摘要：运用化疗荷瘤小鼠模型，测胸腺和脾指数，³H-TdR掺入法测胸腺细胞增殖，中性红比色法测腹腔巨噬细胞吞噬功能，计算抑瘤率。结果：黄芪S₄加环磷酰胺组与环磷酰胺组比较，胸腺、脾指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能、胸腺细胞增殖均有显著差别。单用黄芪S₄亦能促进荷瘤小鼠胸腺细胞增殖，并对S₁₈₀实体瘤有抑制作用，抑瘤率为35.78%。研究表明黄芪S₄与化疗药合用能改善化疗造成的免疫抑制，且有抑瘤作用。

Effects of Astragalus S₄ On the Cellular Immune Function of Tu morigenic Mice in Chemotherapy and the Inhibitory Action

Shi Renbing(石任兵),Liang Xiaoqiu(梁晓秋),Liang Jichun(梁吉春)，et al.

(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)

ABSTRACT: Examine thymus and spleen index of the mice models, dete rmine thymocyte multiplication by ³ H-TdR incorporation, and phagocytic func tion of celiac macrophage by neutral-red colorimetric method. Then calculate the tum o r inhibitory rate. Results: Compare the group of Astragalus S₄ (AS) and cycl opho sphamide with the control group of cyclophosphamide, significant difference was showed. Using AS alone can also promote thymocyte multiplication of the tumorig enic mice and have some inhibitory action， the rate was 35.78%. Conclusion: A S combined with chemotherapy drugs can ameliorate the immunological suppression by chemotherapy and have tumor inhibitory action.

KEY WORDS: Astragalus S₄; Tumorigenic Mice; Immunologic functio n; Inhibitory action

中药黄芪(AstragalusmembranaceusBge)对机体免疫系统的影响已有报道^［1］，认为其具有广泛的增强免疫功能的作用。接受化、放疗的肿瘤患者，常存在免疫功能低下，使治疗难以继续进行。本实验采用从黄芪中筛选分离出的具有显著对抗环磷酰胺对小鼠造成的白细胞降低作用的有效成分黄芪S₄，运用化疗荷瘤小鼠模型，探索黄芪S₄对其免疫功能的影响及抑瘤效果。

1实验材料

1.1药品与试剂

黄芪S₄由北京中医药大学药化室研制提供。环磷酰胺(CY)：中美合资山西泰盛制药有限公司、批号：970401；RPMI1640培养基：GIBCO公司，1640培养液中加青霉素100IU/mL、链霉素100μg/mL、谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸钠1mmol/L及10%的灭活小牛血清。ConA：Sigma公司产品；³H-TdR：北京中国原子能科学研究院产品；闪烁液：PPO5g、POPOP0.3g、无水乙醇200mL、甲苯800mL；液体闪烁计数器BeckmanLs3801德国产。

1.2动物与瘤株

昆明种小鼠，雄性，体重18～22g，衡阳医学院实验动物部提供。S₁₈₀小鼠肉瘤实体型：中国医学科学院上海药物研究所提供。

2实验方法

2.1肿瘤接种^［2］

颈椎脱臼处死瘤源动物，无菌操作取出瘤块，剪成2～3mm³的小块，用套管针接种于实验动物右前肢腋窝皮下。

2.2动物分组与给药

将动物随机分成4组，每组10只：肿瘤对照组(TC)，黄芪S₄组(AS₄)，环磷酰胺组(CY)，黄芪S₄加环磷酰胺组(AS₄±CY)。分别每日灌服生理盐水0.3mL、黄芪S₄0.3mL(500mg/kg)、环磷酰胺0.3mL(30mg/kg)和黄芪S₄加环磷酰胺0.3mL。连续10d，次日颈椎脱臼处死小鼠。

2.3³H-TdR掺入法测胸腺细胞增殖

无菌摘取胸腺，常规制备胸腺细胞悬液，调细胞浓度为5×10⁹L^-1，将细胞加到96孔培养板中，100μL/孔，培养液中加ConA5μg/mL，将培养板置37℃、50%CO₂培养箱中孵育72h，培养结束前6～8h加³H-TdR0.5uci/孔，最后收集细胞，加闪烁液用液闪计数器测定细胞增殖的掺入值(即CPM值)。

