摘要目的:了解血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)基因的插入/缺失(insertion/deletion, I/D)多态性在中国人群中与心肌梗死(简称心梗)是否相关。方法:选择了150例住院心梗病人为实验组，150例住院的非心血管病患者作对照, 抽取外周静脉血提取DNA,同时所有研究对象记录其病史、体检等临床资料及吸烟、饮酒等流行病学资料,应用PCR进行ACE的基因型分析。结果:I等位基因和D等位基因频率在心梗组分别为0.58和0.42，在对照组为0.65和0.35。基因型频率的分布符合Hardy-Weinberg平衡。在全体研究的样本中，未发现ID或DD基因型与心梗相关；但在年龄小于或等于60岁的个体中，DD基因型与心梗显著相关(OR=2.33, 95%CI: 1.20-4.57)。并且这一相关性在年龄60岁及以下且肥胖的个体中进一步增强。结论:在研究的样本中, 未发现ACE基因型与心梗相关；但在年龄60岁及以下的个体中，DD基因型与心梗显著相关，且这种相关在合并肥胖的个体中进一步加强。

中国图书资料分类法分类号R542.22

Association study of angiotensin converting enzyme polymorphism

with myocardial infarction in Chinese

LI Yong^#, GUO Jing-Xuan, CHEN Da-Fang , GUAN Bao-Xiang ,WANG Li-Hua , XU Xi-Ping

(#Department of Cardiology, the Third Hospital , Beijing Medical University, Beijing100083)

MeSHAngiotensin converting enzyme^☆Polymorphism (genetics)Myocardial infarction Genes, DD^☆

ABSTRACTObjective: To examine the association of angiotensin converting enzyme insertion/deletion (ACE I/D) polymorphism with myocardial infarction in Chinese.Methods: 150 patients were genotyped with myocardial infarction and 150 controls. ACE I/D polymorphism genotyping was performed by using PCR. Data of medical history, and physical examination were also collected.Results: Allele frequencies of I and D alleles were 0.58, 0.42 in myocardial infarction group and 0.65, 0.35 in controls. The genotype frequencies were in Hardy-Weinberg equilibrium. The association of ID or DD genotype with myocardial infarction was not found in the total sample, but an association of DD genotype with myocardial infarction was found in the subpopulation younger than 60 years(OR=2.33,95%CI:1.20-4.57). Furthermore, this association was strengthened in patients of myocardial infarction with obesity.Conclusion: An association of ACE I/D polymorphism with myocardial infarction was found in a subpopulation younger than 60 years, which was strengthened in patients of myocardial infarction with obesity.

(J Beijing Med Univ, 1999,31:540-542)

血管紧张素转化酶(angiotensinconverting enzyme, ACE)是肾素-血管紧张素系统中的关键酶, 它使血管紧张素Ⅱ的生成增加而减少缓激肽的降解。其结果是使血管张力增加并促进了血管平滑肌细胞的增殖, 这表明ACE在冠心病的发病中可能起一定作用。

ACE基因位于17q23, 在其16内含子有一插入/缺失(insertion/deletion, I/D)多态性, 1992年Cambien等^［1］通过病例对照研究发现白人中ACE基因I/D多态性与心肌梗死(简称心梗)显著相关。随后在不同种族背景的人群中，ACE基因I/D多态性与冠心病的关系有很多报道, 大部分均认为DD基因型增加了心梗患病的危险, 少部分研究为阴性结果^［2］。有关中国人群ACE基因与心梗的相关研究也有报道, 结果并不一致, 且其研究的样本量较小, 在观察ACE基因与心梗的相关时未考虑它与冠心病其它危险因素之间的相互作用。我们通过一个较大样本的病例对照研究, 试图了解ACE基因I/D多态性与心梗及冠心病的危险因素如高血压, 高脂血症, 糖尿病和肥胖等的关联, 及它们之间的相互作用对心梗发病的影响。

