摘要：病毒宁滴剂为广州中医药大学热带医学研究所和北京市宇维生科贸技术有限公司联合研制的、主要用于外感风热初起型感冒的中药滴鼻制剂，该药由柴胡、甘草等药组成。为探讨其抗病毒作用，从体内外抗病毒实验对病毒宁滴剂抗呼吸道病毒作用进行了研究。结果显示：在5种培养细胞上病毒宁滴剂20g/L浓度组对7种呼吸道病毒毒株均有明显的抑制病毒致细胞病变的作用。体内试验表明，病毒宁滴剂100g/L浓度滴鼻0.05mL/(鼠·次)，每天2次，对流感病毒引起的小鼠肺炎实变有明显的抑制作用，200g/L、100g/L浓度组能抑制流感病毒增殖(与病毒对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)，200g/L浓度组能延长流感病毒感染的小鼠生存时间。

中图分类号：R373.1

文献标识码：A

文章编号：1007-3213(1999)02-0130-05

Antiviral Effects of Bingdu Ning Drop in Respiratory Tract

DENG Xuelong¹，ZHUYutong¹,HUANG Zhengyan²，FU Linchun¹，

LI Yushu³，LIU Ni¹，HU Yingjie¹,LI Guoqiao¹

(1.Tropical Medigine Institute, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China; 2.Dept. of Electron Microscope, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405 ,China; 3.Yuwei Bioscience of Beijing Trade Ltd. Co，Beijing 100850， China)

AbstractAntiviral effects of Bingdu Ning Drop(BND) in the respiratory tract were studied both in vivo and in vitro. The experiment in vitro showed that BND at the concentration of 20mg/mL obviously inhibited the cytopathy of seven kinds of respiratory tract virus strains cultured in five kinds of culture cells.

Experiments in vivo showed that BND at the concentration of 100g/L for the intranasal treatment (0.05mL twice daily) markedly inhibited the lung consolidation of mice with pneunonitis caused by the infection of influenza virus. BND at the concentrations of 200g/L and 100g/L significantly inhibited the proliferation of influenza virus (P＜0.05 or P＜0.01) as compared with the control group, and prolonged the survival time of mice infected with influenza virus at the concentration of 200g/L.

Key words@BINGDU NING DROP/ pharmacology;@BINGDU NING DROP/AD；COMMON cOLD/TCD therapy;

PUNGENT-COOL DIAPHORETIC AGENT/ther. use;ORTHOMYXOVIRUSES TYPE A/drug effects;

RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUSES/drug effects;RHINOVIRUS/drug effects; MICE

引起感冒病因较多，常见如鼻病毒、流感病毒、腺病毒等，而合成药中尚无理想广谱的能消除症状的抗病毒药物问世^［1］。病毒宁滴剂是由广州中医药大学热带医学研究所和北京市宇维生科贸技术有限公司联合研制，该药由柴胡、甘草等药组成，具有辛凉解表，宣肺通窍之功效，主要用于外感风热初起，症见恶寒发热，鼻塞，喷嚏，咽干咽痛等。为研究其抗病毒作用，我们选择了包括鼻病毒在内的7种呼吸道病毒，从体外、体内进行了抗病毒作用研究。

1实验材料

1.1药物病毒宁滴剂由广州中医药大学热带医学研究所药化制剂室提供，批号 961001，病毒宁所用浓度均按每升相当于含生药量多少克表示。病毒唑由湖北省医工所提供，批号 950303。

1.2动物NIH小白鼠由本校实验动物中心提供，批号：医动字第26-026，雌雄不拘，体重14～16g。

1.3毒种

1.3.1 鼻病毒鼻病毒R14型由中国医学科学院病毒所分赠。原毒种为美国ATCC提供，在国家鉴定之KMB₁₇双倍体细胞中传代，于33℃，5%CO₂恒温箱培养。

1.3.2流感病毒流感病毒FM₁株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及豚鼠红血球血凝法来判断其滴度，在35℃，5%CO₂培养箱培养。

1.3.3呼吸道合胞病毒毒种由广州市儿童医院病毒实验室提供，为RSV-N₃株，于Hep-2细胞或Hela细胞上扩增，并进行测定。

1.3.4腺病毒3型毒种来源同呼吸道合胞病毒，并于Hela细胞上传代，滴定与检测。

1.3.5疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型毒种来源同呼吸道合胞病毒，在BHK细胞上传代与检测。

