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中国图书资料分类法分类号R969．1
Comparing the pharmacokinetic characteristics
of cyclosporine A loaded polylactic-acid nanoparticles colloid injectionswith Sandoz Sandimmun by intravenous administration to rabbits
LI Hong-Shan, ZHAO Jing-Ling, WEI Shu-Li
(Department of Pharmaceutical, Beijing Medical University, Beijing100083)
MeSHCyclosporins/pharmacokinColloidsInjectioCyclosporine A☆
ABSTRACTObjective: To compare the pharmacokinetic characteristics of cremophor free nanosphere colloid (NSC) and nanocapsule colloid (NCC), Cyclosporine A (CyA) loaded polylactic-acid nanospheres and nanocapsules colloid injection, with Sandimmun Sandoz (the currently available CyA i.v. injection).Methods:NSC, NCC and iso-osmotic aqueous dilution of San were i.v. administered to 9 rabbits in 3 randomly crossed experiments in a dosage of 4mg·kg－1. The CyA concentrations in whole blood samples were determined by HPLC. Pharmacokinetic parameters were calculated by 3P87 and ANOVA were done by EXCEL.Results: The concentration-time data of the 3 preparations were best fit by two compartments with a weight of 1/C2. Comparing to San, NSC took on a larger V(c) by 33.17%(P＜0.01) and a smaller k21 by 36.63%(P＜0.1), NSC took on a larger V(c) by 22.13%(P＜0.1) and a smaller k21 by 30.69%(P＜0.1), all the other parameters had no significant difference between them.Conclusion: Comparing to San, NCC and especially NSC may change the tissue distribution of CyA and slow down its elimination by i.v. administration. The two colloid preparations were suitable for further studies.
(J Beijing Med Univ, 1999,31:439-441)
环孢素A(cyclosporine A, 简称CyA)被广泛应用于实体器官和骨髓移植后的抗排斥治疗。目前临床使用的CyA商品注射剂为山德士公司生产的Sandimmun Sandoz，其中含有65％以上的增溶剂聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL), 此辅料易导致过敏反应和组胺释放、肾血流量和肾小球滤过率的降低、胆汁郁塞［1］，并毒害细胞［2］，引起癌变［3］、呼吸窘迫综合征、神经毒性［4，5］和肝脏毒性［1］等。故开发不含cremophor EL的CyA注射剂具有重要意义。本研究以可生物降解的聚乳酸为载体，注射用普朗尼克F68和大豆磷脂为辅料，制备了粒径大小低于100nm的注射用CyA纳米粒胶体，并以家兔为实验动物，对纳米球胶体、纳米囊胶体和San进行了体内药物动力学特征的比较。
1材料与方法
1.1仪器、药品和试剂
美国TSP公司Spectra System P1000 高效液相色谱仪，Spectra 100可变波长紫外检测器，中科院大连物化所WDL-95色谱工作站(在AST486微机上进行数据采集和谱图积分)，美国phenomenex silica RP-18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)，YKH-Ⅱ型液体快速混合器。
自制(59±11) nm的CyA纳米球胶体注射液(nanosphere colloid, NSC)，自制(82±37) nm的CyA纳米囊胶体注射液(nanocapsule colloid, NCC)，二者CyA质量浓度均为1g·L－1。50g·L－1的Sandimmun Sandoz以注射用生理盐水稀释50倍(简称San)。
盐酸和氢氧化钠为分析纯，水为注射用水，其它化学试剂均为光谱纯。
1.2色谱条件
流动相：乙腈-甲醇-水(体积比70∶30∶30)，流速：1.5ml·min－1，柱温：70℃，AUFS：0.005。内标液：50 mg·L－1环孢菌素D(cyclosporine B, CyD)甲醇液。
1.3血样处理和进样
取CyA血样0.5 ml于10 ml具塞离心管，加入内标液20 μl，加盐酸溶液(180 mmol·L－1)1ml，在液体快速混合器上快速涡旋混合30s，加入叔丁基甲醚5ml，密塞，水平固定于康氏振荡器上，振荡5 min，4000r·min－1离心10min。取紫色醚层置5ml具塞离心管，加氢氧化钠溶液(95mmol·L－1)1ml；密塞，水平固定于康氏振荡器上，振荡5 min；4000r·min－1离心10min。取无色醚层置5ml具塞离心管，在40℃水浴中以N2吹干。残渣加120重组液(乙腈-水,70ml∶30 ml)，涡旋混合2 min；加正己烷1 ml，涡旋混合2 min，4 000 r·min－1离心5min，弃己烷层；残液加正己烷1ml，涡旋混合2min，4000r·min－1离心5min，弃己烷层。取最终残液40μl注入色谱仪。
1.4HPLC方法学考察
1.4.1标准曲线制备精密称取CyA对照品200 mg，制成2 g·L－1的乙腈储备液。以甲醇稀释储备液，制成5、10、20、40、50、60、80、100mg·L－1等系列质量浓度；分别取稀释液10μl，各加入盛空白兔血0.5ml的具塞离心管中，制成CyA质量浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8、1、1.2、1.6、2mg·L－1的系列标准血样，分别按前述方法处理和进样。采集色谱数据并进行谱图积分，以CyA与CyD的峰面积比值(A/Ai)对标准血样中的CyA质量浓度作线性回归。
1.4.2方法学考察按标准曲线方法配制0.1、1和2 mg·L－1的血样，按前述方法处理和进样，对CyA的绝对回收率、方法回收率、日内和日间精密度进行考察。取20μl内标液加入0.5ml空白血样中，同法考察内标的绝对回收率。配制不同低质量浓度的CyA血样，处理和进样，测定讯噪比为2时的检测量和检测质量浓度。各浓度的实验均重复5次。
1.5给药与取样
取2.5～3 kg的健康雄性白兔9只，随机分为3组，就San、NSC、NCC进行3个周期的交叉给药的动力学实验，洗净期为7d。耳缘静脉注射给药，剂量为4 mg·kg－1。于给药后0.167、0.5、1、2、4、8、12、24 h取全血0.5ml，按前述方法处理和进样，记录图谱并积分，以标准曲线计算全血药浓度。
2结果
2.1标准曲线和方法学结果
空白血样及含CyA和CyD的血样的HPLC图谱表明，家兔血液中的内源性物质不干扰CyA的测定，CyA与CyD为基线分离，分离度大于1.5。
标准曲线方程为：A/Ai=1.567ρ+0.413(r=0.9996，ρ的单位为mg·L－1)。内标的绝对回收率和RSD分别为78.57％和5.6％。0.1、1和2 mg·L－1的CyA血样的绝对回收率(RSD)分别为80.79％(7.9％)、84.00％(5.6％) 86.07％(4.1％)。CyA和CyD的绝对回收率均在70％以上，且相差不过10％。CyA的方法回收率为97.4％～102.6％。0.1、1和2mg·L－1的CyA血样的日内RSD分别为3.79％、2.22％和1.79％；日间RSD分别为4.18％、4.04％和5.65％。本法的最低检测量为10ng，最低检测质量浓度为20μg·L－1。
2.23种制剂的血药浓度数据及药物动力学参数
3种制剂家兔静脉注射的血药浓度数据列于表1。血药经3P87拟合计算的药动参数。通过比较3种制剂平均血药浓度的拟合结果，以二室模型和权重1/C2拟合药时数据计算药动参数较好，因此求得3种制剂的参数及其方差分析的结果列于表2。
表1家兔静<
