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中图分类号：R284.1文献识别码：A
文章编号：1007-3213(1999)01-0052-03
Isolation and Identification of Vitexin and Isovitexin in Herba Cajani
LIN LIWEI MinLIU Xiu－fenLIU Yan－ping
(1. Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China;
XIE NingCHEN Zi－hua
(Chinese Pharmaceutical University, Nanjin 210009,China)
abstract:This paper reports the isolation of vitexin and its isomeric compound (isovitexin) from Herba Cajani by the methods of solvent, crystal and column chromatography. Their structures have been determined by infrared spectroscopy, ultraviolet spectroscopy, mass spectroscopy,13C nuclear magnetic resonance spectroscopy and 1 H nuclear magnetic resonance spectroscopy. And isovitexin was first separated from Herba Cajani.
Key words: CAJANUS CAJAN L.MILLSP;TCD IDENTIFICATION;FLAVONOID GLYCOSIDE/isol.；
@VITEXIN/isol.；@ISOVITEXIN/isol.
木豆Cajanus cajan L.Millsp为豆科植物，我国海南、广东等省有栽培［1］。民间将木豆嫩茎叶用于止血、止痛［2］，亦用于抗感染［3］。陈迪华等［4］曾从木豆叶中分离得到牡荆甙、水杨酸等抑菌成分。作者在对木豆黄酮类成分进行研究时，分离出两个极性颇为接近的黄酮甙类成分，经波谱分析确定为牡荆甙(vitexin)及其同分异构体异牡荆甙(isovitexin)，其中异牡荆甙系首次从木豆中分离得到。
1实验部分
1.1仪器、试剂与药材
PHMK-79型显微熔点测定仪(未校正)；UV-300型紫外—可见分光光度计(岛津)；IR-400型红外分光光度计(岛津)，VGZAB-HS质谱仪；Bruck 300型核磁共振仪；低压柱层析系统(中国药科大学玻璃仪器厂)；定量毛细管(Drummond USA)。
硅胶G(青岛海洋化工厂)、硅胶H(青岛海洋化工分厂)；乙酸乙酯、乙醇、丙酮、甲酸、甲苯等试剂(均为AR级)。
木豆嫩茎叶采自海南省琼山市，经本校药用植物鉴定教研室符红副教授鉴定为豆科植物木豆Cajanus cajan L.Millsp。
1.2提取、分离
木豆嫩茎叶干品1.8 kg，切碎后以70% 乙醇18 000 mL渗漉，得醇提液 16 000 mL。减压浓缩至约 600 mL，冷却后放置 3 h ，倾出上清液，以乙酸乙酯 4 000 mL分次萃取。酯提液浓缩至约 500 mL(部位Ⅰ)，放置过夜，有棕黄色沉淀析出，滤取沉淀，再以甲醇适量加热溶解(部位Ⅱ)，进行重结晶。得黄色粗结晶，以甲醇回流溶解(部位Ⅲ)，部位Ⅲ以干法上硅胶柱，以乙酸乙酯—丙酮—乙醇(370∶200∶100)洗脱，依次得到结晶1和结晶2，两者分别以甲醇—氯仿重结晶，供作鉴别等用。
1.3薄层色谱
依次将部位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及结晶1、2的甲醇溶液点于硅胶G-CMC-Na薄板上，分别以三个展开系统：甲苯—乙酸乙酯—丙酮—甲酸—水(2.5∶4.5∶2.5∶0.85∶0.6)、甲苯—乙酸乙酯—丙酮—甲酸—水(2.2∶4.8∶2.5∶0.8∶0.6)、甲苯—乙酸乙酯—丙酮—甲酸—水(2.0∶4.6∶2.7∶0.85∶0.75)上行展开 8 cm，烘干后以 1% 三氯化铁乙醇溶液显色。结果见图1～3。
由图1～3可见，部位Ⅰ中除含结晶1和结晶2外，尚含许多较两者极性大或小的酚性物质。经结晶法处理后，部位Ⅱ中基本除去了极性小于结晶1的成分；再经甲醇重结晶法处理后，部位Ⅲ中又除去了极性大于结晶2的成分，得到仅含结晶1和结晶2的混合粗结晶。此粗结晶经硅胶柱层析处理，即可得到纯度较高的结晶1和结晶2。
