糖尿病肾病(DN)出现最早的病理改变是肾脏肥大和高滤过现象,而自由基所产生的脂质过氧化损伤可能参与了这一过程。本实验探讨六味地黄汤治疗糖尿病肾病的可能机制。
1材料
1.1动物雄性Wistar大鼠36只,体重271±18.55 g,月龄3月,分笼喂养,自由进食水。
1.2造模用药链脲佐菌素(streptozocin),SigmaCo.USA产品。
1.3实验用药六味地黄汤各成份由天津中医学院第二附属医院制剂科提供,药用:生地黄30 g,茯苓、山药、山茱萸各15 g,牡丹皮、泽泻各10 g,并浓缩至3 g/2ml。维生素E注射液5 mg/ml,上海第九制药厂产品(批号970207)。
1.4主要试剂硫代巴比妥酸,北京生化二厂产品,分析纯。SOD放免试剂盒,北京解放军总医院放射免疫研究所。血糖试纸,德国产品。其余试剂均为国产分析纯。
1.5主要仪器Z323K低温高速离心机,德国生产。7530紫外分光光度计,上海分光光度计厂。LKB自动r计数器,荷兰生产。VitalLab半自动生化分析仪,荷兰生产。Accutrendalpha血糖仪,德国生产。千分之一光电分析天平,上海生产。R7170全自动生化仪,日本生产。
2实验方法
2.1造模实验动物禁食12 小时,腹腔注射STZ50 mg/kg(STZ临时溶于0.1 m,pH 4.2,4℃的无菌枸椽
★天津医科大学中青年科研基金课题(97-03)
酸-枸椽酸钠缓冲液中,制成浓度为0.5%的溶液)。非造模动物,腹腔注射等量的缓冲液。72 小时后,测定空腹血糖13.8~25.0mmol/L,多饮、多食、多尿,体重明显减轻,尿糖(+++)以上,且在整个实验过程中保持上述条件不变者定为糖尿病患鼠〔1〕。
2.2实验分组造模72 小时后,将大鼠随机分为4组:正常对照组6只及糖尿病组10只,每天以2 ml/只蒸馏水灌胃;维生素E组10只,每天每只以14 mg/kg维生素E注射液灌胃〔2〕;六味地黄汤组10只,每天每只灌以六味地黄汤3 g/2ml〔3〕,共28天。
2.3观察指标大鼠在注射STZ前后测血糖、体重、定性尿糖,实验结束心腔取血并留24 小时尿,测血、尿糖,血、尿肌酐,体重、肾重及肾组织LPO含量和SOD活性。
2.4检测方法血糖用alpha血糖仪测定,血、尿肌酐及尿糖用自动生化仪测定,SOD用放免法,LPO用硫代巴比妥酸法。
2.5统计所有实验数据以x±s表示,组间差异用t检验。
3实验结果
3.1糖尿病模型肾脏肥大与其肾组织LPO含量的关系糖尿病形成28 天,糖尿病组大鼠较正常组体重减轻(P<0.05),肾重增加(P<0.05),SOD活力下降(P<0.05)。肾重/体重比值较正常组增大65.2%,同时肾组织中LPO含量也高于正常组(P<0.05),二者之间呈显著正相关(r=0.869,n=14,P<0.05)。见表1。
