［摘要］目的:全面了解一次静注8-氯腺苷后其代谢产物在大鼠体内药代动力学的规律及特点，为临床实验提供理论依据。方法：给大鼠单次静注4种剂量8-氯腺苷后，应用HPLC方法测定在体液和组织中8-氯腺苷代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤的含量。结果：8-氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤。代谢产物之一8-氯嘌呤半衰期(t_1/2)有随用药剂量的增加而延长的趋势，为10.15～32.84 min。药时曲线下面积(area under the curve,AUC)在8-氯腺苷剂量增加至150 mg·kg^－1时不成比例地增高，呈非线性动力学消除的特点。另一代谢产物8-氯肌苷的t_1/2约为100min，在剂量增加至100 mg·kg^－1时，其AUC不成比例地增加，呈非线性动力学消除的特点。除脂肪、脑、睾丸组织外，8-氯肌苷和8-氯嘌呤在体内分布广泛,其中肝、肾等代谢和排泄器官的含量较高。药物主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄，排泄量占总给药量的39.81%。结论：静注8-氯腺苷后8-氯嘌呤在大鼠血中迅速生成，消除也比较迅速，8-氯肌苷在大鼠血中出现较晚，消除也比较缓慢，两种代谢物在用药剂量25～100 mg·kg^－1范围内呈线性动力学消除，当剂量增加至100～150mg·kg^－1有非线性动力学消除的趋势。两代谢物广泛分布于各组织，但不易进入脂溶性组织和透过血脑屏障。肾为其主要排泄器官，主要以代谢物8-氯肌苷的形式排出体外。

［中图分类号］R979.1［文献标识码］A

［文章编号］1000-1530（2000）06-0543-04

Pharmacokinetics of metabolites（8-chloro-adenine and 8-chloro-inosine）of a new unticancer compound of 8-chloro-adenosine in SD rats

DOU Gui-Fang,LOU Ya-Qing

(Department of Pharmacology)

ZOU An-Qing

(National Laboratory of Nature and Biomimic Drug,Peking University,Beijing100083,China)

ABSTRACTObjective：To study the pharmacokinetics of 8-chloro-adenine and 8-chloro-inosine after a i.v bolus of 8-chloro-adenosine.Methods: The serum concentration of 8-chloro-adenine and 8-chloro-inosine was determined by HPLC method after i.v injections of 8-chloro-adenosine in SD rats.Results：The AUC of 8-chloro-adenine and 8-chloro-inosine appeared to be dose-dependent in doses 25-100mg·kg^－1,but seems unlinear when doses increased to 100 or 150 mg·kg^－1,t_1/2 of 8-chloro-adenine was becoming longer as dose increased to 100-150 mg·kg^－1.8-chloro-adenine and 8-chloro-inosine were distributed in many tissues after a bolus of 8-chloro-adenosine 100mg·kg^－1 in rats,but they were not detectable in fat,brain and testis.Total excretion of 8-chloro-adenosine and its metabolites in urine and bile were 39.81%.Conclusion：8-chloro-adenine generated earlier and eliminated more rapidly than 8-chloro-inosine in serum.Both of them behaved as a linear in SD rats within dose range 25-100mg·kg^－1 and seems unlinear when dose increased to 100 or 150mg·kg^－1.

KEY WORDSAntineoplastic agents/pharmacokin；8-chloradenosine；8-chloro-adnine；8-chloro-inosine

8-氯腺苷（8-chloro-adenosine,8-Cl-A )为一新型具抗肿瘤活性的化合物，药理学研究表明它对小鼠肝癌实体瘤及人白血病HL-60和K₅₆₂细胞等有明显抑制生长作用，对MOLT-4细胞具有诱导凋亡的作用^［1，2］。毒理学研究表明,该化合物毒性较小^［3］,故该化合物具有重大的开发价值。通过对大鼠单次静注8-氯腺苷后的药代动力学研究表明，大鼠体内迅速代谢并主要生成两种代谢产物8-氯腺嘌呤和8-氯肌苷^［4，5］，药效学的研究也表明，代谢产物之一8-氯腺嘌呤亦有抗肿瘤活性^［6］。为全面了解8-氯腺苷在体内的药代动力学规律,并为下阶段临床药理研究提供理论依据，我们应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测了大鼠单次静脉注射8-氯腺苷后血清中及各组织中8-氯腺苷两种主要代谢产物8-氯肌苷及8-氯嘌呤的含量，研究它们在生物体内的药代动力学及分布和排泄的规律及特点。

1材料与方法

1.1药品

8-氯腺苷（批号950424，8-chloro-adenosine ,8-Cl-A）、8-氯肌苷 ( 8-chloro-inosine,8-Cl-I )和8-氯腺嘌呤 (8-chloro-adesine,8-Cl-Ad ) 均由北京大学药学院合成和提供。

