摘要：肾复康为本校第一附属医院治疗肾小球肾炎的临床有效方剂，由雷公藤、黄芪、三七、益母草等药组成。通过参考Border方法复制了阳离子化小牛血清白蛋白(C-BSA)致膜性肾小球肾炎大鼠模型，并观察了肾复康对该模型的药理作用。结果表明，肾复康可消除C-BSA肾炎模型大鼠尿蛋白，升高C-BSA肾炎模型大鼠血清总蛋白、白蛋白含量及白蛋白/球蛋白(A/G)比值，降低C-BSA肾炎模型大鼠胆固醇含量、血清肌酐和尿素氮含量，对肾功能具有保护作用。肾复康能抑制C-BSA肾炎模型大鼠血浆的血栓素B₂(TXB₂)含量的升高和6-酮基-前列腺素F_1α(6-Keto-PGF_1α)含量的降低。肾复康小鼠灌胃半数致死量(LD₅₀)为(174.34±36.74)g/kg，与雷公藤浸膏雌性小鼠灌胃LD₅₀的(29.73±6.46)g/kg和雄性小鼠灌胃LD₅₀的(101.74±10.93)g/kg比较，肾复康复方中药对雷公藤具有一定的减毒作用。

中图分类号：R285.5文献标识码：A

文章编号：1007-3213(2000)04-0342-06

Pharmacological Action of Shenfukang on Rat Model with

Nephritis Induced by Cationized Bovine Serum Albumin

ZHOU Jiuyao,LIAO Xuezhen,LI Rui

（Dept. of Pharmacology, Guangzhou University of TCM , Guangzhou 510405,China）

ABSTRACT: Shenfukang is an effective formula for glomerulonephritis applied in the first affiliated hospital of Guangzhou University of TCM. It is composed of Radix Folium seu Flos Tripterygii wilfordii, Radix Astragali seu Hedysari, Radix Notoginseng, Herba Leonuri, etc.. Glomerulonephritis rat model was induced by cationized bovine serum albumin (C-BSA) according to Border's method and was used to observe the pharmacological action of Shenfukang. The results showed that Shenfukang can eliminate urine protein, increase the levels of serum protein, albumin (A), globulin (G) and A/G ratio, and decrease the contents of serum cholesterol, creatinine and urea nitrogen. It can also counteract the increase of plasma TXB₂ and the decrease of plasma 6-keto-PGF_1α. LD₅₀ of Shenfukang for mice is 174.34±36.74?g/kg which is much larger than that of Tripterygium wilfordii (29.73±6.46?g/kg for female mice and 101.74±10.93?g/kg for male mice). It is indicated that Shenfukang exerts a protective effect on renal function and reduces toxicity of Tripterygium wilfordii.

Key words:@SHENFUKANG/pharmacology;GLOMERULONEPHRITIS/TCD therapy;TRIPTERYGIUM WILFORDII/ther. use;DISEASE MODELS，ANIMAL；RATS

在临床实践中，肾小球疾病是一种常见病，也是导致终末期肾病(ESRD)最常见的病因。在我国，导致ESRD的病因中以肾小球疾病为主，占54.4%，其中肾小球肾炎却占48.1%^［1，2］。尿蛋白是慢性肾小球肾炎诊断和疗效判定的主要指标，近年消除尿蛋白仍以激素或免疫抑制剂为主要治疗手段，但对难治性肾病疗效欠佳，缓解率也只在30%左右，且停药后尿蛋白的反跳率高达50%～70%，有的病人还因禁忌症不能应用这些药物^［3］。因此，寻求消除肾性尿蛋白并有维护肾功能的药物是一个重要的课题。雷公藤是治疗慢性肾小球肾炎的常用中药，但毒副作用较多^［4］。肾复康是我校第一临床医学院洪钦国教授30多年用于治疗肾小球肾炎的经验方，以雷公藤为君药，取其清热解毒、祛风胜湿、活血消肿的功效，配以黄芪健脾益气，三七、益母草活血化瘀，具有疗效高(观察70例，总有效率高达77.1%，其中治愈率达22.9%)、副作用小、复发率低等优点^［5］。本课题采用阳离子化小牛血清白蛋白(C-BSA)致膜性肾小球肾炎模型研究肾复康的药效，并初步探讨了其作用机理。另外，还对肾复康进行了急性毒性试验。

1材料

1.1试验药物

肾复康由广州中医药大学中药学院制剂工艺研究室提供(以下简称肾复康)，每克浸膏粉含71.428g生药，批号：980111；单味雷公藤浸膏粉由广州中医药大学中药学院制剂工艺研究室提供，每克浸膏粉含50.0g生药；雷公藤多苷片：上海医科大学红旗制药厂产品，批号：971001；醋酸泼尼松片：仙居制药股份有限公司产品，批号：9805161。弗氏不完全佐剂来自Sigma公司；小牛血清白蛋白(BSA)来自北京天象人生物工程有限责任公司，PR0025-3。异硫氰酸荧光素IgG(FITC-IgG)来自北京生物制品公司，异硫氰酸荧光素C₃(FITC-C₃)来自Capple Co.USA;无水乙二胺(EDA)、碳化二亚胺(EDC)均为分析纯试剂。血栓素B₂(TXB₂)和6-酮基-前列腺素F_1α(6-Keto-PGF_1α)试剂盒，购自天津四方化工有限公司，用放射免疫分析法(TXB₂：γ=0.9991，CV=3.8%，6-Keto-PGF_1α：γ= 0.9992,CV=2.6%)。其他生化测试试剂来自南京建成生物工程研究所。

