摘要：为探讨中药祛风清肺口服液治疗“风热喉痒咳嗽”的免疫学机理，用天花粉致敏大白鼠，分别观察各组致敏大鼠抗血清对正常大鼠皮肤被动过敏反应(PCA)的影响、模型组大鼠抗血清对各组大鼠(包括给药组与对照组)皮肤PCA的影响以及祛风清肺口服液对大鼠腹腔肥大细胞间接释放组织胺的影响。结果显示：皮内注射祛风清肺口服液低、高剂量组大鼠抗血清的大鼠皮肤皮片浸液的吸光度值比模型组降低(P＜0.01或P＜0.001)；注射模型组大鼠抗血清后，祛风清肺口服液低、高剂量组大鼠背部皮肤注射点皮片浸液光密度值比正常组降低(P＜0.05)；祛风清肺口服液能抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞释放组胺，与正常对照组相比，差异有显著性(P＜0.01)。结果表明祛风清肺口服液有抗Ⅰ型变态反应作用，为其治疗“风热喉痒咳嗽”提供了一定的免疫药理学基础。

中图分类号：R593.1文献标识码：A

文章编号：1007-3213(1999)01-0045-04

An Experimental Study of Qufeng Qingfei Oral Liquid in Antagonizing

Type I Allergy

HU Xue-jun

(Central Laboratory, the Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510120,China)

LUO He-sheng

( Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405,China)

WU Qian

( Guangdong Provincial Pharmaceutical Institute, Guangzhou 510400,China)

abstract：The immunological mechanism of Qufeng Qingfei Oral Liquid(QQOL) in treating wind-heat type throat itching and cough was explored in this study. Five types of anti-serum (AS) of rats,i.e, AS of normal rats, AS of rats administrated with high and low dosages of QQOL(AS1,AS2),AS of model rats (AS3) and AS of rats administrated with cyclophosphamide, were prepared first.The effects of QQOL on passive cutaneous anaphylaxis (PCA) of normal rats injected with various types of AS, on PCA of rats in the treatment and control groups injected with AS3 and on the indirect release of histamine of celiac mastocyte were observed.The results showed that:(1) the absorption value of skin graft infusion of normal rats injected with AS1 and AS2 was lowered markedly(P＜0.01or P＜0.001) as compared with that of rats injected with AS3;(2) After injection of AS3,the absorption value of rats in the treatment groups (with high and low dosages of QQOL respectively) was also lowered markedly (P＜0.05) as compared with that in the normal group;(3)Indirect release of histamine of celiac mastocyte was inhibited in rats sensitized by Radix Trichosanthis (P＜0.01) as compared with that in the control group. It is suggested that QQOL possesses an antagonistic effect on Type I allergy and this will supply a certain immunopharmacological basis for the treatment of wind-heat type throat itching and cough.

Key words:@QUFENG QINGFEI ORAL LIQUID/ther.use;GOUGH/TCD ther.;DISPELLING WIND;

CLEARING LUNG;HYPERSENSITIVITY,IMMEDIATE/immunology;MAST CELLS/drug eff.;

HISTAMINE LIBERATION/drug eff.

临床上外感风热咳嗽病人多伴有喉痒，但这未引起足够重视。笔者认为，外感风热是“风热喉痒咳嗽”发生的直接原因；结合现代医学研究，该病多有过敏因素存在，与Ⅰ型变态反应有关。用祛风清肺口服液治疗该病，取得良好疗效^［1］。本文研究该口服液的抗Ⅰ型变态反应作用，以探讨其作用机理。

1实验材料

1.1药物及主要试剂

祛风清肺口服液(由麻黄、甘草、桃仁、桔梗、蝉蜕、石膏、大枣等组成)由广州中医药大学第一附属医院制剂室提供，生药含量1.93 kg/L，批号951023。组织胺：中科院生物化学所提供，批号911108。OPT(邻苯二甲醛)： Fluka 产品。伊文思蓝：上海化学试剂采购供应站进口分装。抗原：天花粉(1989年粗品，广东省药物研究所提供)。佐剂：市售4%氢氧化铝凝胶，用时以 500 mg 天花粉粗品溶于 60 mL 氢氧化铝凝胶中(含天花粉粗品 8.3 g/L)。