1.3.6副流感病毒3型毒种来源同呼吸道合胞病毒，于Hela细胞及KMB₁₇细胞上用豚鼠红血球血吸附法检测。

1.4细胞人肺KMB₁₇原代细胞株第18代，由中国医学科学院昆明生物制品研究所分赠；狗肾细胞株(MDCK)，由广东省防疫站病毒室赠送；地鼠肾细胞株(BHK)，由广州市儿童医院病毒实验室提供；Hep-2细胞和Hela细胞，为本所病毒实验室保存细胞株。

1.5免疫血清用鸡胚尿囊液传代的流感病毒 FM₁ 株免疫家兔，获得高效价的免疫血清 (血凝抑制效价＞1∶1280)，置-40℃冰箱保存，用前测定抗体效价。

1.6标记抗体由华美公司的羊抗兔IgG-FITC，置4℃保存，用时以1∶15稀释。

1.7细胞培养液和维持液各为含10%、2%小牛血清、100kU/L青霉素、链霉素的DMEM(GIBCOBRL公司产品)。

2方法

2.1对病毒致细胞病变的体外抗病毒作用

以上抗病毒试验在96孔微量板上进行，每孔0.1mL，细胞数为5×10⁵个，长成单层后，将病毒宁药液用维持液稀释成不同浓度，抛掉原培养液后将不同浓度病毒宁药液加入细胞孔中，0.1mL/孔，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞无毒界限。通过毒性试验观察到病毒宁20g/L和病毒唑1g/L浓度对5种细胞生长无明显影响，同时在相应敏感细胞上测定攻击病毒之TCID₅₀。试验时设病毒对照、细胞对照、药物毒性对照及三氮唑核苷(病毒唑)对照，置33℃或37℃CO₂培养箱内，每天在倒置显微镜下观察病变并记录。当病毒对照孔细胞出现+++病变时，继续观察4d则终止。细胞出现病变的程度按以下6级标准记录：-：细胞生长正常，无病变出现；±：细胞病变少于整个单层细胞的10%；+：细胞病变约占整个单层细胞的25%；++：细胞病变约占整个单层细胞的50%；+++：细胞病变约占整个单层细胞的75%；++++：细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。

2.2对小鼠流感病毒性肺炎的影响

将体重为14～16g的NIH小鼠随机分组，药物组于感染前1d开始滴鼻给药，0.05mL/次，2次/d，连续5d，对照组给予同容积蒸馏水滴鼻。各组在乙醚轻度麻醉下感染流感病毒鼠肺适应株FM₁15LD₅₀，感染后96h处死，称体重后取肺称重，逐个算出肺指数值(每100g体重的肺质量，即肺指数=肺质量/体重×100)和肺指数抑制率［(病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/病毒对照组平均肺指数×100%］，与对照组比较进行组间t检验。

2.3对小鼠体内流感病毒增殖的影响

在乙醚轻度麻醉下以流感病毒FM₁1000LD₅₀量感染小鼠，人工感染前1d开始滴鼻给药，2次/d， 0.05mL/只。在感染后48h，解剖取肺，固定，制成组织切片，脱腊，先以 FM₁兔免疫血清(HAI 1∶1280)浸染，冲洗后再加1∶15稀释的羊抗兔IgG荧光抗体(华美生物工程公司生产)，于荧光显微镜下观察整个切片所有的细支气管数量，计算含有特异性荧光颗粒的细支气管数量，计算各组细支气管内含特异性荧光颗粒百分率(出现特异性荧光颗粒的细支气管数量/计数的细支气管总数×100%)，荧光阳性率高表明病毒颗粒增殖多，并进行统计学处理^［7］。

2.4对小鼠体内感染流感病毒的死亡保护和延长病鼠生命的作用

将小鼠随机分为病毒对照组和病毒宁200g/L组，分别以FM₁2LD₅₀滴鼻感染，给药组自感染病毒前1d开始到感染后4d，共滴鼻给药0.05mL/次，2次/d，病毒对照组滴鼻给予等量蒸馏水，逐日观察动物发病和记录死亡数，共观察14d，计算死亡保护率［(对照组死亡率-给药组死亡率)×100%］、延长生命率［(给药组平均存活日数-对照组平均存活日数)/对照组平均存活日数×100%］。

3结果

3.1对病毒致细胞病变的体外抗病毒作用

表1结果表明：在病毒宁20g/L浓度下，即较临床应用浓度稀释5倍情况下仍可对鼻病毒、流感病毒产生较好的抑制病变作用，较病毒唑更具广谱作用。该实验重复2次，结果与表1完全一致。