1资料与方法

1.1对象

本研究采用病例对照的设计, 病例组来自1997年3月至1998年2月间在北京医科大学第三医院及第一医院心内科的住院心梗病人150例, 急性或陈旧性心梗均可。心肌梗死的诊断按照WHO标准。对照组来自上述两个医院同期收住的非心血管病住院病人150例, 要求无心血管疾病病史, 无胸痛症状, 心脏体检及心电图检查均正常, 并且性别相同，年龄和病例组相差5岁以内。

1.2方法

所有研究对象抽取外周静脉血5 ml以提取DNA; 血清血脂水平的测定在7150全自动生化分析仪(HITACHI，日本)上进行, 总胆固醇(total cholesterol, TC)和总甘油三酯(triglyceride, TG)用酶法, HDL-C用磷钨酸钠-镁沉淀法, LDL-胆固醇用聚乙烯硫酸沉淀法。同时详细记录其身高、体重、血压、腰围和臀围等体检资料, 病例和对照均需完成一个包括病史、吸烟、饮酒、饮食和教育程度等的一个调查问卷, 该问卷由统一培训的调查员进行。

1.3基因组DNA的提取

采用PUREGENE试剂盒(Gentra Systems公司), 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对基因组靶序列进行扩增。PCR反应体系的组成: 反应终体积10 μl, 含有基因组DNA 50μl, 引物 1:5′CTGCAGACCACTCCCATCCTTTCT 3′；引 物 2:5′GATGTGGCCATCACATTCGTCAGA3′。反应体系中含两种引物各0.3μmol^．L^－1, dNTP200μmol^．L^－1, Mg²⁺2.5mmol^．L^－1, TaqDNA聚合酶3.75 nmol^．L^－1。

PCR反应在Omn-E型PCR仪(HYBAID公司)上进行, 反应条件为94℃变性3 min; 扩增条件: 94℃变性1 min, 58℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 共35个循环, 最后延伸条件: 72℃, 7 min。

将扩增产物置于2.0 g^．l^－1琼脂糖凝胶电泳, 紫外光灯下照像判定基因型。II基因型显示490bp一条带, ID基因型显示190bp和490bp两条带, DD基因型显示190bp一条带。

1.4数据分析

所有临床及流行病学调查资料和实验数据用SAS软件进行统计分析。测得的基因型频率与Hardy-Weinberg平衡的符合程度采用卡方检验, 病例组和对照组一般临床资料的比较用两组均数的检验, 定性资料作两组频数的卡方检验, 应用logistic回归计算ACE基因型及其它危险因素与心梗的相关，结果以比值比(odds ratio, OR)和95%可信区间(95%CI)来表示。

2结果

2.1一般临床资料

表1所示为心梗组和对照组的一般临床资料。可以看到病例组和对照组在性别和年龄上做到了很好的匹配。冠心病的传统危险因素如高血压, 糖尿病、体重指数、TC、TG、LDL-C等在心梗组显著高于对照组, 而HDL-C在心梗组显著低于对照组。心梗组中吸烟者(包括现在吸烟和过去吸烟)的比例略高于对照组, 但差异无统计学意义。

表1心肌梗死组和对照组的一般临床资料(±s)

Table 1Demographic characters of cases and controls (±s)

Cases Controls Number 150 150 Gender(% of males) 78 79 Age(years) 56±9 56±9 Percent of smokers 72 68 Percent of hypertensives 47^* 21 Percent of diabetes 19^* 3 BMI(kg^．m^－2) 25±3^* 24±3 c/mmol^．L^－1 TC 5.2±1.3^* 4.4±1.1 TG 1.9±1.2^* 1.5±1.0 HDL-C 0.93±0.25^* 1.08±0.40 LDL-C 3.4±1.1^* 2.6±0.9

*P＜0.01 vs control; c, concentration； BMI, body mass index; TC, total cholesterol; TG, triglyceride; LDL-C, low density lipid C; hDL-C, high density lipid C.2.2ACE基因型的分布及其与心梗的关系

ACE基因I