［摘要］目的：探讨多巴胺D₂受体基因(dopamine D₂ receptor,DRD2)启动子A-241G多态性与精神分裂症的关系。方法：采集101个家系，每家有2名或2名以上符合ICD-10精神分裂症诊断标准患病同胞且父母存活。对DRD2启动子的A-241G多态性进行检测。结果：(1)DRD2启动子的A-241G等位基因频度和基因型频度在父母组、非患病同胞组和患病同胞组之间差异无显著性，在3组不同性别之间以及在精神分裂症不同亚型之间基因型频度和等位基因频度的分布差异亦无显著性；(2) 传递不平衡检验发现在患病同胞(χ² =0.94，P＞0.05，OR=0.83，95%可信区间0.57～1.21)中未表现传递不平衡性，而在非患病同胞(χ² =6.76，P＜0.01，OR=3.17，95%可信区间0.41～24.71)中存在传递不平衡性，其中-241A等位基因在非患病同胞中传递较多；(3) 基因型与妄想总分、幻觉总分、思维形式障碍、情感障碍、精神性失语及症状持续时间等临床特征相关。结论：DRD2启动子的A-241G多态性对精神分裂症的发病和临床表现具有一定影响。

［中图分类号］R749.3［文献标识码］A

［文章编号］1000-1530（2000）06-0551-04

Association between A-241G polymorphism of dopamine D₂ receptor promoter gene and schizophrenia in Chinese

HU Xian-Zhang,ZHOU Ru-Lun,ZHOU Chao-Feng,CHEN Chang-Hui,WANG Yu-Feng,HAN Yong-Hua，SHEN Yu-Cun

(Institute of Mental Health,Peking University,Beijing100083,China)

XU Xi-Ping

(Program for Population Genetics,Harvard School of Public Health)

ABSTRACTObjective:To investigate the association between A-241G polymorphism of dopamine D₂ receptor promoter gene (DRD2P) and schizophrenia.Methods:The A-241G polymorphism of DRD2P was tested in 101 Chinese Han's pedigrees where there were two or more schizophrenic siblings according to the ICD-10 criteria and at most only one of their alive parents may has the history of suffering schizophrenia.Results:(1) The distributions of alleles or genotypes of DRD2P are not significantly different between the groups of parents,non-affected siblings and affected siblings,between different sex and between the sub-types of schizophrenia.(2) The transmission disequilibrium test did not show the transmission disequilibrilium in affected siblings (χ² =0.94，P＞0.05，OR=0.83，95%CI 0.57-1.21) but did in non-affected siblings (χ² =6.76，P＜0.01，OR=3.17，95%CI 0.41-24.71),with the －241A allele transmitted more frequently among them.(3) It was found that there exists significant relationship between DRD2P genotypes and the scores of delusion,hallucination,thought form disorder,affective disorder,psychotic alogia and lasting time of symptoms.Conclusion:The results suggest that DRD2P may play a role in the aetiology and clinical patterns of schizophrenia.

KEY WORDSSchizophrenia/genet;Dopamine D₂ receptors prometer A-241G；Polymorphism(genetics);Receptors,dopamine D₂/anal

长期以来，由于多巴胺在精神分裂症病人中活动度升高，因此人们怀疑多巴胺系统与精神分裂症的病因有关。对精神分裂症的分子遗传学研究也有报道多巴胺D₂受体(dopamine D₂ receptor， DRD2)与精神分裂症有关联，但以阴性结果居多。最近，日本的一项关于DRD2启动子区域的一个碱基缺失(-141 delta C)等位基因频度研究结果显示，精神分裂症显著低于对照^［1］。但以中国人和英国白人为样本的类似研究中，未能证实该多态性对精神分裂症发病易感性的影响^［2］。A-241G是DRD2启动子区域的另一个受到关注的多态位点，然而在中国人群中，尚无充分的资料说明其与精神分裂症发病的关系。在既往的一些关于多巴胺系统的研究中，包括一些中日合作研究，都反映出两国人群在DRD2基因多态方面的相似性，而中日人群与高加索人群之间在DRD2基因多态方面的差异却非常明显。因此，中日在DRD2研究方面彼此作为独立人群的相互映证，对一个研究结论的确立具有更加明确的意义，因为两者的可比性程度更高。在上述背景下，本文在101个精神分裂症多发家系中对DRD2启动子基因A-241G(该表示法意为：DRD2基因起始密码子上游第241个碱基由A变为G，其中“－”表示起始密码子上游，下同。)多态性进行了检测。

