿(MalachiteGreen)6毫升甘油500毫升6%石炭酸溶液500毫升
四、浸泡玻璃纸
将前述玻璃纸充分揉开,放入浸泡液内。浸泡时间达24小时以上即可。
五、制作标本
先从采来的粪便标本采三个部位以上共约100毫克的粪便,放在载玻片上,然后再如图所示,用已浸泡过的玻璃纸复盖,用橡皮塞或软木塞轻今按压标本,使之均匀铺开到不致于逸出为度。经过一定时间,干后透明,即可得到适合于显微镜检查的标本。
制作标本方法如下图所示
六、标本的干燥
本法特点之一的“标本干燥”是使显微镜检查时标本透明度增高,虫卵识别度增大。制作标本后到充分干燥的时间,在室温为25℃、湿度75%以下的条件,约需一小时左右。因而,如果在温度较高的夏天,制作标本后要适当观察其干后透明度来掌握镜检时间。若是干燥后仍长时间放置,则可能因干燥过度而造成虫卵变形变性等,出现受损情况识别虫卵就困难了。龙其是在检查钩虫卵,东洋毛状线虫卵时更应注意。
以上是使标本自然干燥的要点。若需检查大量标本,可采用人工干燥的方法。
七、照片效果说明(温度25℃,湿度55%)
肉眼直观的标本透明度
上:标本制成后立即观察0分钟中:标本制成后20分钟下:标本制成后40分钟
经过不同时间的显微镜观察上:蛔虫卵标本制成后0分钟中:蛔虫卵标本制成后20分钟下:蛔虫卵标本制成后40分钟
上:钩虫卵标本制成后0分钟中:钩虫卵标本制成后20分钟下:钩虫卵标本制成后40分钟
八、显微镜检查
显微镜检查标本时,使用推进装置全面检查整个视野。为提高虫卵的识别度,需要视野的亮度,因此显微镜的反射镜面应保持高亮度,原则上以使用人工光源为宜。
九、玻璃纸浸泡液的意义
浸泡液中使用甘油的目的是为了使玻璃纸变柔软的同时,提高其透明度,也可防止虫卵因干燥而受损变形。用石炭酸水是为了灭菌,保护检查人员免受病菌感染。使用马拉凯绿,则是利用其绿色,减少眼晴疲劳,提高检查效率。
十、讨论
以往用的直接涂片法虽然方法简单,但其缺点是使用的粪便量少,因而虫卵检出率低。想要弥补其缺点,就需要增加标本量。标本厚度增加,又会使镜检困难,看不清楚。
本法虽然增加粪便量,却因水分蒸发标本变薄,且有甘油增加透明度,因而看得渭楚。只要镜检全面仔细,则无疑可以提高检出率。
另外,本法对于检查钩虫卵,东方毛状线虫卵时,检出率也比漂浮集卵法和冬季培养法要高。
