关键词： 神经母细胞瘤；糖蛋白类；组织化学

摘要 目的: 探讨CD₄₄在神经母细胞瘤(NB)中的预后价值。方法: 对30例NB进行CD₄₄免疫组化研究, 同时与其他预后因素, 如年龄、分期、 病理分型、 核分裂核碎裂指数(MKI)、NSE、 S-100蛋白等作对比分析。 结果: ① Ⅰ、 Ⅱ、Ⅳ-S期二年生存率76.7%, Ⅲ、 Ⅳ期二年生存率33.3%, (P?.05)。 ② 病理分型,生存率随着级别升高而降低, P?.05。 ③ MKI测定结果与生存率无显著性差异, P＞0.05。 ④ 20例S-100蛋白染色呈阳性,二年生存率(60.0%)高于S-100蛋白阴性组(20.0%), P?.05。 ⑤ 14例CD₄₄染色阳性,其中≤1岁, Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅳ-S期, S-100蛋白阳性, 高分化型, 低MKI NB中CD₄₄阳性率显著增高。 cD₄₄阳性NB生存率(68.8%)高于CD₄₄阴性者(21.4%),统计学处理差异有显著性意义(P?.05)。 结论: CD₄₄是NB的一个新的肿瘤标记物, CD₄₄阳性是NB更为可靠的预后良好的指标。

A Comparision Between CD₄₄-a New Tumor Marker and other Prognostic Factors Liang Gui-you, Liu Tangbin. Dept. of Pediat. Surgery, First affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Sciences, guangzhou 510080

abstract Objective: To investigate the value of CD₄₄ in the prognosis of Neuroblastoma (NB). Methods: Thirty cases of NB were studied by CD₄₄ immunohistochemical method and compared with several other prognostic factors such as age, stage, pathological type, and mitosis karyorrhexis index (MKI). Results: The two-year survival rate was 76.7% in stage Ⅰ, Ⅱ, Ⅳ-S, and 33.3% in stage Ⅲ and Ⅳ (P?.05). The survival rate decrea

sed as the grade increased (P?.05). MKI test showed no significant correlation with the survival rate (P＞0.05). The two-year survival rate of S-100 protein positive group (60%) was higher than that of S-100 negative (20%, P?.05). CD₄₄ positive rate of 14 cases with NB was high especially inthose patients less than 1 year of age, in stage Ⅰ, Ⅱ, Ⅳ-S, with low MKI, S-100 positive, and high differentiation. The survival rate of CD₄₄ positive group (68.8%) was higher than that of CD₄₄ negative (21.4%, P?.05).

conclusion: The authors consider as a new marker of NB, CD₄₄ positive isa more reliable index for better prognosis.

key words Neuroblastoma Glygoproteins Histocytochemistry

国外研究表明, CD₄₄是神经母细胞瘤(NB)的一个新的肿瘤标记物,国内尚无有关文献报道。笔者对30例NB进行CD₄₄免疫组化研究,同时与其他预后因素, 如年龄、 分期、 病理分型、核分裂核碎裂指数(MKI)、 NSE、 S-100蛋白等作对比分析,探讨CD₄₄在NB中的预后价值。

材料和方法

1. 临床资料: 病例来源于1981年7月~1995年10月我院收治的经手术切除或活检病理证实为NB的病例38例, 剔除失访的5例, 丢失蜡块的3例,对临床和病理资料完整的30例NB作回顾性研究。

2. 临床分期: 按Evans等^［1］分期标准分为Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅳ-S期。

3. 病理分型: 全部重新复查病理切片, 并按Hughes等^［2］方法按分化程度分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。

4. MKI测定: 随机检查5 000个肿瘤细胞中核分裂核碎裂的细胞数目,按Shimda等^［3］方法分为高、 中、 低三级。

5. CD₄₄、 S-100蛋白、 NSE的免疫组化染色:① 试剂: 第一抗体为鼠抗CD₄₄抗体AHS4408(单抗)、 兔抗人NSE抗体A587(多抗)、 兔抗奶牛S-100蛋白抗体Z311(多抗)。第二抗体为LSAB试剂盒K681。 所用试剂除AHS4408为美国Biosource international Corporation产品外, 其余均为丹麦Dako公司产品。 ②染色方法: 采用LSAB法。 ③ 阳性判定标准: 以胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞,按每视野的阳性细胞数目将阳性强度分为+～++++四级。

6. 统计学方法: 采用χ²检验和四格表确切概率法(Fisher exact test)进行显著性检验,P?.05为差异有显著性意义。

结果

1. 病例选择结果: Ⅰ~Ⅳ、 Ⅳ-S期共30例入选,其中男24例, 女6例。 门诊随诊6例, 信访24例, 随访最长为13年, 最短为半年。 生存14例,死亡16例, 总体二年生存率为46.7%。 ≤1岁的7例, 全部生存(二年生存率100%); ＞1岁23例, 7例生存,2年生存率30.4%。 二者有显著性差异。 Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅳ-S共9例, 生存7例, 生存率76.7%;Ⅲ、 Ⅳ期共21例, 生存7例, 生存率33.3%(P?.05)。

