［摘要］目的：了解促排卵治疗对黄体中期子宫内膜雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)及其mRNA表达的影响。方法：应用光学显微镜检测着床窗口子宫内膜、采用免疫组化及原位杂交方法检测正常及多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)妇女促排卵治疗后子宫内膜黄体中期ER、PR及其mRNA的表达，放射免疫法测定同期血中雌激素(estradiol，E₂) 及孕激素(progesterone，P)水平。结果：正常妇女黄体中期子宫内膜组织形态22例中有20例为分泌中期改变，2例为分泌早期改变。ER、PR弱表达，ER mRNA及PR mRNA的表达也较弱，而PCOS妇女治疗后黄体中期氯米芬9/人绒毛膜促性腺激素组及氯米芬/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素组各15例分别有8/15及7/15光镜下为分泌中期改变，其它为分泌早期改变。ER、PR的表达增强，其基因的表达也明显增强，血清P的水平相对较低。促性腺激素释放激素激动剂/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素组共10例，E₂、P及P/E₂接近对照组，上述标志物的表达与对照组相似。但3组PCOS分泌中期子宫内膜均有不同程度的间质增生、致密，腺体与间质发育不同步，且间质致密处ER、PR及其mRNA表达均下降。结论：氯米芬/人绒毛膜促性腺激素及氯米芬/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素方案产生了超生理水平的E₂，PCOS的颗粒细胞分泌P的功能受损，P/E₂水平下降，对子宫内膜ER、PR及其基因的表达抑制不利，影响胚胎的着床；而促性腺激素释放激素激动剂/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素方案则产生有利的激素环境，使分泌期E₂、P及P/E₂与正常对照组相似，对ER、PR及其基因表达抑制，有利于胚胎的着床。

［中图分类号］R322.65［文献标识码］A

［文章编号］1000-1530（2000）06-0503-05

The effect of ovulation induction on the expression of estrogen and progesterone receptors and their mRNA in the midluteum endometrium

WANG Ying,CHEN Yong-Jian,LI Mei-Zhi,ZHANG Xiao-Wei,WANG Ai-Ming

(Department of Obstetric and Gynecology,Peking University Third Hospital,Beijing100083,China)

ABSTRACTObjective:To study the effect of ovulation induction on the expressions of estrogen receptor,progesterone receptor and their mRNA in endometrium.Methods:Optical microscopic observation，immunnohistoche-mical and in situ hybridization techniques were used to characterize endometrial changes of the expressions of ER,PR and their mRNA in the implantation windows with 22 healthy and 40 PCOS women post ovulation inductions.Sera P and E₂ of midluteal phase were measured by radioimmunol techniques.Results:In the control group，20 cases were found to be in mid-secretory phase and 2 cases in early secretory phase.ER and PR expressions varied from （－）to （+），ER and PR mRNAs expressions were low.In CC/HMG/HCG and CC/HCGgroups（15 PCOSpatients each），mid-secretory phase changes were found in nearly 50%，and the remainings had early secretory phase changes.Luteal phase was characterised by P secretion deficiency，supraphysiologic estradiol levels，decrease of P/E₂ ratio，and enhancement of ER，PR，ERmRNA and PRmRNA expressions.In GnRH-a/HMG/HCG group (10 cases) all the parameters and markers described above were similar to those of the control group.In all the PCOS groups,mid secretory phase of the endometrium preseat various degrees of the proliferation and density of stroma while the developments of the stroma and yands were not synchromistic.ER,PR expressions were decreased at dense stroma sites.Conclusion:CC/HCG and CC/HMG/HCG protocols induced an increase of E₂ levels，a decrease in P secretion and P/E₂ ratio during the secretary phase，thus affecting the endometrial receptivity.In GnRH-a/HMG/HCG protocol E₂，P levels and P/E₂ ratio were similar to the control group,which is beneficial to the endometrial receptivity of the embryo.

