摘要：目的研究实验犬食管支架术后2、24 h局部粘膜对聚乙二醇₄₀₀（PEG₄₀₀）通透性的变化。方法选择成年健康犬12只，均分为A、B两组，分别置入“Z”型食管支架。支架术后2 h选择A组犬进行食管持续恒压PEG₄₀₀灌流，2 h后取出置架部位的食管组织及等量正常食管组织，通过气相色谱分析法检测组织中PEG₄₀₀的含量，并进行比较。B组犬于术后24 h同样方法进行气相色谱分析。结果支架术后2 h食管组织中PEG₄₀₀的含量较正常明显升高，主要表现为一些低分子量的PEG₄₀₀，术后24 h PEG₄₀₀的通透性进一步增强，可检测到一些高分子量的PEG₄₀₀。结论支架置入可导致食管局部粘膜对PEG₄₀₀通透性显著升高，从而为外源性致病原的介入创造条件。说明支架对粘膜具有明显的破坏作用。

自由词：食管支架

中图分类号：R571；R446.1文献标识码：A

文章编号：1000-1492(2000)05-0333-03

近年来金属食管支架在临床上得到广泛应用，逐渐成为治疗食管良性狭窄的重要手段。但支架术后可产生一系列并发症，如炎症、溃疡、穿孔、再狭窄等，这些并发症严重影响了支架的疗效。有关支架术后食管局部的病理生理变化，目前尚未见文献报道。本实验从食管粘膜通透性的角度对支架术后食管壁的病理生理变化进行深入探索，从而为支架的临床研究提供依据。

1材料与方法

1．1主要试剂及仪器实验犬由本校动物中心提供，健康、成年，♀♂不限，体重8～10 kg。聚乙二醇₄₀₀(PEG₄₀₀)购于上海生化试剂公司，分析纯，日本进口分装，相对分子质量242～594，结构式：HO(CH₂H₂)_n-H。乙酸酐、冰乙酸、高氯酸、甘露醇、二氯甲烷、正己烷(上海生化试剂公司)；4%多聚甲醛-2.5%戍二醛(本室自配)；胃镜(Olympus GIF-Q)及全套辅助系统；食管“Z”形支架(由江苏淮阴西格玛公司提供，配有相应的传送装置)；全套外科手术器械(本室自备)；Polytron组织匀浆器(本室自备)；倒置相差显微镜(本室自备)；低温离心机 (美国杜邦公司)；气相色谱仪(惠普公司HP5890)；毛细管色谱柱(惠普公司HP-5MS 30 m×0.25 mm×0.25 μm)；氢火焰检测器Air∶H₂为10∶1(ml*min^-1)。

1．2实验方法

1．2．1动物实验及标本留取选择12只实验犬，均分为A、B两组。所有实验犬分别经戊巴比妥腹腔麻醉后置于手术台上，胃镜引导下置入食管支架。A组犬于支架术后2 h接受手术。先切开颈部皮肤组织，游离出颈部食管并插入引流管，结扎食管使下段管腔仅与引流管相通。同样方法切开犬上腹部，于贲门部位插入引出导管，结扎贲门部食管并使导管与上段管相通。经上端引流管持续灌注PEG₄₀₀(由输液泵保持恒定的输液速度)，使食管腔逐渐充盈，当达到一定的腔内压后便可经引出管流出食管。持续灌流2 h，同样也保证了恒定的管腔内PEG₄₀₀浓度与压力。B组犬于支架术后24 h用同样的方法进行PEG₄₀₀灌注试验。两组实验犬均应保持同样的PEG₄₀₀输入速度与灌注时间。灌注结束后取出食管，用生理盐水（NS）反复冲洗，去除管壁残留的PEG₄₀₀。

所有实验犬分别留取支架上端、中部、下端的食管组织以及远离支架部位的正常食管组织，各称取1 g后在液氮冷冻下研成粉末，再分别溶于5ml NS中，Polytron匀浆器反复匀浆，至显微镜下观察无成形的细胞和组织碎块为止。低温离心后留取上清液并定容至5 ml，-20℃保存备用。

1．2．2样品及标样处理标样0.2 ml(约0.25 g)置于具塞玻璃离心管，加2 ml内标溶液(甘露醇水溶液，10 mol*L^-1)，加乙酸酐2 ml，摇匀后缓慢滴加0.1 ml高氯酸-冰乙酸溶液(10∶90)。室温放置45 min，振荡1 min，离心1 min；弃上层水相；下层加2 ml去离子水，振荡1 min，离心1 min；弃上层水相，如此重复洗涤3次，真空抽干。离心管中加二氯甲烷2滴，正乙烷2滴溶解，取1 μl进样进行气相色谱分析。样品处理方法同样。

