［摘要］目的：检测成人急性白血病细胞中NG2的表达，了解其与临床表现、免疫表型及疗效的关系。方法：用流式细胞仪-间接免疫荧光标记法检测62例成人急性髓细胞白血病(adult acute myeloid leukemia,AML)和24例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓细胞膜表面人类小鼠硫酸透明质酸糖蛋白NG2同源物的表达。结果：在19.35%的AML和4.17%的ALL中此抗原表达阳性。阳性者与对照在临床特征和血象方面无差异。但在AML中与FAB分型有一定的相关性,以M₀、M₁为多。NG2阳性者更易表达CD9和CD13，而CD14、CD15的阳性率较低（P＜0.05），CD34、CD38等干/祖细胞标志的表达率也较高(P=0.1)。 NG2阳性患者的缓解率较低（P=0.08）。结论：NG2多表达于早期的造血干/祖细胞，与预后似乎有一定的关系。

［中图分类号］R733.71［文献标识码］A

［文章编号］1000-1530（2000）06-0561-03

Expression of the NG2 molecule in adult acute leukemia

CHEN Yu-Hong,GAO Hui,CHANG Yan,YU Hong,CHEN Shan-Shan

(Institute of Hematology,Peking University People's Hospital,Beijing100044,China)

ABSTRACTObjective:To investigate the expression of NG2 molecule in adult acute leukemia and its relationship with the clinical manifestations,immunophenotype and prognosis.Methods:Monoclonal antibody 7.1,which could recognize the human homologue of the rat NG2 chondroitin sulfate proteglycan molecule was used to screen the blast cells from 62 adults with adult acute myeloid leukemia (AML) and 24 with acute lymphoblastic leukemia (ALL) by flow cytometry.Results:19.35% AML and 4.17% ALL bone marrow expressed the NG2 molecule.Blast cells expressing the NG2 occurred more frequently in FAB-M₀ and M₁ (P＜0.05).NG2 positive AML more often expressed CD9,CD13 (P＜0.05) and CD34,CD38 (P=0.1).NG2 indicated a poor outcome in both AML and ALL.Conclusion:The NG2 is likely expressed in the early hematopoietic cells and may potentially serve as a poor prognosis predictor.

KEY WORDSLeukemia;Bone marrow cells;Hyaluronic acid/metab;Glycoprotein NG2

寻求肿瘤特异性的抗原标志对于肿瘤的诊断、治疗、追踪均有重要的意义。遗憾的是白血病是由一群处于不同分化阶段的血细胞分化受阻或增殖过度引起的恶性疾病。因此目前应用于临床的基本都是一些白细胞的正常分化抗原，通过分析其在表达系列及阶段上的紊乱来对白血病进行分型。1996年Hutchinson肿瘤研究所的Smith等^［1］制备了一种单抗命名为7.1,它识别的抗原是小鼠硫酸透明质酸糖蛋白的人类同源物NG2。此种抗原最先报道表达于人类黑色素瘤细胞，后发现在一部分白血病细胞上亦可表达，但不表达于正常的造血组织。其存在往往提示预后不良，并与某些分化抗原，以及MLL基因的异常相关。蒙其惠赠，我们用7.1单抗经流式细胞仪—间接免疫荧光标记法对62例成人急性髓细胞白血病(adult acute myeloid leukema,AML)及24例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓细胞NG2表达进行了检测。

