摘要目的研究Wilson病(WD)患者经驱铜及抗氧化剂治疗前后血清氧化物和抗氧化物水平的变化。方法应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和化学比色法测定29例WD患者治疗前及两种不同治疗后血清中氧化物和抗氧化物浓度，并把患者组和正常对照组比较以及不同治疗前后比较。结果与正常对照组比较，WD患者血清氧化物增高，抗氧化物下降，而驱铜及驱铜联合抗氧化剂治疗后，血清氧化物水平下降，抗氧化物水平上升，且后者改变更明显。结论驱铜治疗能显著改善WD患者血清中自由基的代谢紊乱，而联合应用抗氧化剂后改善更明显。

中图分类号R742.4；R979.9

文献标识码A文章编号1000-1492(2000)04-0266-03

Study on the serum levels of the oxidants and

the antioxidants in the patients with Wilson's

disease before and after the treatment of

copper-cleaning agents and antioxidants

Zhang Zunsheng, Yang Renmin

(Dept of Neurology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou221001)

AbstractObjectiveTo study the serum levels of the oxidants and the antioxidants in the patients with Wilsons disease before and after the treatment of copper-cleaning agents and antioxidants. MethodsFirst, the serum levels of the oxidants and the antioxidants in the 29 cases of WD and 21 normal controls were determined by high performance liquid chromatograph(HPLC) and the bichemical color-compared methods. Then, all patients serum levels of oxidants and anti-oxidants after treatment were determined and compared with those before. ResultsCompared with controls the serum levels of oxidants were increased and the those of antioxidants were decreased in the patients with WD. After treatment of copper-cleaning agents and combined with exogenous antioxidants, the serum levels of oxidants were decreased and the those of antioxidants were increased, but latter changed more significantly. ConclusionCopper-cleaning agents can improve metabolism disorders of FRs, while if with exogenous FRs scavenger it will be better.

MeSHheptolenticular degeration/drug therapy; antioxidants/therapeutic use; free radicals/metabolism

Wilson病(WD)是以铜代谢障碍为特征的常染色体隐性遗传性疾病。铜是一种强氧化剂，它在体内各脏器内沉积产生大量的自由基(FRs)，而FRs对体内细胞膜、细胞器、DNA起氧化破坏作用，从而使肝、脑、肾、角膜等受到损伤^〔1～5〕。我们研究了WD和正常对照组血清中FRs和抗氧化物水平以及经过驱铜和联合应用抗氧化剂治疗后上述指标的不同变化。

1对象与方法

1.1研究对象

1.1.1研究组1998年6月29日～11月18日安徽中医学神经病研究所住院病人29例，参照杨任民等的诊断标准确诊。男22例，女7例；起病年龄7～34岁，平均16.7岁±6.98岁。

1.1.2正常对照组21例健康志愿者，为本院大学生和本所工作人员。男性17例，女性4例，平均年龄18.5岁±3.5岁。

1.2实验方法

1.2.1取血方法病人和正常对照组取血2次，治疗前1次，4个疗程结束后1次；均于早晨空腹取静脉血5 ml，立即离心，取血清用1.5 ml试管分装，充氮气后密封放入超低温冰箱中保存待测。

1.2.2用药方法29例病人随机分两组治疗：①单纯驱铜组19例：给肝豆片每次4～10片，每日3次；二巯基丙磺硫钠(DMPS)20 mg·kg^-1.d^-1，每1疗程6天，休息2天，间歇期补充铁、锌、钙。②联合用药组10例：除按上述方法驱铜外，每人加用Vit E 0.1 g每天1次，Vit C 0.2 g每天3次，还原型谷胱甘肽(TAD)0.6 g静脉滴注，每日1次。

表1WD患者治疗前血清MDA、GSH-Px、GSH、Vit E的比较(±s)

组别 n MDA

(μmol·L^-1) GSH-Px

(U·10^4.L^-1) Vit E

(mg·L^-1) GSH

(mg·L^-1) 对照组

21

5.28±3.19

117.98±32.17

6.19±1.71

211.78±73.60 WD组 29 9.75±2.78^ 74.40±33.80^ 4.35±1.68^ 154.70±55.20^

与对照组比较：P＜0.05,^P＜0.01

表2单纯驱铜组WD患者治疗前后血清中MDA、GSH-Px、Vit E、GSH的比较(±s，n=19)

组别 MDA

(μmol·L^-1) GSH-Px

(U·10^4.L^-1) Vit E

(mg·L^-1) GSH

(mg·L^-1) 疗前组

9.78±2.58

75.0±31.7

4.20±1.50

162.50±53.20 疗后组 7.80±2.20^△ 96.0±28.0^△ 5.10±1.52 190.30±61.30

与治疗前组比较：^△P＜0.05

表3驱铜剂联合应用抗氧化剂的WD患者治疗前后血清中MDA、GSH-Px、Vit E、GSH的比较(±s,n=10)

组别 MDA

(μmol·L^-1) GSH-Px

(U·10^4.L^-1) Vit E

(mg·L^-1) GSH

(mg·L^-1) 疗前组

9.72±2.41

71.8±32.0

4.4±1.7

166.4±57.2 疗后组 6.14±2.39^△△ 116.0±33.0^△△ 7.0±2.0^△△ 230.9±72.0^△

与疗前组比较：^△P＜0.05,^△△P＜0.01

1.2.3指标的选择和测定我们选定丙二醛(MDA)作为衡量氧化物自由基(FRs)的水平，选定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)及Vit E作为抗氧化物水平的指标。上述指标MDA、GSH-Px、GSH采用化学比色法，按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书步骤进行测试。Vit E的浓度采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定。其标准液的配制、标本的预处理及色谱分析的条件均参考王光亚^〔7〕、郑素芳^〔8〕的VitE的检测方法，测定结果由Gold System数据处理站自动分析计算。

1.3统计及处理方法数据±s表示，用成组资料、配对资料的t检验方法及直线相关分析。

2结果

2.1从表1可以看出治疗前WD患者和正常对照组相比MDA增加84.66%，差异有显著性(P＜0.01)；GSH-Px降低36.94%，差异也有显著性(P＜0.01)；Vit E下降30%(P＜0.05)，GSH下降27%，差异均有显著性(P＜0.05)。

2.2从表2可以看出，在19例单纯肝豆片和DMPS驱铜组患者血清中MDA与疗前比下降了20%，差异有显著性(P＜0.05)；GSH-Px值增高了28%，差异也有显著性(P＜0.05)；Vit E、GSH的变化无统计学意义，但Vit E及GSH有升高趋势。该组资料提示驱铜治疗降低了FRs水平，提高了GSH-Px酶活力，但VitE、GSH增加无统计学意义。