1对象与方法

1.1研究对象

1.1.1家系的纳入纳入标准包括：(1)完全血亲同胞中有2个或2个以上符合ICD-10精神分裂症诊断标准的精神分裂症患者知情同意；(2) 同胞的血亲父母存活；(3) 汉族。 排除标准包括：(1) 父母不全健在者；(2) 知情后，对抽血不合作者；(3) 已经或正在接受输血治疗者。

1.1.2家系的来源在新乡医学院第二附属医院，对符合ICD-10精神分裂症诊断标准的正在住院的病人及1997年全年和1998年1至5月住院的病人调查家族史，通过面谈确定同胞中有2名及2名以上精神分裂症患者的家系方能入组。另外，我们还在东北(四平、长春、吉林、丹东)收集精神分裂症核心家系(含有2名精神分裂症子女)58个。临床资料的收集按文献［3］进行。

1.1.3样本的一般情况获得家系101个，共455人。将101个家系的成员分成3个组：即父母组202人(男101，女101)，平均年龄（59±8）岁；患病同胞组205人(男102，女103)，平均年龄（30±8）岁， 病程（10±9）年；非患病同胞48人(男23，女25)，平均年龄（32±8）岁。

1.2方法

1.2.1标本的采集与处理对合格样本在征得受试者同意后，抽血10ml。试管中加入肝素抗凝，血样立即置0～4 ℃保存，当天离心分离出血浆于－40℃保存。有形成分置0～4℃保存，两周内用常规蛋白沉淀法提取DNA。

1.2.2DRD2启动子聚合酶链式反应(PCR)设计上游引物5′-AAAGGAGAAGACTGGCGAGCA - 3′ (-294位至-272位)和下游引物5′ - TGGAACGGGTAGGAGGGGTT - 3′(-161位至-140位)。 该序列所扩增的产物长度为155bp,中间包括一个对应于内切酶MaeⅢ的多态切点， 由此形成限制性片段长度多态。PCR总反应体系25 μl，循环条件为94 ℃，30 s；56 ℃，90 s；72 ℃，1 min。反应在PTC-200型热循环仪（MJ Research,USA）上进行。以上针对0.1 μg基因组DNA反应35轮， 进入循环前于95 ℃预变性5 min，出循环后于72 ℃延长反应10 min。检测PCR产物后用MaeⅢ酶切。通过0.25 g·L^－1琼酯糖水平电泳分离鉴定基因型， 以100bp DNA ladder (Gibco-BRL)作相对分子质量标准品。

1.2.3DRD2启动子基因型的检测用MaeⅢ酶及其酶切缓冲液适量，加入PCR扩增产物中，置37 ℃温箱4～6 h。然后用0.25 g·L^－1琼脂糖电泳读取基因型。2种多巴胺D₂受体启动子等位基因(allele)的区别在于内切酶MaeⅢ切点的有无。为了区别，将2个等位基因分别命名为A1和A2，A1代表长度为155bp的片段，是没有MaeⅢ切点的片段，A2代表99bp和56bp两个片段(当第-241位碱基A由G替换时出现MaeⅢ酶切位点)，由MaeⅢ剪切产生。

1.2.4统计分析方法按文献［3］方法进行。

2结果

2.1DRD2启动子基因型频度和等位基因频度的比较

用χ²检验对多巴胺D₂受体启动子A-241G多态基因型频度和等位基因频度进行比较。对于基因型，父母与非患病同胞(χ²=0.91，P=0.63)、父母与患病同胞(χ² =0.05，P=0.98)以及非患病同胞与患病同胞之间(χ² =1.14，P=0.57)的分布差异均无显著性；对于等位基因，父母与非患病同胞(χ² =0.07，P=0.79)、父母与患病同胞(χ²=0.03，P=0.86)以及非患病同胞与患病同胞间(χ² =0.14，P=0.71)的分布差异亦无显著性(表1)。另外，在3组男女性别之间以及在精神分裂症不同亚型之间基因型频度和等位基因频度的分布差异也无显著性。

表1DRD2启动子等位基因和基因型分布的组间比较

Table 1The comparison of allele and genotype distributions of DRD2P between sub-groups

Sub-groups Genotype frequencies Allele frequencies A1/A1 A1/A2 A2/A2 A1 A2 Parents 135(67.2%) 62(30.3%) 5(2.5%) 332(82.2%) 72(17.8%) Non-affected siblings 34(70.8%) 12(25.0%) 2(4.2%) 80(83.3%) 16(16.7%) Affected siblings 135(65.9%) 65(31.7%) 5(2.4%) 335(81.7%) 75(18.3%)