肝素、 γ-干扰素、可的松和雌激素与血管瘤增生、 退化有关,但作用机制不清。 近年来认为, 血管内皮细胞是血管瘤增生、退化的主要环节。 本课题采用体外实验方法,研究上述因素对血管瘤血管内皮细胞增殖的影响,探讨对血管瘤的可能作用。

研究方法: 取新鲜血管瘤组织1 cm³,采用组织块培养法进行原代培养。培养液为M199,内含粗制内皮细胞生长因子。原代培养成功后进行传代培养。培养的细胞用免疫组化ABC法鉴定血管内皮细胞特异性抗原vWf和UEA-1。

取培养的第3代血管内皮细胞制成细胞悬液,细胞浓度为1×10⁸/L。 分成对照组和4个实验组。 实验组内分别加入含不同浓度的肝素、 γ-干扰素、可的松和雌激素培养液, 培养12天后作细胞记数, 与对照组比较,确定效果明显的最低剂量为该药的有效作用剂量。

应用每种药物的有效作用剂量,分别加入实验组, 培养后第4、 8、 12天,测各组细胞记数和³H-TdR(³H-胸腺嘧啶脱氧核苷)掺入量。³H-TdR掺入量用液闪烁分析仪测定每个培养孔中放射活性表示, 单位为cpm/孔。 结果与对照组比较,确定每种药物作用的时间效应。

结果: 培养的细胞呈典型的多角形,鹅卵石样排列, vWf和UEA-1均阳性, 符合血管内皮细胞特征。 有效作用剂量分别为, 肝素10 mg/L、 γ-干扰素500×10³ u/L、 可的松50 mg/L、雌激素500 ng/L。 前三者随剂量增加, 效果更加明显,雌激素则不明显。 肝素组(10 mg/L)培养12天后, 血管内皮细胞数量为(28.87±1.72)×10⁷/L,³H-TdR掺入量57.46±5.57)×10² cpm/孔, 明显高于对照组, P?.05。 γ-干扰素组(500×10³ u/L)培养12天后, 细胞记数为(11.77±1.82)×10⁷/L, ³H-TdR掺入量为(16.40±2.81)×10² cpm/孔, 明显低于对照组, P?.01。可的松组(50 mg/L)培养第8、 12天, 细胞记数分别为(8.27±1.06)×10⁷/L、(10.70±2.08)×10⁷/L, ³H-TdR掺入量分别为(15.00±1.18)×10² cpm/孔、(14.00±0.63)×10² cpm/孔, 明显低于对照组, P值分别为?.05和?.01。 雌激素组(500 ng/L)细胞记数和³H-TdR掺入量与对照组无显著性差异。

讨论:肝素被认为是导致血管瘤增生的重要因素之一。本研究采用细胞记数和³H-TdR掺入量反映细胞增殖水平, 显示, 应用肝素(10 mg/L和100 mg/L)后血管瘤血管内皮细胞数量明显增多。 培养12天后的细胞记数和³H-TdR掺入量明显高于对照组。证实肝素通过刺激血管瘤血管内皮细胞增殖促进血管瘤的增生。

γ-干扰素是影响血管瘤退化的重要因素。本实验中, γ-干扰素在体外能明显抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖, 随剂量增加,效果也更加明显, 培养后第12天, 细胞记数、 ³H-TdR掺入量明显低于对照组。 提示γ-干扰素通过抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,参与血管瘤的退化。

可的松是目前常用的治疗血管瘤的药物,但作用机制不明。 本实验中, 可的松能非常明显地抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖, 剂量大于50 mg/L时有明显剂量效应关系。 培养后第4天即显示抑制作用, 第8天后抑制作用更加明显。提示可的松抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖可能是其治疗血管瘤的主要机制之一。

临床观察发现雌激素与血管瘤增生有关。本实验中, 雌激素在体外对血管瘤血管内皮细胞无明显刺激增殖作用, 高剂量(5 000 ng/L)时反而有抑制作用趋势,原因有待进一步研究。

(收稿:1997-03-15)