［摘要］ 目的:建立原药材制首乌及复方虫草胶囊中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。方法:YWG-C18柱（4.6 mm×250mm, 10μm）; 流动相乙腈-水（1∶4）；检测波长：320nm,参比波长380nm；流速：1ml^．min^－1；柱温：室温。结果:2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品在1.65～3.85 μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系，r=0.999 7，平均回收率（98.84±0.23）%。对照品在复方虫草胶囊中的峰纯度因子为999.352。结论:用HPLC法测定原药材制首乌及复方虫草胶囊中2，3，5，4′-四羟基葡萄糖苷的含量，操作简便，结果准确，可用于控制原药材制首乌及复方虫草胶囊制剂的质量。

［中图分类号］ R932.41［文献标识码］ B

［文章编号］ 1000-1530（2000）03-0280-03

Determination of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in

Polygonum mutiflorum Thunb.and Fu-Fang-Chong-Cao capsule by HPLC

YANG Dong-Hui，CAI Shao-Qing

（Department of Natural Medicine, School of Pharmaceutical Sciences,

Peking University, Beijing100083, China）

WEI Lu-Xue， LU Yun-Ru

（School of Traditional Chinese Pharmacy, Beijing Traditional Chinese Medicine University）

ZHOU Hong-Lei

（Shandong Traditional Chinese Medicine University）

ABSTRACTObjective: To control the quality of raw medicinal material Polygonum mutiflorum Thunb. and Fu-Fang-Chong-Cao capsule，and develop a method for the determination of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside. Methods: HPLC method, YWG-C18 column (4.6 mm×250 mm, 10 μm) with a mobile phase of acetonitrile-water (1∶4); detecting wavelength at 320 nm, reference wavelength at 380 nm; flow rate :1 ml^．min^－1; column temperature: room temperature. Results: 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was linear within the range of 1.65-3.85 μg, with a correlation coefficient of 0.999 7. The average recovery rate was (98.84±0.23)%. The purity factor of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in Fu-Fang-Chong-Cao capsule was 999.352. Conclusion: The method is simple and accurate, and can be used for the quality control of raw medicinal material and Fu-Fang-Chong-Cao capsule.

KEY WORDSStyrenes/anal; Glucosides/anal; Rd polygoni multiflori prepar/chem; Cordyceps sinensis/chem; Chromatography, high pressure liquid▲

复方虫草胶囊（简称FCJ）由制首乌、冬虫夏草、灵芝、半夏及黄花败酱五味中药组成。主要功效为润肺养肝益肾、理气化湿和络。主治因肺、肝、肾气阴不足、气滞湿阻、脉络不和所致的胸闷气短、疲劳倦怠、失眠健忘等症。FCJ的研究为国家科委新药基金资助课题，是针对慢性疲劳综合征的主要症状而研制的。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷具有降血脂的作用,在体外对蛋白激酶C活性有一定的抑制作用,是何首乌及FCJ中的有效成分之一。为控制原药材制首乌及FCJ的质量，本文采用HPLC法测定了2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在原药材制首乌和FCJ中的含量。

1仪器及试药

HP 1050型HPLC（美国惠普公司），二极管阵列检测器，HP1050/3D化学工作站。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）对照品由北京中医药大学中药学院陆蕴茹教授惠赠；制首乌Polygonum mutiflorum Thunb. 由北京中医药大学中药学院闫玉凝教授鉴定；FCJ制剂由北京中医药大学实验药厂提供。乙腈为优级纯，水为重蒸水。

色谱柱：YWG -C18柱（4.6 mm×250 mm, 10μm）; 流动相：乙腈-水（1：4）；检测波长：320 nm；流速：1 ml·min^－1；柱温：室温。

2实验方法与结果

2.1标准曲线的建立

精密称取二苯乙烯苷对照品0.22 mg,用甲醇溶解定容至1 ml, 配成0.22 g·L^－1的溶液。吸取对照品溶液7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μl，按HPLC条件，进样分析。以进样量(X)对峰面积(Y)作图，得到其标准曲线图。其回归方程为：Y=574.91X+3518.69,r=0.9997, n=5。二苯乙烯苷对照品在1.65～3.85g·L^－1范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系。

2.2提取时间的考察

二苯乙烯苷易溶于甲醇溶液，本文比较了何首乌药材中二苯乙烯苷用甲醇超声提取不同时间的含量（表1）。结果表明，用甲醇超声提取30 min时，自何首乌中提出的二苯乙烯苷的含量最高。为此本文采用甲醇超声提取30 min的方法制备供试品液。

表1何首乌中二苯乙烯苷提取时间考察

Table 1Observation of extracting time of

Polygonum mutiflorum Thunb.

t/min 15 30 45 60 Peak area 9796.02 13571.30 4114.75 3787.98

t, extracting time.2.3精密度试验

准确吸取二苯乙烯苷对照品溶液10.0 μl,按HPLC条件，重复进样6次，测定峰面积值。6次测定结果的相对标准偏差为0.66%。

2.4日间稳定性试验

取新配制的二苯乙烯苷对照品甲醇液，按HPLC条件，连续5 d测定峰面积值。由测定结果（表2 ）可知，二苯乙烯苷甲醇溶液在48 h内含量基本没有变化，之后含量将逐渐降低。

2.5峰纯度检测

本文利用二极管阵列检测器可进行峰纯度检测,对FCJ中的二苯乙烯苷峰的纯度进行了测定(图1),纯度因子999.352(域值999.999)。

表2二苯乙烯苷日间稳定性试验

Table 2Stability experiment of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene

-2-O-β-D-glucoside between days

t/day 0 1 2 3 4 5 Peak

area 9390.11 9381.44 8879.50 8477.55 7673.65 7645.57

t, stadning time.

图1FCJ中二苯乙烯甙峰纯度检测图

Figure 1Peak purity of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene

-2-O-β-D-glucoside in FCJ

2.6加样回收率试验

称取复方虫草胶囊样品4份，每份1.0 g。其中3份分别加入0.22 g·L^－1的二苯乙烯苷对照品液0.5、1.0、1.5ml。4份样品各加入20ml甲醇超声提取30min，过滤，取滤液10ml蒸干，甲醇溶解并定容至2.0ml，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品液。吸取供试品液10.0 μl，按HPLC条件，测定二苯乙烯苷的含量，计算加样回收率(表3)。

2.7供试样品的含量测定

称取制首乌及FCJ制剂各1.00 g，分别加入20.0 ml甲醇，超声提取30 min,过滤，取滤液10 ml，蒸干，甲醇溶解并定容至2.0 ml，0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品液。吸取供试品液10.0μl，按HPLC条件，测定二苯乙烯苷的含量。测定结果见表4与图2、3。

表3复方虫草胶囊加样回收率试验结果（n=3）

Table 3Recoveries of added constituents in FCJ (n=3)

Samples Found

（mg/g） Recovery

（％）

（％） RSD

(%) FCJ 0.9304 FCJ＋added(0.110 mg) 1.0394 99.09 98.84 0.23 FCJ＋added(0.220 mg) 1.1474 98.64 FCJ＋added(0.330 mg) 1.2564