1.2动物

SD大鼠，体重200～300 g，由北京大学实验动物科学部提供。禁食12 h后静脉给药。

1.3生物样品制备

血清：单次静注8-Cl-A于给药前及给药后不同时间点从大鼠眼眶取血0.4 ml，离心，分离血清，－20 ℃保存。组织：于给药后5、15和60 min。分3批处死大鼠，摘取心、肝、脾、肺、肾、肠、脂肪、脑、睾丸、肌肉、骨髓、雌性动物的子宫和卵巢（合并）共13种组织样品，所取部位尽量一致和对称，以生理盐水按一定比例制备匀浆，－20℃保存。粪：分段收集后干燥称重用生理盐水按一定比例制备匀浆，－20℃保存待测。尿和胆汁：于给药后分段收集，－20℃保存待测。

1.4药物测定方法

利用本实验室建立同时测定生物样品中代谢物8-Cl-Ad和8-Cl-I含量的高效液相方法方法^［7］。色谱条件：色谱柱为国产YGW C₁₈(25cm×4.6mm),10μm，流动相为甲醇：0.17 mol·L^－1醋酸（含3×10^－3mol·L^－1四丁基溴化胺）水溶液（体积比为20∶80），紫外检测波长为263 nm。代谢物8-Cl-Ad和8-Cl-I的血清标准曲线在0.1～20.0mg·L^－1范围，r为0.9963～0.9995,其回收率在73%～95%范围内，日内和日间精密度在3.4%～9.6%范围内，样品最低检测质量浓度8-Cl-Ad及 8-Cl-I分别为0.25和0.50mg·L^－1。取各种待测样品0.2ml，置于1.5 ml塑料离心管中，加入0.4 ml乙腈沉淀蛋白，混匀振荡5 min，15 000×g离心5min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，加入0.4 ml二氯甲烷以萃取掉有机杂质，振荡混匀5 min，超声10 min，15 000×g离心5min，取上层水相20μl 进样分析。每次样品测定均用随行标准曲线计算代谢物含量。

2结果

2.18-Cl-A代谢物的药代动力学研究

将大鼠分成4组，每组分别单次舌静脉注射8-Cl-A25、50、100和150 mg·kg^－14个剂量，于给药后不同时间取血（每时间点为5只大鼠），分离血清测定代谢物8-Cl-Ad和8-Cl-I的浓度(表1)。

大鼠静注8-Cl-A后，两种代谢产物8-Cl-Ad和8-Cl-I在给药后迅速出现。以3P87实用药代动力学程序进行模拟，按梯形法计算药时曲线下面积(area under the curve,AUC),求得代谢产物8-氯腺嘌呤和8-Cl-I的生成和消除的主要药代动力学参数(表2) 。

2.28-Cl-A代谢产物的组织分布研究

大鼠静脉注射8-Cl-A100 mg·kg^－1,分别于给药后第5、15和60分处死动物，每时间点5只大鼠，取各脏器组织测定代谢物8-Cl-I和8-Cl-Ad的含量(表3)。8-Cl-I在各组织中的分布含量顺序为：肾＞肺＞脾、肠、肝＞肌肉、胃、骨髓、心、子宫、卵巢。8-Cl-Ad在各组织中的分布含量顺序为：肾、血清、肝、脾＞肺、胃、子宫、卵巢、心、骨髓、肠、肌肉。在脂肪、睾丸和脑组织中均未检测到代谢物。

2.38-Cl-A的代谢产物的排泄研究

取5只禁食大鼠，单次舌静脉给予8-Cl-A100 mg·kg^－1，分别于给药不同时间收集48h尿、粪，并测定其中8-Cl-A代谢物8-Cl-Ad和8-Cl-I的药物浓度。给药后48 h中从尿中排出代谢物的累积量相当于给药浓度的38.48%,其中以8-Cl-I为主，且都以8 h以内排出为主。粪中未检测到代谢物。另取5只禁食大鼠，腹腔注射100 g·L^－1乌拉坦1 g·kg^－1麻醉，打开腹腔分离胆总管做插管，单次静脉注射8-Cl-A100mg·kg^－1，于给药后不同时间分段收集胆汁，测定代谢物浓度，给药12 h从胆汁中排出的代谢物累积量相当于给药浓度的0.54%(表4)。

表1大鼠单次静注8-氯腺苷25、50、100、150 mg·kg^－1后，8-氯腺苷代谢产物8-氯肌苷和8-氯嘌呤的血药浓度随时间的变化(±s)

Table 1Serum Conc of 8-Cl-I as well as 8-Cl-Ad after i.v administration of 8-Cl-A 25,50,100,150 mg·kg^－1 in SD rats(±s)

ρ/mg·L^－1

25 mg·k