摘要对“大承气汤”颗粒进行了定性定量研究。通过薄层色谱法鉴别大黄、厚朴、枳实；反相高效液相色谱法测定方中君药大黄游离型蒽醌和总蒽醌的含量，采用ODS(3)5 μm色谱柱，4.6 mm×250 mm，流动相：甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15)，流速为1.0 mL/min，检测波长：254 nm；测定回收率：游离型蒽醌以大黄素、大黄酚为指标，回收率为101.97%，RSD=3.44%，总蒽醌以大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为指标，回收率为98.99%，RSD=1.53%。测定结果：3 批样品的平均含量，游离型蒽醌为0.030 3 mg/g，总蒽醌为13.614 mg/g。

Studies on the Quality Standard of

Dachengqitang Granule

Tianjin Institute of Acute Abdominal Diseases (Tianjin 300100)Wei Junfeng, Liu Junhong, Wu Xiaoxian and Wang Hongzhi

AbstractThe identity and contents of Radix et Rhizoma Rhei, Cortex Magnoliae Officinalis and Fructus Aurantii Immaturus in Dachengqitang Granule were determined by TLC. The “monarch” ingredients including free anthraquinones and total anthraquinones were determined by RP-HPLC. The average recovery rate of free anthraquinones (emodin and chrysophanol) was 101.97%, RSD=3.44%; and that of total anthraquinones (rhein, physcion, emodin, etc.) was 98.99%, RSD=1.53%.

Key wordsDachengqitang Granulefree anthraquinonesemodinchrysophanol

“大承气汤”由大黄、厚朴、枳实、芒硝组成。我所在中西医结合治疗腹部疾病临床20 多年，用于感染、血运障碍、预防和治疗内毒素血症等疾病。为控制制剂质量，对方中君药大黄所含蒽醌类成分进行定性鉴别和含量测定的研究，对厚朴、枳实进行了定性鉴别的研究，结果满意。

1仪器与试药

仪器：岛津高效液相色谱仪，LC-10ATvp 输液泵，SPD-10Avp 紫外-可见检测器，Rheodyne 7725i 进样器，数据处理采用 SSI 分析之星色谱工作站。

对照品：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、厚朴酚、和厚朴酚、辛弗林购自中国药品生物制品检定所。

试剂：甲醇为色谱纯，水为重蒸水，硅胶H、硅胶G、硅胶GF₂₅₄为青岛海洋化工集团产品，其它试剂均为分析纯。

样品：批号990308，990603，991009由本所药物研究室提供。

2定性鉴别

2.1大黄的鉴别^［1，2］：取本品0.05 g，置50 mL圆底烧瓶中，加20 %硫酸溶液1.5 mL，室温振摇5 min，加入氯仿30 mL，水浴加热(90 ℃)回流60 min，取氯仿层加入无水硫酸钠2.5 g脱水，滤过，用少量氯仿洗涤残渣，合并氯仿液，滤过，滤液回收氯仿，用乙腈溶解残渣，稀释至10 mL，作为供试品溶液；按处方比例制成缺大黄的“大承气汤”颗粒，同法制成阴性对照溶液；另取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5 种对照品，加乙腈制成20 μg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995年版一部附录VIB)试验，吸取上述3 种溶液各5 μL点于同一以羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30 ℃～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同的橙黄色斑点，结果见图1-A。

1-芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品2-供试品3-阴性对照4-厚朴酚、和厚朴酚对照品5-辛弗林对照品

图1薄层色谱图

2.2厚朴的鉴别^［2］：取本品1 g，加甲醇10 mL，密塞，室温振摇30 min，滤过，滤液低温挥干甲醇，残渣溶于1 mL甲醇，作为供试品溶液；按处方比例制成缺厚朴的“大承气汤”颗粒，同法制成阴性对照溶液；另取厚朴酚与和厚朴酚对照品，加甲醇制成1 mg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995年版一部附录VIB)试验，吸取上述3 种溶液各5 μL点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同的蓝紫色斑点，结果见图1-B。

2.3枳实的鉴别^［3］：取本品0.5 g，加甲醇5 mL，密塞，超声处理20 min，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例制成缺枳实的“大承气汤”颗粒，同法制成阴性对照溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典1995年版一部附录VIB)试验，吸取上述3 种溶液各10 μL点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-浓氨水(45∶35∶10)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105 ℃烘约10 min，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显相同的紫红色斑点，结果见图1-C。