1.2实验动物

SD大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供。NIH小鼠由广东省卫生厅实验动物中心提供。

2方法

2.1肾复康对C-BSA肾炎大鼠模型的治疗作用

2.1.1阳离子化小牛血清蛋白(C-BSA)的制备参考Border方法^［6］，用67mL EDA加500mL双蒸水，然后缓慢加入6mol/L盐酸350mL，调pH至4.75，保持溶液在25℃；将5gBSA溶解于25mL双蒸水，再将此溶液缓慢加入EDA溶液，不断搅拌，使液温恒定25℃，加入1.8gEDC；2h后用pH为4.75的醋酸缓冲液30mL终止反应，即得等电点提高的C-BSA溶液。用4℃双蒸水透析72h(每3至5h换水)C-BSA溶液，冷冻干燥，得等电点(PI)为8.4以上的C-BSA粉剂，保存于-20℃备用。

2.1.2C-BSA肾炎大鼠模型的复制及实验分组参考Border方法^［6］进行模型复制。选取雄性SD大鼠70只，体重150～200g，随机分为7组。除正常对照组10只，不作任何处理，正常饲养外，其余各组大鼠均分别取C-BSA1.0mg与弗氏不完全佐剂0.1mL混均，大鼠皮下多点注射预免疫。每只大鼠预免疫1周后，每只注射C-BSA，先腹腔注射1周，第1天至第7天的剂量依次为1.0mg、1.0mg、1.0mg、1.5mg、1.5mg、2mg、2mg。第2周起，每次在灭菌条件下尾静脉注射2.5mgC-BSA，同时灌胃给药，中药阳性药组给予雷公藤多苷，西药阳性药组给予醋酸泼尼松，肾复康组给予高、中、低剂量的肾复康，正常组与模型组给予等容量20mL/kg的生理盐水。

2.1.3观察项目(1)生化指标：分别在给药第14天和第32天收集各大鼠24h尿液，进行尿蛋白定量实验；药后32d，从眼眶静脉取血，检测血清总蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白(A/G)、胆固醇及血清肌酐和尿素氮含量。(2)肾组织免疫学、组织化学和超微结构观察：于药后32d活杀大鼠，取肾组织分成3块，第一块取肾皮质，即刻恒温冷冻切片经冰冻切片制成5μm的切片，进行免疫荧光染色，采用直接法，荧光抗体为FITC-IgG、FITC-C₃抗体。第二块组织取肾皮质，20%(V/V)甲醛固定，乙醇脱水，石蜡包埋，制成3μm切片，分别进行HE染色，作光镜观察。第三块组织取肾皮质，2.5%(V/V)戊二醛前固定，1%(m/m)锇酸后固定，Epon618包埋，超薄切片，1%(m/m)醋酸铀染色，进行透射电镜(HITACHI-H600)观察。各组均取最具特征性的两个部位摄象以作对照。

2.1.4统计方法所有结果进行t检验。

2.2肾复康急性毒性试验

选取NIH小鼠150只，体重为18～22g，肾复康组50只，雌雄各半；雷公藤浸膏组100只，分为雌性组、雄性组各50只(预试时发现雌雄性别对雷公藤的毒性反应有较大差异，故分开给药)。空腹12h，分别随机分为5个等比剂量组，肾复康组和雷公藤雌性组均按40mL/kg的容积，雷公藤雄性组按20mL/kg的容积灌胃给药，给药后连续观察7d，并记录小鼠的一般情况、急性毒性反应及死亡情况。死亡小鼠及7d后颈椎脱臼处死小鼠，解剖并肉眼观察各脏器病理变化。

3结果

3.1肾复康对C-BSA肾炎大鼠模型的治疗作用

3.1.1肾复康对C-BSA致膜性肾炎模型尿蛋白的作用

结果表明，高、中、低剂量的肾复康在药后14d和32d均显著消除C-BSA肾炎模型大鼠尿蛋白，与模型组比较P＜0.01。高、中剂量的肾复康作用与雷公藤多苷组、醋酸泼尼松组相近。见表1。

3.1.2肾复康对膜性肾炎模型血清生化指标的影响结果表明，高、中剂量肾复康在药后32d明显升高C-BSA肾炎模型大鼠血清总蛋白和白蛋白含量(P＜0.01～0.05)。但对球蛋白、白蛋白/球蛋白(A/G)比值影响不显著(P＞0.05)，见表2。高、中低剂量的肾复康显降低C-BSA肾炎模型大鼠胆固醇含量(P＜0.01)，降低血清肌酐和尿素氮含量(P＜0.01～0.05)，对肾功能具有保护作用，见表3。各项血清生化指标的改善均与雷公藤多苷组、醋酸泼尼松组相似。

3.1.3肾复康对C-BSA肾炎大<