糙皮侧耳Pleurotus ostreatus(Jacq.ex Fr.)Quél(简称PO)系担子菌纲口蘑科真菌,别名平菇、北风菌、青蘑、桐子菌、粗皮侧耳等,是民间常用食用菌,营养价值较高,同时具有一定的药用价值。为便于对其进行深入的开发研究,现对近年来其化学成分、药理作用等方面的进展情况进行综述。
1化学成分
1.1无机元素:通过比较侧耳菌与落叶松蕈Agaricus中无机元素的含量,发现As不在PO中聚集,PO中K、P含量低于落叶松蕈〔1〕。测定了PO中的无机元素,含量较高的为:K、P、Ca,含量较少的有:Fe、Zn、Cu、Mn、V,重金属有Cd、Hg〔2〕。
1.2氨基酸:对子实体中游离氨基酸进行分析,除N-Δ-乙酰-L-鸟氨酸外,还检测到33种氨基酸,其中丙氨酸、谷氨酸、鸟氨酸中氮的含量占全部游离氨基酸的40%。
1.3多肽:由子实体中得到一种对食欲有抑制作用的糖肽,分子量为70 000~90 000,pI为8.2~9.2,含有2.2%~3.0%的多糖〔3〕。
1.4酶:从培养液中得到苯酚氧化酶(phenol oxidase),可氧化间、对、邻位具有不同取代基的苯酚,底物取代基方向不同,氧化机制也不一样,疏电子基团阻碍底物氧化,释电子基团可促进底物氧化〔4〕。
由菌丝体中分离出抗坏血酸氧化酶,总产率为13%,分子量为94 000,SDS-PAGE显示该酶由两个46 000的亚基组成。在37℃和pH 5.2时活性最佳,对L-抗坏血酸的Km是0.48 mmol/L。氰化物和CO处理后的光谱改变表明该酶为血色素蛋白,每摩尔酶含2 mol血色素〔5〕。
从PO中得到产率为21.4%的酶glyoxalase Ⅰ,分子量为34 000,SDS-PAGE显示由两个相同的17 000的亚基组成,1H-NMR分析该酶可催化分子内的质子转移〔6〕。
从子实体中分离出属于RNase T1家族的guanylic acid特异性RNase,在pH 8.0时活性最强,热稳定性比RNase T1强,该酶含有101个氨基酸,其中6个为半胱氨酸。其分子量为10 800,在二硫键的位置和稳定性方面,与RNase T1家族中其它成员不同〔7〕。
从菌丝体中纯化出蛋白激酶C,SDS-PAGE测得分子量为68 000〔8〕。
从PO中发现一种需H2O2的对Renazol亮蓝R脱色的酶,该酶在pH 3.5~4.0时活性最大,其活性可被Na2S2O5、NaCl、半胱氨酸抑制,H2O2浓度大于154 mmol/L时也能抑制其活性〔9〕。
PO提取液经PAGE发现两条具有漆酶(laccase)活性的色带,为单聚体,分子量为64 000。该酶含有两个极性基团,pK值分别为5.60~5.70、6.70~6.85,这两个基团对维持其活性有重要作用〔10〕。
从PO中纯化得到总产率为23.8%的D-葡萄糖氧化酶(D-glucose oxidase),分子量为290 000,SDS-PAGE显示该酶含有4个70 000的亚基。其辅基是核黄素(flavin),在50 ℃、pH 5.5~6.0时活性最佳,对D-葡萄糖的Km值是1.34 mmol/L,其活性可被HgCl2完全抑制〔11〕。
从培养液中得到藜芦醇氧化酶(VAO),为糖蛋白,以FAD为辅基。4位有甲氧取代基的芳香醇是其较好的底物,肉桂醇可被VAO迅速氧化,松柏醇则氧化较慢。该酶表观熔点60 ℃,对热中度稳定〔12〕。
1.5酶抑制剂:用从Hamster鼠的卵细胞得到的3-羟基-3-甲基戊二酰基(HMG)CoA还原酶,发现PO中存在HMG CoA还原酶抑制剂mevinolin,并用TLC、HPLC和MS进一步证实〔13〕。后又发现抑制剂lovastatin在子实体形成期间出现,可在营养菌丝体、原基和子实体的不同部分测得。
从子实体中纯化出特异性的血清蛋白酶的抑制剂IA-1、IA-2,分子量为8 300、8 200。二者均为酸性多肽,各含72个氨基酸,其N-末端氨基酸被乙酰化封闭。IA-1的12,15位为天冬氨酸和谷氨酸,IA-2则为甘氨酸和天冬氨酸。用羧肽酶Y对IA-1处理则完全失去抑制活性,用HBr使IA-1的Met39-Pro40和Met41-Lys42断裂,用羟胺使IA-2降解,则二者均无活性,说明整个抑制剂分子都参与了活性的发挥〔14〕。
1.6凝集素(agglutinin):从子实体中纯化出一种凝集素,可与一种磷酸酶相互作用而增强其活性,该凝集素的这种性质可被半乳糖阻断,表明与磷酸酶的反应是在凝集素的活性位点进行的〔15〕。