KEY WORDSReceptor,estrogen/metab;Progestational hormones/metab;RNA,messenger/metab;Luteal phase;Ovulation induction;Endometrium

促排卵治疗常常导致高排卵率低妊娠率，为了解这种现象的分子基础，本研究探讨促排卵药物对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者黄体中期子宫内膜雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)及其mRNA的影响，评价促排卵方案对子宫内膜的作用，为临床促排卵治疗提供理论依据。

1材料与方法

1.1研究对象

选择我院妇产科门诊PCOS患者40例。年龄22～35岁，平均28.8岁。不孕时间2～10年，平均4.8年。诊断标准按卫生部规划教材乐杰主编《妇产科学》第4版。通液或碘油造影输卵管通畅，3个月内未用任何激素类药物。对照组为同期因男性不育而就诊的月经周期正常的妇女共22例，年龄25～37岁，平均27.0岁。3个月内未用任何激素类药物。

1.2方法

用药方案：40例PCOS患者根据就诊的时间顺序选择以下治疗方案。3组患者年龄、体重、体重指数、E₂、T、A、FSH、LH间差异无显著性，P＜0.05。(1) 氯米芬/人绒毛膜促性腺激素(clomiphene citrite/human chorionic gonadotropin,CC /HCG):共15例，月经周期第5天(自然周期或黄体酮后撤退性出血)给予氯米芬每天100～150mg共5 d;(2) 氯米芬/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素(clomephene citrite/human menopausal gonadotropin/human chorionic gonadotropin，CC/HMG/HCG):15例，月经周期第3天(同上)给予氯米芬每天100～150mg共5d,第7天开始HMG 每天1支;(3) 促性腺激素释放激素激动剂/绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素(gonadotropin releasing hormone analogue/human menopausal gonadotropin/ human chorionic gonadotropin,GnRH-a/HMG/HCG):10例，由于患者的经济承受能力有限，此组病例数较少。月经周期第2天用GnRH-a每天150 μg共3 d，第5天开始HMG 每天1支。当优势卵泡直径≥1.8 cm时,HCG5000～10000IU肌注诱发排卵。

阴道B超监测卵泡发育： 采用Aloka-SSD630型超声仪，5.0 MHz阴道探头监测PCOS及对照组卵泡发育，确定排卵日。

子宫内膜取材： 对照组及PCOS组促排卵治疗排卵后第7～8 天，用Pipelle管吸刮子宫前后壁，内膜组织行HE染色、免疫组化染色及原位杂交检测。内膜活检同时取周围静脉血测定E₂、P。

子宫内膜ER、PR的测定： 单克隆抗体免疫组化法。ER及PR单克隆抗体及SP试剂盒为美国ZYMED公司生产，以磷酸缓冲液代替Ⅰ抗作为阴性对照。

原位杂交检测ERmRNA及PRmRNA： 探针来源:PR质粒pUC85110bp,酶切位点:BamH Ⅰ,探针片段2798bp.ER质粒2867bp，酶切位点:EcoRⅠ、Hind Ⅲ,探针片段1800bp.地高辛标记试剂盒由德国Boehringer公司生产，孕激素质粒由意大利Adriana Maggi博士惠赠，雌激素质粒由王蔼明博士惠赠,按试剂盒说明书操作。

结果判定： 阳性染色为细胞核出现棕黄色颗粒。根据染色强度的深浅分为4级:(－)为不着色;(+)为淡黄色;(++)为黄色;(+++)为深棕色。

1.3统计分析

采用成组设计多个样本比较及两两比较秩和检验进行分析。

2结果

2.1促排卵治疗对围着床期子宫内膜病理形态的影响(表1)

本研究22例正常妇女着床期子宫内膜中20例光镜下病理为分泌中期改变； 2例为分泌早期改变。黄体功能缺陷(luteal phase deficiency,LPD)发生率为2/22。

而应用促排卵方案后PCOS妇女着床窗口的子宫内膜的病理结果为CC/HCG组及CC/HMG/HCG组15例子宫内膜腺体与间质发育不同步，LPD发生率分别为8/15及7/15,与对照组相比，P＜0.01;GnRH-a/HMG/HCG组LPD明显下降，10例中仅有2例，发生率2/10,与正常对照组相似，P＞0.05。但3组中均存在不同程度的间质局灶性致密或梭形细胞增生。

表1排卵后7～8 d对照组及PCOS各用药组子宫内膜病理结果

Table 1Morphology of endometrium in controls and PCOS

Group Case Secretory LPD Dense stroma Control 22 20 2 1 CC/hCG 15 7^* 8^ 5^ CC/hMG/hCG 15 8^* 7^* 5^*