关键词： 血管瘤；胶原蛋白；免疫组织化学

摘要目的： 研究基质内胶原蛋白对毛细血管瘤病理演变的影响作用。方法： 采用免疫组织化学方法(LSAB)， 分别观察Ⅰ型、 Ⅲ型及Ⅳ型3种胶原蛋白在颌面部不同分期血管瘤的表达变化。结果： 增殖期3种胶原蛋白的表达阳性率均高于退化期及退化完成期， 有非常显著的差异性(P＜0.01)， 而后两者间无显著性差异。结论： 提示细胞基质内胶原蛋白的含量变化可直接影响血管瘤的增殖退化过程。

Collagen Content and Evolution of HemangiomaChen Guang, He Zhanguo, Wang Yonghai et al. Department of Stomatology, Peace Hospital, Shijiazhuang 050082

AbstractObjective: To examine the relationship between matrix collagen protein content in hemangioma and its clinical evolution. Methods: Maxillofacial hemangioma of different phases of development were immunostained (LSAB) for collagen type Ⅰ, Ⅲ and Ⅳ. Results: The positive staining rate of all that three types of collagen from hemangioma in proliferating phase was higher than those in involution and regression phases (P＜0.01). There was no difference between the second and third types. Conclusions: The results suggest that matrix collagen protein content is related to the evolution of hemangioma.

Key wordsHemangiomaCollagenImmunohistochemistry

在血管形成的过程中， 内皮细胞、 血管生成因子及细胞基质是3个相互影响及作用的关键因素， 其中胶原蛋白是细胞基质的主要成分。因此， 观察胶原蛋白在不同分期血管瘤组织中的含量变化， 有助于探讨它对血管瘤增殖退化病理演变过程的影响作用。

对象及方法

一、 对象：

选择68例资料完整的颌面部毛细血管瘤手术患儿。男40例， 女28例， 年龄45天～12岁。按照Takahashi分类法^［1］， 68例毛细血管瘤患儿中增殖期44例(0～12个月)； 退化期10例(～5岁)及退化完成期14例(～12岁)。选5例唇裂手术切取的正常皮肤做对照。

二、 方法：

1. 试剂： 兔抗人Ⅰ型胶原及鼠抗人Ⅲ型胶原， 其中Ⅰ型胶原为Monosan公司产品， Ⅳ型胶原单克隆抗体购自北京中山生物公司， 余为丹麦Doko公司产品。

2. LSAB免疫组织化学染色主要步骤： 5 μm厚瘤组织切片常规脱蜡入水， 0.3%过氧化氢甲醇抑制内源性过氧化物酶活性20分， 0.1%胰蛋白酶消化(微波5档， 4分钟)， 1%BSA封闭(微波5档， 10分钟)。分别加入鼠抗人Ⅲ型(1∶50)、 Ⅳ型胶原(1∶40)及兔抗人Ⅰ型胶原(1∶80)， 均经微波5档， 10分钟作用后， PBS洗涤再分别加入羊抗鼠(兔)IgG血清(1∶60)。PBS充分反复震荡洗涤后， 加入LSAB反应试剂(微波5档， 10分钟)， PBS洗涤后DAB/H202显色， 苏木精复染， 脱水， 透明， 封片。

结果

用PBS代替一抗作为阴性对照， 阳性者可见有棕黄色沉积物， 呈线状或颗粒状分布。其沉积物多少代表胶原蛋白的表达强度， 强度高者沉积物多。将阳性反应依据着色深浅及形态分为3级： Ⅰ级为弱阳性呈淡黄色， 胶原呈碎片或断片状； Ⅱ级为阳性呈黄色， 胶原呈断续状或间断线性； Ⅲ级为强阳性呈棕黄色， 胶原呈连续线状或细网状。

免疫组织化学观察： 正常皮肤固有层内可见微血管网周围及细胞间质中有3种不同胶原的表达， 着色清晰， 外形完整， 呈均匀一致分布。在增殖期血管组织间质内， 3种胶原均有呈棕黄色连续线状的强阳性表达， 尤以Ⅳ型胶原更为明显， 部分增生形成管状结构的内皮细胞胞浆内也有不同程度的着色， 而退化期及退化完成期则染色较浅， 仅可见呈断续(片)状的阳性或弱阳性表达。阴性对照组未见阳性染色反应。

3种胶原蛋白的表达阳性率在增殖期血管瘤均明显高于退化期及退化完成期。经χ²检验统计学处理增殖期与退化期比较P＜0.05， 有显著差异； 增殖期与退化完成期比较P＜0.01， 有非常显著差异， 但退化期与退化完成期比较则无明显差异性(P＞0.05)。

讨论

本实验观察发现， 在不同分期毛细血管瘤组织中， 3种胶原蛋白的表达有明显的变化， 增殖期多为强阳性且呈连续线状表达， 阳性反应率均高于退化期及退化完成期， 有非常显著的差异， 且可见内皮细胞胞浆有不同程度的着色， 说明增殖期毛细血管瘤细胞基质内胶原蛋白有明显的过度表达或含量增多， 肿瘤细胞的增殖与细胞基质内胶原蛋白的变化存在着密切相关性。体外研究证实^［2，3］：不同胶原成分对内皮细胞均发挥各自一定的影响作用。Ⅰ、 Ⅲ型胶原有利于细胞的增殖、 移动， 在细胞浆及间质内表达明显， 而Ⅳ型胶原则可促进细胞的粘着、 扩散， 多在血管形成区表达， 故笔者推测增殖期胶原蛋白 变化不仅影响细胞的分化过程， 而且提供维持其分化状态的适当刺激。

正常情况下， 内皮细胞与基质间各种成分的相互作用维持着细胞代谢的动态平衡， 间质胶原为细胞合成基膜成分提供支持网架， 后者则进一步为细胞形态分化提供可感知的信息及产生相应的反应^［3］。但随着肿瘤病理演变的发展， 在毛细血管瘤退化期及退化完成期时可见胶原表达多呈碎片或断片状， 染色浅， 表明胶原蛋白大量丧失， 纤维胶原张力降低， 从而造成基底膜结构、 胶原连接及细胞表面与基质间的局部解剖关系破坏， 最终导致血管退化消失。一些胶原蛋白代谢的影响因子(如肝素激素结合物)即通过抑制脯氨酸及赖氨酸羟化酶作用， 干扰胶原正常的三螺旋结构形成， 使得胶原分泌减少及加速细胞间胶原溶解达到抑制血管形成的作用^［4］。为此， 对毛细血管瘤基质内胶原表达变化与肿瘤增殖退化演变规律的研究观察， 可能有助于深入了解细胞与基质间的相互作用关系及阐明毛细血管瘤的临床治疗机理。

参考文献

1Takahashi K, Mulliken JB, Kozakewich HPW, et al. Cellular markers that distinguish the phase of hemangioma during infancy and childhood. J Clin lnvest, 1994, 93:2357-2364.

2Iruela AML, Hasselaar P, Ace H. Differential expression of extracellular protein is correlated with angiogenesis in vitro. Lab Invest, 1991, 64:174-186.

3Pratt BM, Form D, Madri JA. Endothelial cell-extracellular matrix interactions. Ann N Y Acad Sci, 1985, 460:274-288.

4Ingber D, Folkman J. Inhibition of angiogenesis th-rough modulation of collagen metabolism. Lab Invest， 1988, 59:44-51.

(收稿： 1997-11-11修回： 1998-08-28)