1.2动物

SD 系大白鼠由广东省卫生厅医用动物场购入(合格证号：96A02)。

1.3仪器

上海第三分析仪器厂生产的 722 型光栅分光光度计；日本岛津RF-510荧光分光光度计。

2实验方法

2.1祛风清肺口服液对大鼠被动皮肤过敏反应实验(PCA)^［2］

2.1.1抗血清的制备选健康SD大白鼠20只，体重100～200 g，随机分为5组。除正常对照组外，每只大鼠双前肢皮下注射天花粉粗品氢氧化铝混悬液共0.4 mL。 3 d后，双后肢再同样免疫1次。同时，阳性对照组腹腔注射环磷酰胺溶液 70 mg/kg；其余各组灌胃给药：祛风清肺口服液低剂量组(简称低剂量组，11.6 g/kg)、祛风清肺口服液高剂量组(简称高剂量组，23.2 g/kg)、正常组与模型组(天花粉致敏但未灌服中药)给予等量的生理盐水。第1次免疫后 15 d，各组大鼠颈动脉放血处死，离心得抗血清，并将每组中各个大鼠血清混合。

2.1.2PCA预试选大鼠4只，体重 150～200 g，剪去背部的毛，背部每点分别按下列浓度皮内注射模型组混合抗血清 0.1 mL (1∶1、1∶10、1∶20、1∶40)， 48 h 后进行抗原攻击，股静脉注射天花粉粗品 10 mg/kg (天花粉粗品用 1% 伊文思蓝溶液配成 1 mg/kg)。 20 min 后断头处死动物，翻转背部皮肤，观察效价。结果发现抗血清(1∶1、1∶10)注射点处有明显蓝斑。

2.1.3PCA正式实验

2.1.3.1各组大鼠抗血清对正常大鼠皮肤PCA的影响选大鼠 40只，均分为 5 组。各组大鼠背部每点各皮内注射 0.1 mL所制备的混合抗血清。 48 h 后，同预试中方法攻击， 20 min 后，断头处死动物，剪开皮片观察，并用直径 10 mm 打孔器取下皮片，剪碎，加入 3 mL 丙酮-生理盐水(7∶3)混合溶液，浸泡过夜，3 000 r/min离心 10 min ，取上清液，用 722 型分光光度计在波长 610 nm 处测光密度(D，原称OD值)。

2.1.3.2模型组抗血清对不同组大鼠皮肤PCA的影响选大鼠 32 只，均分为 4 组。阳性对照组腹腔注射酮替芬 7.5 mg/kg，高、低剂量组灌胃给药，药量同前，正常组予等量生理盐水。大鼠背部每点各皮内注射 0.1 mL所制备的模型组混合抗血清。48 h后，同预试中方法攻击，仅阳性药物组在攻击前，用大鼠另一条股静脉注射酮替酚溶液 7.5 mg/kg，20 min后，断头处死动物，剪开皮片观察，其余步骤同2.1.3.1。

2.2祛风清肺口服液对大鼠腹腔肥大细胞间接释放组织胺(histamine)的实验

2.2.1大鼠腹腔肥大细胞释放组胺试验^［3］取健康 SD 大白鼠4只，体重 150～220 g，雌雄各半。处死后腹腔注射台氏液(Tyrod's液，无钙，37℃) 10 mL/只，轻揉 90 次，吸出全部腹腔液于含 5 U肝素的 10 mL试管中，置水浴中，4℃，600 r/min离心 15 min，倾去上清，用冷 Tyrod's液再洗1次，同样离心，4管合并，以 7.0 mL Tyrod's液悬起细胞。在冰浴中将上述肥大细胞悬液(0.1 mL/管)、模型组混合抗血清(0.1 mL/管)分别加入各组小试管中，其中口服液(低)组已加入药物0.1 mL(1.93 kg/L)、口服液(高)组已加入药物0.1 mL(3.86 kg/L)、阳性药物组已加入酮替芬 0.1 mL (0.1 g/L)，正常对照组予0.1 mL生理盐水。孵育 5 min，摇匀，每管加天花粉 (10 g/L)0.1 mL。然后，置 37℃温育 15 min，立即置冰浴中中止反应。 4℃?2?500 r/min离心 20 min，分出上清和细胞沉淀。分别提取细胞内、外的组胺。上清中加 0.1 mol/L HCl 0.1 mL 煮沸 5 min，2?500 r/min，离心 15 min，取上清用于测定细胞外组胺；往细胞沉淀中加入 1.0 mL 生理盐水和 0.1 mol/L HCl 0.1 mL，亦煮沸 5 min，2?500 r/min离心 15 min，取上清用于测定细胞内组胺。每个数据均为平行复管的平均数。按下式计算组胺释放率(p_释放)和抑制率(p_抑制)。

2.2.2组胺测定按文献［4］方法处理样本，用荧光分光光度仪(岛津RF-510型)在发射波长 448 nm，荧光波长 350 nm处测定各管荧光强度(fluorescence intensity ,FI)。

2.2.3Histamine 标准曲线称组胺11.1 mg于100 mL0.1mol/L HCl中，形成10^-3 mol/L组胺，然后吸0.1 mL于 100 mL 0.1 mol/L HCl中 ，形成10^-6 mol/L(即含111 μg/L)，以后对半稀释，测