图1木豆薄层色谱图(系统1)
1.部位Ⅰ， 2.部位Ⅱ， 3.部位Ⅲ，
4.结晶1， 5.结晶2
图2木豆薄层色谱图(系统2)
1.部位Ⅰ， 2.部位Ⅱ， 3.部位Ⅲ，
4.结晶1， 5.结晶2
图3木豆薄层色谱图(系统3)
1.部位Ⅰ， 2部位Ⅱ， 3.部位Ⅲ，
4.结晶1， 5.结晶2
1.4结构测定
结晶1为黄色沙晶(MeOH-CHCl3)，mp260～262℃；UV λMeOHmax：270，332；IR(KBr)：3300～3100(-OH)，1652(-C=O)，1614、1569(苯环)Cm-1；FAB-Ms：433(M++1)； 1 HNMR(DMSD-d6)δ：13.21(1H，s，5-OH，加D2O消失)，10.85，10.36(各1H，s，加D2O消失，4′-OH，7-OH)，8.04(2H,d，J=8.6Hz，2′-H，6′-H)，6.94(2H，d，J=8.5Hz，3′-H，5′-H)，6.81(1H，s，6-H)，6.28(1H，s，3-H)，4.66(1H，d，J=10.0Hz，glucosyl1″-H),3.80～3.20(m,glucosyl H);13CNMR(DMSD-d6)δ：164.10(C-2)， 102.59(C-3)，182.08(C-4)，155.82(C-5)，98.33(C-6)，162.61(C-7)，104.24(C-8)，160.59(C-9)，104.79(C-10)，121.80(C-1′)，128.70(C-2′，6′)，115.99(C-3′，5′)，160.10(C-4′)，80.69(C-1″)，75.21(C-2″)，73.11(C-3″)，71.98(C-4″)，81.68(C-5″)，62.67(C-6″)。结晶1 MS、1HNMR、13CNMR、UV及IR谱均提示为牡荆甙，数据与牡荆甙的文献报道一致［4，5］，故鉴定为牡荆甙。
结晶2为黄色针晶(MeOH-CHCl3)，mp223～224℃；UV λMeOHmax：268，346；IR(KBr):3300～3100(-OH)，1651(-C=0)，1606、1510(苯环)Cm-1；FAB-Ms：433(M++1)；1HNMR(DMSD-d6)δ：13.17(1H，s，5-OH，加D2O消失)，10.82、10.05(各 1H，s,加D2O消失，4′-OH，7-OH)，8.03(2H，d，J=9.2Hz，2′-H，6′-H)，6.94(2H，d，J=9.2Hz，3′-H，5′-H)，6.64( 1H，s，8-H)，6.27(1H, s,3-H),4.82(1H，d,J=9.0Hz，glucosyl 1″-H)，3.85～3.30(m,glucosyl H)；13CNMR(DMSD-d6)δ∶163.82(C-2)，102.76(C-3)，182.25(C-4)，156.68(C-5)，108.10(C-6)，163.83(C-7)，94.08(C-8)，161.28(C-9)，104.00(C-10)，121.18(C-1′),128.41(C-2′，6′)，116.12(C-3′，5′)，160.00(C-4′)，78.86(C-1″)，73.56(C-2″)，71.04(C-3″)，70.76(C-4″)，81.22(C-5″)，61.49(C-6″)。由于结晶 2 Ms示其分子量为432，与牡荆甙相同；其UV和IR谱也与牡荆甙相似，从而表明结晶2与牡荆甙结构相类似。比较两者的1HNMR和13CNMR数据，均显示为黄酮单糖甙，而且两者B环和C环取代相同。可见结晶2为结晶1的化学异构体；与异牡荆甙的文献报道数据［5～7］相比较，确定结晶2为异牡荆甙。
2讨论
木豆中含有多种酚性物质，通过溶剂法和重结晶法可以将牡荆甙、异牡荆甙与其他成分相分离。牡荆甙与异牡荆甙为同分异构体，其结构上的差异仅为前者葡萄糖接于8位碳上，后者是接于6位碳上(图4)。
图4牡荆甙与异牡荆甙的结构式
此差异影响了其极性，使得牡荆甙极性略小于异牡荆甙，故可应用硅胶柱层析法等将这两个异构体相分离。
牡荆甙与异牡荆甙互为同分异构体，其UV、IR、Ms谱基本相同。但在13CNMR谱中牡荆甙C-6吸收值为98.33，而异牡荆甙C-6吸收值为108.10；前者C-8吸收值为104.24，而后者C-8吸收值为94.08；其差异均在 10 μg/g 左右，其他位置C的吸收值均较接近。两者1HNMR谱主要差异也在于，牡荆甙在δ6.81处有6-H的吸收，而异牡荆甙则在δ6.64处有8-H的吸收。可见葡萄糖在A环碳上连接的位置，正是影响牡荆甙和异牡荆甙波谱学特性的主要因素。
作者简介：林励，男，副教授