2.4中性红比色法测腹腔巨噬细胞吞噬功能

常规制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液，配成5×10⁹L^-1，培养2h，再加0.1%中性红，37℃水浴30min，Hank′s液洗板，加细胞溶解液，4℃过夜，于酶标仪492nm处测OD值。

2.5胸腺指数及脾指数测定

摘取胸腺和脾脏，剔除系膜，用扭力天平称重。胸腺指数=胸腺重量(mg)/体重(g)；脾指数=脾脏重量(mg)/体重(g)。

2.6观察抑瘤率

剥离下完整瘤块，称瘤重并计算抑瘤率：抑瘤率=(1-实验组肿瘤重/对照组肿瘤重)×100%。

3结果

3.1动物外观与体重

环磷酰胺组，小鼠逐渐行动迟缓，毛发不荣，饮水饮食减少，体重增加缓慢，于第9天死亡1只。其他3组小鼠活动灵活，毛发光泽亮丽，体重增加较快，尤以黄芪S₄组机体状态良好，体重与环磷酰胺组比较差别有统计意义(见表1)。

3.2胸腺指数和脾指数

黄芪S₄组、黄芪S₄加环磷酰胺组与环磷酰胺组比较，胸腺指数、腺指数均明显增加(P＜0.01、P＜0.05)。而与肿瘤对照组对比无差别(见表1)。说明黄芪S₄对化疗荷瘤小鼠的免疫器官有保护作用。黄芪S₄组的胸腺指数似高于肿瘤对照组，但统计学处理，尚无意义。

3.3黄芪S₄对荷瘤小鼠胸腺细胞增殖的影响

黄芪S₄可以提高胸腺细胞对ConA诱导的增殖反应，与肿瘤对照组比有显著差异。黄芪S4加环磷酰胺组与环磷酰胺组相比，差异有统计学意义。说明黄芪S₄能改善环磷酰胺对胸腺细胞增殖反应的抑制(见表1)。

3.4黄芪S₄对化疗荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

黄芪S₄能改善环磷酰胺对巨噬细胞吞噬功能的抑制，环磷酰胺组与其他3组比较有显著差异，其吞噬功能均低于其他3组(见表1)。

3.5黄芪S₄对小鼠S₁₈₀移植瘤的抑制作用

黄芪S₄对S₁₈₀移植瘤有明显的抑瘤作用，抑瘤率达35.78%。与环磷酰胺合用，抑瘤作用更明显，抑瘤率达95.25%(见表1)。

表1黄芪S₄对化疗荷瘤小鼠免疫器官、胸腺细胞增殖、

腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响及抑瘤作用(±s)

组别 动物数 体重/g 瘤重/g 抑瘤率/% 脾指数/mg/g 胸腺指数/mg/g 巨噬细胞吞噬

功能OD值 胸腺细胞

增殖/CPM值 始 末 始 末 TC 10 10 20.35±1.40 30.79±4.41 2.32±2.14 0 12.09±1.69^△ 2.89±0.71^△△ 0.27±0.13^△△ 233±152^△△ AS₄ 10 10 19.95±1.80 34.38±2.09^△△ 1.49±0.65^** 35.78 11.71±1.90^△ 3.37±1.03^△△ 0.31±0.07^△△ 417±192^** AS₄+CY 10 10 20.10±1.75 31.94±3.30 0.11±0.2^** 95.25 10.80±2.45^△ 2.83±0.50^△△ 0.25±0.09^△△ 223±68^△△ CY 10 9 20.45±1.40 28.74±4.52 0.04±0.07^** 98.27 8.62±1.90^△ 1.87±0.44 0.12±0.11 102±45

注：与CY比较△P＜0.05△△P＜0.01；与TC比较**P＜0.01

4讨论

改善化疗患者的免疫功能低下，对恶性肿瘤患者的治疗有积极意义。一般认为，肿瘤免疫反应以细胞免疫为主，参加免疫的效应细胞有细胞毒性T细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞。胸腺与脾脏为体内主要的免疫器官，胸腺为T淋巴细胞分化