摘要：在同一小鼠体上以木瓜蛋白酶雾化吸入造成肺气肿疾病模型，同时构建中医肾虚证，以此模拟肺肾两虚的中医虚喘证候。造模前后观察小鼠的耐力、耐寒能力，自由期三项指标SOD、GSH-PX、MDA的变化与临床一致；用调补肺肾方进行治疗有效，反证模型的可靠性。

Creating Animal Models for TCM Dyspnea Of Deficiency

Han Chunsheng(韩春生),Zhang hongchun(张洪春),Yang Daowen(杨道文)

(Sino-Japanese Friendship Hospital, Beijing 100029)

ABSTRACT: Pneumonectasis by the aerosol inhalation spray of vela rdon and TCM syndrome of kidney-asthenia was induced on the same mouse, in order to simulate the TCM dyspnea of deficiency type caused by asthenia of lun g and kidney . Observing the endurance, cold tolerance and changes of the three parameters in free time which are SOD、GSH-PX and MDA, the results show the th ree parameters are in accordance with those in clinic. Then treat with the presc ription of “regulating and nourishing the lung and kidney” to prove the reliability of the model.

KEY WORDS: Syndrome of dyspnea of deficiency type; Animal pattern; Counterevidence of treatment

虚喘是多种肺系疾病久治不愈，乃至后期出现以呼多吸少，动则喘甚为主要特征的一类症候。多年来，我们一直以病人为观察对象，从临床进行研究，但是为了使工作更加深入，弥补临床研究之不足，有必要进行动物实验，而前提条件则必须建立中医虚喘证候动物模型。但从掌握的文献资料看，这方面的研究尚属空白，本实验采用“疾病模型证候化”即在西医肺气肿疾病模型的基础上，同时构建中医肾虚证候模型，以此模拟中医虚喘证，取得初步成果，现报告如下：

1实验材料

1.1动物

健康昆明雄性小鼠220只，体重(20±2)g，由中国中医研究院实验动物研究所提供。

1.2仪器和试剂

日本721分光光度计、超声雾化器(中日友好医院临研所提供)；黄嘌呤氧化酶、木瓜蛋白酶、硫代巴比妥酸(Sigma公司产品)。

2实验方法

2.1虚喘模型的造模方法

2.1.1木瓜蛋白酶肺气肿疾病模型的建立

在清醒状态下，每次将5只小鼠放入一40cm×30cm×35cm与超声波雾化器相联的透明塑料盒中，通过雾化管向盒内喷入雾化液体。实验分组：①空白对照组40只，常规饲养，不做处理。②生理盐水组40只，分别于造模开始后第2、4、6、8天雾化喷入生理盐水，一次雾化量为2.0mL。③肺气肿模型组100只，时间安排同②，雾化喷入用0.9%NaCl稀释浓度为3g/L的木瓜蛋白酶液体，每次雾化量2.0mL^［1～3］。④模型喂药组40只，时间安排与雾化方法同③。所不同的是本组同时灌服调补肺肾方(由冬虫夏草、西洋参、茯苓等药物组成)，每mL含生药1g，1次/d。

2.1.2虚喘证候模型的建立

肺气肿模型组和肺气肿模型喂药组分别于造模后第1、3、4、8、9、10、12天，腹腔注射氢化可的松(上海信谊药厂生产，用生理盐水配成1g/L)0.5mL、0.7mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL。前者造成虚喘证候模型，后者观察调补肺肾方对模型的影响。生理盐水组注射同等量的生理盐水。空白对照组不作处理。

造模结束后，为验证模型的可靠性，从虚喘证候模型组中随机抽取60只小鼠，分为两组：自然恢复组30只，常规饲养；治疗反证组30只，常规饲养同时给调补肺肾方。

2.2观察指标

(1)一般情况：小鼠的活动、神情、毛发的光泽及体重、死亡情况。

(2)耐力变化：将空白对照组、生理盐水组、虚喘模型组、喂药反证组小鼠均负重3.5g，分别放入水深40cm的水池中，至沉入水底溺死为止，记录时间，以负重游泳试验的时间来反映耐力程度。

(3)御寒能力：将各组小鼠一起放入零下10℃的冰柜中，40min后统计死亡情况，计算冻死率，以此观察小鼠的御寒能力。

(4)胸腺重量：小鼠取血后，颈椎脱臼处死，迅速取出胸腺用生理盐水洗净血迹，滤纸吸干后，电子天秤称重。

(5)血浆和肺组织丙二醛(MDA)测定：采用改良的八木国夫法^［4］。

(6)全血谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定：DTNB直接法^［5］。

(7)红细胞和肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活力测定：羟胺比色法^［6］。

2.3统计处理

不同组间均数(±s)比较采用t检验，比较两组率的差别是否有统计意义采用卡方检验。

3实验结果

3.1外观变化

虚喘模型组几乎所有小鼠都出现“肾虚”症状，不活泼，眯眼，拱背蜷缩，竖毛，体弱瘦小。空白对照组和生理盐水组则活泼好动，强壮肥大，皮毛光泽发亮。模型喂药组介于空白对照组和虚喘模型组之间，而更接近于前者。

3.2各组小鼠耐力、耐寒能力、胸腺重量比较

虚喘模型组负重游泳时间低于空白、盐水及造模喂药组，表明虚喘模型组小鼠耐力下降，此与虚喘患者动则气喘，不胜劳力的表现相似。治疗反证组明显高于自然恢复组。通过对各组冻死情况比较分析，可以看出虚喘模型组耐寒能力下降，喂药后明显提高，以此模拟虚喘病人多因气候变化，感寒加重的特点。虚喘模型组胸腺重量低于空白、盐水及造模喂药组，给药后有所增加。见表1。

表1各组负重游泳时间、冻死情况及胸腺重量比较(±s)

组别 n 溺死时间/min n 冻死率/% n 胸腺重量/mg 空白对照组 10 5.39±0.49^*** 10 30^* 10 1.25±0.10^** 生理盐水组 12 5.36±0.67^*** 10 20^* 10 1.19±0.23^** 虚喘模型组 8 3.05±0.59 8 100 10 0.89±0.04 造模喂药组 10 4.84±0.82^* 10 60^* 10 0.55±0.15^** 治疗反证组 10 5.04±0.43 10 60 10 0.50±0.05 自然恢复组 10 3.45±0.51^△△ 9 89^△ 10 0.40±0.03△

注：与虚喘模型组比较△P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001；与治疗反证组比较△P＜0.05△△P＜0.013.3各组RBC-SOD、血GSH-PX活力与血浆MDA含量比较

虚喘模型组RBC-SOD、血GSH-PX活力低于空白、盐水及造模喂药组，MDA含量升高。根据我们的临床观察和有关报道，虚喘病人这两种酶的活性显著低于正常人，而MDA含量增加；给药后分别提高和降低，临床和实验一致。见表2。

表2各组全血GSH-PX、RBC-SOD活力和MDA含量比较(±s)

组别 n GSH-PX/IU SOD/IU/mg MDA/μmol/L 空白对照组 10

25.10±1.25^***

153.77±16.72^***

15.67±0.47^** 生理盐水组 10 25.89±2.51^*** 158.41±20.03^*** 15.01±0.44^** 虚喘模型组 10 19.72±2.94 103.99±9.70 18.82±0.36 造模喂药组 10 24.74±3.69^*** 132.29±22.23^*** 17.18±0.54^** 治疗反证组 10 24.87±1.81 133.79±30.01 16.01±1.68 自然恢复组 10 20.47±2.97^△△ 102.37±20.93^△△ 18.37±1.04^△△