摘要目的：对19例鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤与EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的相关性进行研究。方法：利用免疫组织化学及原位杂交方法对EBV进行检测，并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞，以鉴定EBV阳性的细胞为B淋巴瘤细胞。结果：EBV编码的小mRNA探针(EBER)原位杂交显示，8例原发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤中3例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达，1例潜在性膜蛋白1(latent membrane protein 1, LMP-1)阳性。而11例继发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤EBER全部为阴性。全部病例进行了LMP-1检测，除1例原发者，全部阴性。 利用EBER-ISH（EBER原位杂交）和免疫组化CD 标记物进行双标记染色证实，EBER和LMP-1阳性细胞为CD 20阳性，CD 45RO阴性。鼻咽部原发性B细胞性恶性淋巴瘤EBV表达4/8，而继发者为0/11。结论：EBV与鼻咽部原发性B细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性，而与继发性者无关。

中国图书资料分类法分类号R739.6

Epstein-Barr virus is associated with primary but not secondary nasal B lymphoma

GAO Zi-Fen^＃, Faith C.S.HO, Alex C.L.CHAN，Qian TAO, Ramond LIANG, Gopesh SRIVASTAVA

(#Department of Pathology, Beijing Medical University, Beijing 100083)

MeSHLymphoma, B-cell/etiolEpstein-Barr virus/pathogenEpstein-Barr virus/isolImmunohistochemistryIn situ hybridization

ABSTRACTObjective： To study the relationship between nasopharyngeal B-cell lymphoma and Epstein-Barr virus(EBV) infection.Methods： Detection of EBV RNA and latent membrane protein 1（LMP-1） was conducted by immunohistochemistry and in situ hybridization(ISH), using ISH for EBER combined with immunohistochemistry for LMP-1 and CD markers, in order to determine whether the EBV positive cells were tumor cells.Results： 19 nasopharyngeal B lymphoma patients were investigated for EBV, ISH for EBER showed signal over virtually all the tumor cell nuclei in the 3/8 primary nasopharyngeal tumors, 1/8 primary case was EBER negative due to RNA degradation but was LMP1 positive. However, all the 11 secondary nasopharyngeal tumors were EBER negative whilst ISH for β-actin mRNA was positive for all these cases. Using ISH for EBER combined with immunohistochemistry for LMP1 and CD markers, the predominant lineage of EBV+ cells was identified as CD20+CD45RO- in one EBER+ case and one LMP1 case. Our results revealed that EBV was present in the tumor cells of 4/8 primary nasal B-cell lymphomas but not in those of secondary nasopharyngeal tumors.Conclusion:Our findings suggest that EBV is associated with the pathogenesis of primary, but not secondary nasopharyngeal B-cell lymphoma.

(J Beijing Med Univ, 1999,31:418-421)

EB病毒可以导致传染性单核细胞增生症和组织细胞坏死性淋巴结炎，与鼻咽癌和一部分胃癌也有较强的相关性^［1］。而且EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)与某些类型的淋巴造血系统恶性肿瘤有关。在地方性Burkitt淋巴瘤的发病中100%病例EBV阳性，在非地方性Burkitt淋巴瘤中EBV的表达仅为5%～20%。近年来由于人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)的感染，艾滋病病人伴有淋巴瘤时EBV的检出率为40%。在西方国家霍奇金病的R-S细胞中50%的病例EBV阳性^［2］，在我国成人检出率约40%，而在儿童将近100%^［3，4］。近来的研究证实鼻咽部T/NK型淋巴瘤与EBV有很高的相关性^［5］。

不同的研究结果显示T/NK型淋巴瘤与EBV几乎有100%的相关性^［5］，然而EBV与鼻咽B细胞恶性淋巴瘤的相关性一直不清，报告的研究结果从1例/10例到2例/3例^［6］。我们研究了19例鼻咽B细胞性恶性淋巴瘤与EBV感染的情况，显示原发性鼻咽B细胞性恶性淋巴瘤与继发性有显著的不同。

1材料与方法

1．1病例收集

我们选择了香港大学病理系存档的1985～1994年10年间的鼻腔、鼻咽部和鼻窦部位的19例鼻咽B细胞性恶性淋巴瘤(表1)。全部病例按照Kiel分型分类。例1和例3以前曾报道过^［5］。所有病例均有石蜡包埋组织块，4个病例同时有冰冻组织。

表1临床特点、肿瘤部位和EBV原位杂交

Table 1Summary of clinical feature,site of involvement and in situ hybridization for EBV

Case no. Sex/Age Site of tumor Diagnosis Neoplastic cells EBER+ β-actin Primary 1 F/66 NP^@ ML IB －* － 2 M/52 NP@+T LN L ML IB － ＋ 3 M/60 N^@ ML CB 70% ND 4 M/3 NP^@ ML B 95% ND 5 F/86 N^@ ML BL － ＋ 6 M/61 N^@ ＋LN ML P 90% ND 7 F/62 NP^@ ML LC － ＋ 8 M/59 NP^@ ＋LN ML CB － ＋ Secondary 9 M/63 NP^@ ＋T LN S ML LB － ＋ 10 M/70 NP^@ ＋T LN ML CB － ＋ 11 M/85 NP^@ ML CB － ＋ 12 M/60 NP^@ ML LC － ＋ 13 M/71 NP^@ ML LP － ＋ 14 F/26 NP^@ ML LP － ＋ 15 M/36 NS^@ ML LC － ＋ 16 M/88 NP^@＋ Palate ML CB － ＋ 17 F/61 NP^@ ＋T N LN ML CB － ＋ 18 M/53 NP^@ ＋LN T ML CB-CC － ＋ 19 M/69 NP^@ ＋LN ML IB － ＋

@，biopsy site； *，case with RNA degradation but LMP-1(+)； %，refers to total tumor cells； ＋，positive； －，negtive， F，female； M，male； N，nose； NP，nesopharynx； T，tosil； LN，lymph node； NS，nasal sinus； S，spleen； ML，malignant lymphoma； IB，immunoblastic； LB，lymphoblastic； CB，centroblastic； B，Burkitt's； BL，Burkitt like； CC，centrocytic； LC，lymphocytic； P，plasmacytoma； LP，lymphoplasmacytic； ND，not done。1．2原位杂交(in situ hybridization, ISH)

EBV编码的RNA(EBV encorded RNA, EBER)(YO17，Dako)和BHLF-1(Y018)为氢化荧光素异硫氰浓盐(fluorescein isothiocyanates, FITC)标记的寡核苷酸探针。EBER阴性病例用β-actin mRNA(X3302,Dako)检测组织RNA的存在情况。ISH方法参照Dako提供的方法进行，用3 mg·L^－1的蛋白酶K200μl消化切片，在37℃下杂交2h，BCIP/NBT显色，阳性信号为细胞核呈蓝紫色，每组实验设EBV感染的细胞系B95-8为阳性对照，阴性为TBS(tris-NaCl buffer solution)取代探针。甲基绿复染核。

1．3免疫组化

应用单克隆抗体CSI-4 检测LMP-1［体积比(下同)1∶10］、PE2检测EBNA2（1∶5)和BZ1检测ZEBRA（1∶10)。抗体为M. Rowe(Birmingham UK)馈赠。用SABC法在石蜡切片上检测EBV蛋白产物，DAB显色。APAAP法进行冰冻切片免疫组化染色。石蜡切片进行潜在膜蛋白(Latent memberane protein 1,LMP-1)检测需经过0.01 mol·L^－1的枸橼酸三钠的微波预处理。

1．4