免疫共沉淀方法如下:取RPMI-8866细胞约1×108个,用无血清RPMI-1640培养液洗两次;加入1ml细胞裂解液,4℃作用1h;12000r.min离心10min,取上清;上清与抗体标记的Sephrose4B按15∶1(体积比)混合,4℃轻摇反应20h
以上;用细胞裂解液洗两次,再用不含去污剂的细胞裂解液洗两次,最后用含1g*L-1去污剂的细胞裂解液洗两次,SDS-PAGE电泳。
免疫共沉淀结果:在Lane3中有4条带,除抗体轻、重链、CD23抗原带(经Westem验证)外,相对分子质量110000处出现一条新的蛋白带(pp110)。pp110和上述提到的蛋白质分子在相对分子质量上有显著的差异。在实验中,Digitonin能使pp110和CD23分子共沉淀出来,NP-40则破坏了它们之间的结合,说明pp110和CD23之间以微弱的非共价键结合。B细胞膜上CD23为a型,胞内部分有23个氨基酸残基,不大可能构成蛋白激酶的活性区域,其中有一个酪氨酸区域,因此pp110可能作用于此区域,从而使信号得以传递。pp110的结构及功能都在进一步研究中。
*国家自然科学基金(39470353)资助项目。
(1999-03-02收稿)
