摘要目的:研究100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。方法:在吗啡戒断18～24h的大鼠模型上，腹腔注射阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone, NX)或侧脑室注射κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphimine (nor-BNI)，给予100 Hz电针刺激，记录吗啡戒断大鼠清醒状态下的心率和血压。结果：100 Hz电针的作用可被腹腔注射NX 1 mg^.kg^－1完全翻转、被侧脑室注射Nor-BNI 12nmol完全阻断。结论：100 Hz电针抑制吗啡戒断大鼠心动过速的作用主要是通过中枢κ阿片受体介导的。

中国图书资料分类法分类号R245.1

100 Hz electroacupuncture amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats mediated by κ-opioid receptor in central nervous system

YU Yun-Guo^＃， CUI Cai-Lian， YU Ji-Ren， HAN Ji-Sheng

(＃Neuroscience Research Institute, Beijing Medical University, Beijing100083)

MeSHElectroacupunctureReceptors, opioid, kappaSubstance withdrawal syndrome/rehabil

Morphine/adv effTachycardia/ther

ABSTRACTObjective: To study the receptor mechanism of 100 Hz electroacupuncture (EA) amelioration of tachycardia of morphine withdrawal rats.Methods: Morphine dependence was induced in Wistar rats using 8-day-morphine-injection regime. Heart rate and blood pressure of the rats were recorded after 18-24 h of morphine abstinence, and 100 Hz EA stimulation was then given.Results: Tachycardia of the rats was ameliorated by 100Hz EA, those effect was reversed by injecting opioid-receptor antagonist naloxone (i.p. at 1 mg^.kg^－1), or by administrating selective κ-opioid receptor antagonist nor-BNI (intracerebro-ventricular injection i.c.v. at 12nmol).Conclusion:The effect of 100 EA in ameliorating tachycardia during morphine abstinence was mediated by κ-opioid receptors in CNS.

(J Beijing Med Univ, 1999,31：1-4)

本研究所以往的实验证实100 Hz的电针(electroacupuncture, EA)或者经皮电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation, TENS)产生镇痛作用主要是通过促进动物和人脊髓释放强啡肽(dynorphin, Dyn)而实现的^［1，2］。其后又将100 Hz电针用于治疗动物和人的吗啡戒断症状均取得了显著疗效^［3，4］。在临床观察中发现，阿片成瘾者在戒断综合征发作时，心动过速是最容易进行客观记录的指标之一。给这些患者施以100 Hz电针治疗时，戒断症状被抑制，而心动过速的缓解尤为明显，在初次治疗时就可见心率迅速而平稳地恢复至接近正常水平^［5］。本实验采用无创性心率/血压记录仪，观察清醒大鼠心率/血压，发现吗啡戒断大鼠也出现明显的心动过速。100 Hz电针刺激可使心动过速明显缓解。在该模型上，我们观察阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone， NX)和高选择性κ阿片受体拮抗剂nor-binaltorphine(nor-BNI)对100 Hz电针作用的影响,以期阐明100 Hz电针缓解吗啡戒断大鼠心动过速的受体机制。

1材料与方法

1.1吗啡依赖大鼠模型

雄性Wistar大鼠，体重230～280g，每两只饲养在一笼中，给自然照明，自由摄入水和饲料。皮下注射（subcutaneous，s.c.）逐日递增量盐酸吗啡溶液。递增法：在第1天至第8天吗啡的每次注射剂量分别为5、10、20、40、50、60、70、80mg*kg^－1，每日3次，分别在7 am、3 pm、11 pm注射。第8天7 am、3 pm各注射一次吗啡后停止给药。在最后一次注药后18～24h进行下列实验。

1.2实验仪器

无创性心率/血压记录仪（IITC，USA，型号-69A），示波器（Techtronix, USA，型号：5A18N），韩氏（HANS）恒流电针仪（Healthronix, Singapore, 型号：LH257），大鼠立体定位仪（Narishige, Japan, 型号：SN-2），恒温控制仪（上海）。

1.3侧脑室插管

大鼠在水合氯醛（350 mg*kg^－1）腹腔注射(intraperitoneal, i.p.)麻醉下，按照Paxinos & Watson大鼠脑立体定位图谱要求，在AP-0.8, L+1.5, V+3.6mm部位钻孔。将预先制作好的不锈钢套管(直径0.8 mm)垂直插入，用牙托粉固定，套管内插入内套管(即注射管，直径0.5 mm)后加盖密封管口。术后肌肉注射氯霉素预防感染。

1.4心率、血压测定方法

将吗啡戒断18～24h内的动物小心轻柔地固定在特制的固定器内，剪去大鼠尾根部的毛(接受电针的大鼠用体积分数为75%的酒精擦洗消毒)，在双侧后肢足三里（St36，胫骨前结节外侧5mm）和三阴交（Sp6，胫骨后内踝上部3mm）分别插入不锈钢针灸针，将动物放置于自动温控的恒温装置内，温度控制在（28±1）℃。将鼠尾穿过心率检测仪的光敏转换器,通过该转换器将动脉搏动的压力信号转变为电信号，并输入到放大器中。保持安静20 min后，打开记录仪，走纸速度设定为5 mm^.s^－1，每10 min记录1次，每次记录持续1 min，以每分心搏次数表示心率；以舒张压＋1/3×脉压差为平均动脉压(kPa, 10 kPa=75 mmHg)。电针时接通HANS仪，用示波器监测电流的输出，刺激信号为方波，波宽为0.3 ms，频率100 Hz，强度为1mA，刺激持续时间为30 min，在测定心率和血压时暂停电针刺激。电刺激后继续观察30min。接受电针或注射药物的大鼠，均测定心率和血压9次。以给药或电针前3次测定的平均值作为基础心率/血压；给药后测定6次，于电针中和电针后分别测定3次，以每3次测定的平均值作为该30min的心率/血压值。在检测期间尽量避免刺激动物，保持环境安静。

1.5注射药物

测定基础心率、血压后，腹腔注射NX，剂量分别为1、5、10 mg^.kg^－1，按照上述方法记录心率和血压。侧脑室注射nor-BNI：用微量进样器从预先放置的内管注入，注射管的头端超出套管头端1mm。注射体积为10μl，之后按照上述方法记录心率和血压。实验结束后在套管内注射体积分数为10%的苯胺黑10μl，立即断头处死动物，体积分数为10％福尔马林固定鼠脑组织，切片，观察插管部位，如果插管偏离侧脑室部位，该动物不在数据统计之列。

1.6实验数据处理

数据以±s_表示。统计学分析采用ANOVA，继之以Newman-Keul test检验组间差异。

2结果

2.1NX对吗啡戒断大鼠心率的影响(表1)

表1NX对吗啡戒断大鼠心率和血压的影响(±s₎

Table 1Effect of NX on the heart rate and mean blood pressure of

morphine withdrawal rats(±s₎

Group n Before

injection 0～30min 31～60min f/min^－1 Normal rats＋NS 7 383±5 375±7 366±8 MW＋NS 8 453±8 430±8 420±11 MW+NX 1 mg^.kg^－1 8 462±4 439±7 426±12 MW+NX 5 mg^.kg^－1 8 455±6 453±8^* 445±11^* MW+NX 10mg^.kg^－1 8 452±5 462±7^* 455±11^* p/mmHg Normal rats＋NS 7 119±4 118±7 117±6 MW＋NS 8 116±4 115±6 117±6 MW+NX 1mg^.kg^－1 8 116±4 119±5 121±6 MW+NX 5mg^.kg^－1 8 122±5 121±7 122±6 MW+NX 10mg^.kg^－1 8 123±4 119±6 118±5

NS