P53蛋白在肿瘤组织中的表达水平及其与肿瘤分化、浸润、转移 以及预后的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一。我们应用流式细胞术检测胃癌组织P53 蛋白的表达水平，探讨其与胃癌发病的关系。

材料与方法

组织标本由北京天坛医院病理科提供，胃癌16例，不典型增生11例，肠上皮化生10例，浅表 性胃炎13例，正常胃粘膜10例。P53单克隆抗体pAb1801购于美国Ocogene Sci Inc。二抗为 荧光标记的羊抗小鼠抗体IgG-FITC，购于军事医学科学院微生物研究所(批号9109)。

1.单细胞悬液的制备：将石蜡组织块用切片机切成45μm厚的组织4～5片，加二甲苯5ml，室 温下脱蜡2天，期间更换3次，以充分脱蜡。然后，依次用95%、75%、50%梯度酒精水化，每 步10分钟，最后，用蒸馏水漂洗。捣碎组织片，加入0.5%胃蛋白酶(pH 1.5)，置37℃温箱 内消化30分钟，每隔10分钟摇动一次，消化结束后加生理盐水终止消化，用400目尼龙网过 滤，滤液用生理盐水漂洗，1 000rpm离心5分钟，弃上清，加75%酒精固定，置4℃冰箱中备 检。

2.P53蛋白的免疫荧光染色：将所制备的单细胞悬液用PBS以1 000rpm离心2分钟，洗涤2次， 弃上清，加1∶100稀释的鼠抗人P53蛋白单克隆抗体100μl，37℃水浴30分钟，用PBS离心2 次，弃上清液，加1∶20稀释的羊抗鼠IgG-FITC 100μl，37℃水浴30分钟，离心洗涤2次， 去上清，除去未结合荧光抗体，调整细胞数为1×10⁶/ml，上机检测。

3.流式细胞仪检测：流式细胞仪为FACSCan (Becton Dickison)。所测数据用Lysys Ⅱ软件 处理。

4.测量数据的分析：以DNA指数值(DI)作为判断DNA倍体的标准，DI=1.0±2CV为二倍体肿 瘤，DI≠1.0±2CV为异倍体肿瘤。用cell Fit软件处理得DNA组方图各期百分比，以增殖指 数(PI)表示细胞增殖活性。以荧光指数(FI)表示P53的相对含量，公式为：FI=(瘤细胞P53平 均荧光强度-对照组平均荧光强度)/正常胃粘膜细胞P53平均荧光强度，如FI＞1.0为P53阳 性，FI＜1.0为阴性。

5.统计学处理：用方差分析及t检验进行统计学分析。

结果

1.各组FI值：见表1。

2.不同病变DNA倍体分布：见表2。

3.不典型增生及胃癌的增殖活性及DNA倍体与P53蛋白表达的关系：见表3。

表1胃癌及癌前病变P53蛋白的FI值(±s)

组织 例数 FI值 正常胃粘膜 10 0.602±0.077 浅表性胃炎 13 0.898±0.052 肠上皮化生 10 1.050±0.074^* 不典型增生 11 1.143±0.060^*△ 轻 4 0.924±0.068 中 3 1.152±0.092 重 4 1.501±0.096 胃癌 16 1.866±0.096^*▲#△

与正常胃粘膜组比较 * P＜0.05；与浅表性胃炎组比较△ P＜0.05 ；与肠上皮化生组比较▲ P＜0.05；与不典型增生组比较# P＜0.05

表2不同病变DNA倍体情况

组织 例数 二倍体 异倍体 异倍体率(%) 正常胃粘膜 10 10 0 0 浅表性胃炎 13 13 0 0 肠上皮化生 10 10 0 0 不典型增生 11 8 3 27.2^*△▲ 轻 4 4 0 中 3 2 1 重 4 2 2 胃癌 16 0 16 100^*△▲

与正常胃粘膜组比较* P＜0.05；与浅表性胃炎组比较△ P＜0.05；与肠上皮化生组比较▲ P＜0.05；与不典型增生组比较# P＜0.05

表3不典型增生及胃癌DNA倍体与P53蛋白表达的关系 (±s)

DNA倍体 例数 PI FI P53阳性例数(%) 二倍体 8 12.08±1.11 1.134±0.142 2(25) 异倍体 19 25.02±6.89^* 1.883±0.202^* 13(68.4)^*

*与二倍体比较 P＜0.05

讨论

P53是一种很独特的基因，正常时是一个肿瘤抑制基因，突变后则是一个典型的显性癌基因 。研究表明，突变体P53基因产生的P53蛋白与肿瘤的发生有关。我们应用流式细胞术检测胃 癌，癌前病变及胃炎病理组织中P53蛋白的表达水平，结果表明，胃癌及癌前病变P53蛋白的 表达水平明显高于正常胃粘膜及浅表性胃炎，胃癌高于不典型增生及肠上皮化生，均有显著 性差异(P＜0.05)。同时可以看到，P53蛋白的表达水平从肠上皮化生、不典型增生到 胃癌呈递增趋势。在异倍体标本中，P53蛋白阳性为68.4%，二倍体标本P53蛋白阳性率为25 %，二者有 显著性差异(P＜0.05)。从增殖活性看，异倍体标本与二倍体标本的PI值有 显著性差异(P＜0.05)。有学者应用免疫组化技术研究发现胃癌P53蛋白阳性率为61%， 重度不典型增生P53蛋白阳性率为20%，还有文献报道不典型增生及胃癌P53蛋白阳性率均为6 0%。我们的结果为不典型增生P53蛋白阳性率为27%，胃癌为68%。关于阳性率的差异可能与 检测方法不同有关，但我们的结果和报道资料都表明胃癌P53蛋白的表达水平增高。因此，P 53蛋白过度表达可能与胃的发病有关，检测P53蛋白的表达水平对胃癌的诊断可能有一定的 价值。关于癌前病变P53蛋白的表达水平及其意义有待进一步探讨。

收稿：1999-04-12

修回：1999-11-08