色谱条件：分流式进样；FID检测；氮气作载气，平均线速1.0 cm*min^-1。程序升温：起始温度120℃，保持时间3 min，升温速率4℃*min^-1，终止温度330℃，保持时间8 min。

1．2．3数据处理及粘膜通透性分析据PEG₄₀₀标样的出峰温度、面积，算出总面积及各面积的百分率和样品的百分率；据PEG₄₀₀的称量值，算出每个峰的绝对含量(4舍5入，保留两位小数)，进而计算出每克组织中某种相对分子质量PEG的绝对量(mol)，即吸收值。通透性结果以PEG总吸收值表示，即每克食管组织中PEG的总量(mol)。

2结果

2.1气相色谱分析的方法建立根据上述气相色谱分析的条件，检测出标样液PEG₄₀₀中各成分的比例，其结果与厂家提供的产品说明完全吻合（见图1）。可见实验中采取的分析条件准确、可靠。

2.2PEG₄₀₀的通透性变化两组实验犬支架术后食管组织中PEG的吸收值变化如图2、表1所示。正常食管对PEG无通透性； 术后2 h PEG通透性明显增强，主要表现为组织对一些小分子质量PEG吸收值的升高；术后24 h食管粘膜对PEG通透性进一步增强，组织对PEG的总吸收值较术后2 h明显升高，而且一些较大分子量的PEG也表现出较强的通透性。支架上端、中部、下端粘膜对PEG的总吸收值差异无显著性。

图1低分子量PEG₄₀₀毛细管气相色谱分析图

图2支架术后中部食管组织中PEG₄₀₀的吸收值

与2 h相比：P＜0.01

表1支架术后食管组织中PEG₄₀₀总吸收值变化(×10^-2 mol)

组别 n 上端 中部 下端 术后2h 6

29.80±3.67

34.24±5.81 32.31±4.96 术后24 h 6 90.16±7.45^* 96.32±9.61^* 92.48±8.84^*

与2 h相比： ^*P＜0.01

3讨论

近年来有关消化道粘膜通透性方面的研究国内外报道很多，但多局限于胃及肠道系统的研究，而有关食管粘膜通透性的研究则未见文献报道。正常胃肠粘膜除了吸收作用外尚有一定的分子屏障功能，能阻挡一些潜在的抗原物质、毒素、致癌物等等。肠粘膜的通透性通常被定义为：某种特定的化学物质由被动扩散的方式透过肠粘膜表面进入肠组织的趋势。一般化学物质通过肠壁的途径有两种，第一种主要通过细胞表面的微孔、细胞间的微隙以及细胞膜的脂溶性途径，第二条途径主要是透过细胞间的表面连接^〔1，2〕。细胞间连接的变化是决定一些较大分子量物质通透性的重要因素。桥粒存在于上皮组织中，主要是维持上皮结构的完整性，半桥粒位于上皮细胞的底面，作用是把上皮细胞与其下方的基板(basal lamina)连接在一起。桥粒、半桥粒及上皮基底膜对维持上皮组织结构的稳定性及分子屏障功能具有重要意义。近年来一系列研究提示，胃肠粘膜通透性的异常升高是粘膜损伤的重要标志。余佩武等^〔3〕发现，腹部创伤感染后，胃肠通透性明显升高；形态学分析提示，上皮广泛受损，粘膜结构发生紊乱。另外通透性升高也可进一步促使外源性损伤因子的介入，从而加剧局部组织的病理损害^〔4〕。

目前有关粘膜通透性检测方面的文献国内外报道较多，其关键是选择一种有效的分子探针。Ghandehari等^〔5〕报道，探针分子的分子量及几何形状是影响其通透性的重要因素，综合两方面目前常用分子探针的通透性变化如下：甘露醇＞乳果糖＞PEG₄₀₀＞PEG₉₀₀＞PEG₄₀₀₀，其中PEG₄₀₀最能客观全面地反映通透性变化。PEG₄₀₀是一种相对分子质量为242～594的混合物(平均相对分子质量为400)，不被肠道细菌分解，亦不被人体组织吸收代谢，且对人体无毒害，是一种较理想的肠道通透能力测定示踪剂。

国内外学者^〔6，7〕通常通过检测尿液中某种示踪分子的含量来反映胃肠粘膜的通透性。本实验采用食管直接PEG₄₀₀灌流，然后直接检测组织中PEG₄₀₀的含量，这样一方面避免了动物配合困难的因素，另外尚能直接、客观地反映出食管的通透性。PEG₄₀₀具有良好的水溶性，组织经充分匀浆后，其中PEG能有效地溶解于周围液体中，因此匀浆离心后上清液中PEG含量能客观地反映组织中吸收的PEG量。实验中统一规范了所有实验犬的灌流条件，如PEG浓度、灌流液压力、时间等，这样组织中PEG的含量便与粘膜通透性直接相关。毛细管气<