1.7多糖:从PO中得到含D-半乳糖、D-甘露糖、L-果糖的杂聚糖,其基本骨架是(1→6)-D-半乳糖多聚体,此多糖含大量的D-甘露吡喃糖,并通过O-3和O-2与主链相连,该糖的构型是α-D型〔16〕。
由子实体中得到不溶于碱的β-D-葡聚糖,含有1→3连接的β-D-吡喃葡萄糖片断。该糖含7%的蛋白质,可延长易受细菌感染的小鼠的存活期〔17〕。
1.8其它:对培养基中细胞外维生素作了研究,发现PO不能合成Vit B12,培养基的pH和组成明显影响菌丝体中Vit B1、B5、B7的含量,对B2、B6影响较小,在指数生长后期,B5、B7特别是B6分泌较多,B1、B2只存在于细胞中。
用色谱法鉴定了8~20个碳原子的脂肪酸,其中大部分是不饱和脂肪酸,油酸含量最高,为56%。用毛细管气相色谱法检测了PO中总的脂肪酸,主要脂肪酸为C18∶2(59.4%)、C16∶0(21.5%)、C18∶1(9.8%)。
从线粒体制剂中发现两种质粒样DNA成分:pLPO1、pLPO2,它们的5′末端被蛋白质封闭,蛋白酶K对它们的5′末端蛋白的分解程度不同,说明其末端蛋白不同,二者之间及与线粒体、核中染色体之间无同源性〔18〕。
通过凝胶过滤、标记致敏原吸收实验发现PO中含有致敏活性物质〔19〕。对PO孢子用乙醚脱脂,然后用0.125 mol/L碳酸氢铵缓冲液提取,致敏原收率最高。
2药理作用
2.1抗肿瘤作用:实验表明,PO子实体的水提液对小鼠肉瘤抑制率为75%、对艾氏瘤抑制率为60%。从PO热水提取物中分离出葡聚糖组分,在0.1 mg/kg时表现出很强的抗肿瘤作用〔20〕。从PO提取得到糖肽,体内对S180肉瘤有明显抑制作用,可诱导和促进LAK、NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用〔21〕。还得到一对热极不稳定的碱性糖蛋白,体外对S180腹水瘤细胞有很强的细胞毒作用,可使瘤细胞膜通透性发生改变,导致细胞溶解。体内对S180小鼠效果也很好〔22〕。
2.2抗氧化作用:PO水提物具有清除羟基自由基的作用,这可能与其菌体内几丁质(chitin)含量较高有关。用含5%PO干粉的食物喂饲大鼠10周后,其血液、肝脏中H2O2浓度明显降低,肝脏抑制自由基产生的能力提高了24%,抗过氧化物酶,特别是超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性有显著提高〔23〕。
2.3降低胆固醇作用:叙利亚雌性大鼠慢性吸入酒精8周后,胆固醇(C)、甘油三酯(TG)和磷脂含量升高,若同时喂饲PO食物,可使大鼠体内C的水平降至未接受酒精吸入大鼠的水平以下,血液中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)下降30%,而高密度脂蛋白(HDL)的含量、组成未受影响〔24〕。
用含1% PO的食物喂饲对外源胆固醇有遗传敏感性的雌性大鼠,4周后,与不喂饲PO的对照组相比,血液中C的含量降低了40%。
用PO喂饲断奶不久的雄性Wistar大鼠,8周后,血液、肝脏中C的含量分别下降33%、27%,血液中TG不受影响,肝脏中TG含量降低41%。实验表明,C的降低主要是LDL、VLDL中C的减少,HDL中的C并不受影响。由双同位素血浆比率法发现PO可使C的吸收降低14%,从14C-胆固醇的衰变曲线分析,PO能使C的代谢增加42%〔25〕。
从PO中得到水及30%、60%、85%乙醇的提取物,喂饲Hamster鼠,6周后发现,水及30%、60%醇提取物可显著降低血液中C、TG含量,肝脏中C、TG下降34%~40%,85%醇提取物使肝脏中C、TG下降18%~22%〔26〕。
实验表明,PO多糖亦可降低小鼠血液、肝脏中C的含量。
2.4免疫促进作用:小鼠皮下注射不同剂量的PO葡聚糖(glucan)和果聚糖(levamiso-
le),结果显示,葡聚糖在10 mg/kg时,可明显增强小鼠对二硝基氟苯的迟发性超敏反应(DHR)(P<0.05),对吞噬细胞活性指数和中性粒细胞活性都有促进作用(P<0.05);果聚糖在20 mg/kg时,可促进DHR和吞噬细胞的吞噬活性〔27〕。
2.5其它:用含PO的高C食物喂饲胰岛素依赖性糖尿病模型大鼠,2周后,其基础血糖和进食后的血糖水平均明显降