1材料与方法

1.1研究对象

1997年8月～1999年1月在我所经骨髓细胞形态学诊为急性白血病者,其中初治AML 62例（M₃除外）,ALL24例，其基本资料见表1。

1.2检测方法

(1)骨髓单个核细胞的制备：经肝素抗凝的新鲜骨髓标本，用1.077g·L^－1的淋巴细胞分层液分离，取单个核细胞层，用PBS（pH7.4）洗涤两次，计数并调整至每毫升1×10⁷个细胞。(2) 抗体标记：取上述细胞悬液50μl，一管加7.1单抗50μl（1∶1000稀释），另一管不加作为阴性对照。4 ℃ 孵育45 min后，用含0.01%(体积分数)胎牛血清的PBS洗涤两次，加入带FITC标记的羊抗鼠IgG二抗，4 ℃ 孵育45 min，PBS洗涤后用80%(体积分数)乙醇1～2 ml固定，一周内检测。(3)流式细胞术（flow cytometry,FCM）测定：流式细胞仪为B-D公司的FACSort，所用激光功率为25 mW,激发光波长为488 nm。第一荧光检测器（FLⅠ）收集FITC的荧光信号。每份样品测定2000个细胞，用cellquest软件分析数据。(4)免疫表型：根据本室常规，对骨髓细胞标记一组单克隆抗体，包括CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD38、CD117、HLA-DR等，用流式细胞仪检测。(5）统计方法：χ²、t、F检验及秩和检验。

表1患者的一般临床资料

Table 1General clinical data of the patients

n Male/

Female Age^·

(years) WBC

(×10^9.L^－1)^* Hb，

ρ/(g·L^－1)^* Platelet

(×10^9.L^－1)^* Hepato

megaly Spleen

megaly Lympho

megaly AML 62 38/24 15-76 0．7-59．2 19-144 5-300 9/57 9/56 16/57 (40) (13) (80) (30) ALL 24 20/4 15-72 1．7-171 47-159 2-381 6/21 8/20 10/22 (29) (24) (10)0 (76.5)

·， range and middle number;(),middle value.

2结果

2.1NG2表达的阳性率

当25%的细胞荧光强度强于对照时定义为阳性,12名骨髓大致正常者的阳性率均小于25%。据此，12例(19.35%)AML和1例（4.17%）ALL患者为阳性。

2.2NG2表达与临床、实验室检查的相关性

12例NG2阳性的AML患者与50例阴性对照相比在年龄、性别、白细胞数、血小板数和血色素,髓外浸润方面差异均无显著性,但在FAB分型方面差异有显著性,M₀、M₁占有明显优势(50%比10%)，见表2。

表286例急性白血病患者的FAB分型及与MoAb7.1的关系

Table 2The relationship between FAB type and MoAb7.1 among 86 patients

FAB M₀ M₁ M₂ M₄ M₅ M₆ AUL B-ALL T-ALL Total 7.1 1 4 26 6 5 3 5 17 6 73 Negative 7.1 2 4 2 0 2 1 1 1 0 13 Positive Total 3 8 28 6 7 4 6 18 6 86

2.3NG2表达与免疫表型的关系

经秩和检验表明在AML中,NG2与CD9,CD13及CD14,CD15的表达有相关性(P＜0.05),NG2阳性者更易表达CD9和CD13而CD14,CD15的阳性率较低。另外CD34,CD38等干/祖细胞标志的表达率也较高(P=0.1)。因ALL阳性病例数过少，未做统计学分析。

2.4NG2表达与疗效的关系

11例NG2阳性的AML患者有4例达完全缓解(complete response,CR),1例部分缓解(partial response,PR),6例未缓解(no response,NR);对照组分别为27,3和11例。CR率分别为36.36% 比65.85%(P=0.08).在ALL中表达NG2的1例达到短暂缓解，而对照组CR率为61.90%。因此NG2的表达似与预后不良有一定的相关性。

3讨论

细胞免疫标记的检测不仅可以对白血病的诊断提供帮助，在对疾病的预后、残留病变的追踪等方面也起着重要的作用。如何寻找到白血病特有的抗原是其关键。Smith等^［1］发现的7.1单抗就是其中较有希望的一种,它所识别的硫酸透明质酸糖蛋白被认为是细胞黏附和转移的抑制剂。正常的造血组织不表达7.1，仅在一部分白血病细胞上表达，在儿童AML中的阳性率为11%^［1］，ALL为8.6%^［2］，与我们成人的结果相似。阳性患儿的缓解率、<