3含量测定

以本方君药大黄所含蒽醌类成分作为含量测定的指标，采用HPLC法分别测定游离型蒽醌和总蒽醌的含量^［4］，同时计算结合型蒽醌的含量。

3.1色谱条件与系统适用性实验：色谱柱phenomenex ODS(3)柱(4.6 mm×250 mm)，流动相：甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15)，检测波长254 nm，流速：1.0 mL/min，进样20 μL；理论塔板数按芦荟大黄素计不低于3 000，按大黄酸计不低于4 000，按大黄素计不低于6 000，按大黄酚计不低于8 000，按大黄素甲醚计不低于8 500。见图2-Ⅰ。

3.2供试品溶液的制备

3.2.1测定游离型蒽醌供试品溶液的制备：取本品1.5 g，精密称定，置50 mL圆底烧瓶中，加氯仿，水浴回流3 次(30 mL，60 min；25 mL，30 min；20 mL，20 min)，合并，滤过，滤液回收氯仿，用乙腈溶解残渣，定容5 mL，过0.45 μm滤膜，即得(图2-Ⅱ)。

3.2.2测定总蒽醌供试品溶液的制备：取本品0.06 g，精密称定，置50 mL圆底烧瓶中，加20%硫酸溶液1.5 mL，室温振摇5 min加氯仿30 mL，水浴加热(90 ℃)回流60 min，吸出氯仿液，用氯仿洗涤残渣至无色，合并氯仿液，加无水硫酸钠2.5 g，脱水，滤过，用少量氯仿洗涤残渣，合并，回收氯仿，用乙腈溶解残渣，定容至25 mL，过0.45 μm微孔滤膜，即得(2-Ⅱ)。

1-芦荟大黄素2-大黄酸3-大黄素4-大黄酚5-大黄素甲醚Ⅰ-对照品Ⅱ-供试品游离蒽醌Ⅲ-供试品总蒽醌Ⅳ-阴性对照

图2HPLC图

3.3对照品溶液的制备：分别精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5 种对照品各12～13 mg，分别置50 mL容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，分别精密吸取上述5 种溶液各10 mL，加入同一100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，即得。

3.4线性关系考察：精密吸取5 种蒽醌对照品混合溶液0.75，1.25，2.5，5.0，7.5 mL分别置于5 支10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，分别以5 种蒽醌对照品的峰面积进行线性回归，得回归方程：

Y_{芦荟大黄素}=1.059×10^-5X+8.212×10^-2，r=0.999 9，线性=0.039 3～0.524 μg

Y_大黄素=1.280×10^-5X-7.788×10^-2，r=0.998 9，线性=0.041 25～0.55 μg

Y_大黄酸=1.304×10^-5X-1.660×10^-2，r=0.999 5，线性=0.036 45～0.486 μg

Y_大黄酚=9.678×10^-5X-1.235×10^-2，r=0.999 7，线性=0.038 25～0.51 μg

Y_{大黄素甲醚}=1.358×10^-5X-2.877×10^-1，r=0.999 9，线性=0.040 05～0.534 μg

3.5精密度试验：精密吸取对照品混合溶液20 μL，重复进样5 次，按上述色谱条件测定峰面积，芦荟大黄素峰面积积分值的RSD=0.66%；大黄酸的RSD=0.53%；大黄素的RSD=0.82%；大黄酚的RSD=0.84%；大黄素甲醚的RSD=0.53%；5 种蒽醌峰面积积分值总和的RSD=0.61%；表明仪器精密度良好。

3.6重复性试验：取同一批号样品5 份，按供试品溶液制备项下制备，分别依法测定，游离型蒽醌样品以大黄素和大黄酚含量之和计算，RSD=1.14%；总蒽醌样品以大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量之和计算，RSD=1.20%，结果表明本法重复性良好。

3.7回收率试验：采用加样回收法，取已知成分含量的“大承气汤”颗粒，分别加入一定量的对照品混合溶液依法测定回收率，游离型蒽醌样品以大黄素和大黄酚含量之和计算，平均