2. 病理分型及MKI测定结果: 共有Ⅰ级3例, Ⅱ级11例,Ⅲ级16例。 生存率随级别的增高而降低(P?.05)。 MKI测定共有9例低级、 9例中级、 12例高级,各级生存率差异无显著性(P＞0.05)。

3. NSE及S-100蛋白免疫组化染色结果: 30例NSE染色均显阳性,组织分化程度越高, 染色程度越强, 因无阴性对照, 未能比较出生存率与NSE阳性率关系。30例中有20例S-100蛋白染色呈阳性, 阳性组NB二年生存率(60.0%)高于S-100蛋白阴性组(20.0%)(P?.05)。

4. CD₄₄免疫组化染色结果: 30例NB中有14例CD₄₄染色阳性,其中≤1岁, Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅳ-S期, S-100蛋白阳性, 高分化型, 低MKI NB中CD₄₄阳性率显著增高。 cD₄₄阳性的NB生存率(68.8%)高于CD₄₄阴性者(21.4%)。统计学处理差异有显著性意义(P?.05)。

讨论

一、 临床分期、 诊断年龄和病理分型对NB预后的影响

NB的最主要预后因素是临床分期,二年生存率随临床分期增高而降低。Ⅳ-S期是NB的一种特殊类型的转移形式, 预后最好。年龄跟NB预后也密切相关,小于1岁的NB预后好。本组资料所示结果与文献报道相符。显然, 早期诊断, 1岁以内婴儿的筛查,对提高NB的生存率有重要的临床意义。根据分析结果, 笔者认为Hughes方法对NB进行病理分型简便而可靠, nB二年生存率随病理级别增高而降低。 而MKI的级别与NB生存率之间无明显的相关性,单纯以MKI作NB预后指标不可靠,必须结合肿瘤间质多少及分化程度来综合评价。

二、 NSE、 S-100蛋白对NB预后的影响

NSE是神经内分泌细胞的糖酵解酶之同功酶,不仅存在于神经元、神经内分泌细胞中,而且起源于这类细胞的肿瘤也有异常表达。本组资料显示NSE是NB最敏感的免疫组化指标,其染色强度与肿瘤分化呈正相关,在NB的诊断、鉴别诊断、病理分型以及预后判断上具有辅助价值。本研究结果显示S-100蛋白阳性的NB二年生存率(30.0%)明显高于S-100蛋白阴性者(20.0%)(P?.05),符合文献报道。表明S-100蛋白在NB中的作用机制有待于研究阐明。

三、 CD₄₄的表达对NB预后的影响

CD₄₄是细胞表面的糖蛋白,属粘连分子家族, 以透明质酸、胶原纤维、纤连蛋白等基质成分为配体, 主要负责细胞-细胞、 细胞-基质之间的粘连^［4,5］。CD₄₄广泛分布在白细胞、红细胞、 上皮细胞、 纤维细胞等不同细胞的表面。人类肺癌、 结肠癌、 乳腺癌等恶性肿瘤若有CD₄₄异常表达, 则恶性度高, 易形成转移,而CD₄₄在NB中的作用恰与其在其他恶性肿瘤的作用相反。 国外研究结果揭示, 有CD₄₄表达的NB预后较好,国内尚无有关文献报道。本课题用抗CD₄₄单抗AHS4408对30例NB进行免疫组化检测,并与其他几种预后因素作比较分析, 结果显示,30例NB中共有16例表达阳性(53.3%), 其中早期(Ⅰ、 Ⅱ)及Ⅳ-S期有88.9%(8/9)表达阳性,而Ⅲ、 Ⅳ期仅33.3%(7/21)阳性(P?.01)。 20例S-100蛋白阳性的NB组有14例CD₄₄表达阳性(70%), 而10例S-100蛋白阴性组仅有2例阳性(20%)(P?.01)。高分化型、 小于1岁、 低MKI的NB中CD₄₄阳性率明显升高, 表明了CD₄₄阳性是NB预后良好更为可靠的新标记物。 nB具有某些特有的生物学行为, 如有转移Ⅳ-S期NB反而预后良好,某些NB可转为良性的神经节细胞瘤。 这些特殊的生物学行为难以用年龄、临床分期、病理分型等来反映,探索影响预后的新指标如CD₄₄,或许在这些方面可以有所突破。 本资料中有1例8岁的男患儿,为Ⅲ期、 低分化(病理Ⅲ级),部分切除原发灶。 凭经验该患儿预后极差,但却无瘤健康生存4.5年, 至今尚生存。 本次检测CD₄₄, 表达强阳性(+++)。 1例5岁男患儿,属早期(Ⅱ期)、 中分化(Ⅱ级)、低MKI(45/5 000),完整切除肿瘤。按理预后好, 但术后病情迅速恶化,出现纵隔、睾丸等全身转移,半年后死亡。本次检测, CD₄₄阴性。 另有1例患儿, 2.5岁初诊时为Ⅲ期的腹膜后NB,不能切除, 仅作活检,该次病理分级为Ⅲ级, CD₄₄阳性。该患儿经6个疗程的化疗后肿瘤缩小, 再次手术能完整切除,病理证实已良转为神经节细胞瘤。 回顾这些<