摘要目的探讨血液透析对尿毒症患者外周血中性粒细胞表面粘附分子CD11b、CD62L表达的影响。方法采用单克隆技术及流式细胞分析技术检测血透过程中尿毒症患者中性粒细胞表面CD11b、CD62L的表达水平，观察不同透析膜对其的影响。结果尿毒症患者单次透析前中性粒细胞CD11b的表达密度增高，CD62L的表达密度降低；血透开始后，中性粒细胞表达CD11b的表达迅速上升，CD62L的表达则明显下降，铜仿膜组(CU)与聚枫膜组(PS)相比无差异。结论血液透析对中性粒细胞粘附分子的表达有规律性的影响，这可能损害了中性粒细胞的粘附能力，削弱了机体的免疫力。

中图分类号R692.5

文献标识码A文章编号1000-1492(2000)03-0199-03

Effects on the expression of CD11b, CD62L by

granolocytes during hemodialysis

Wang Deguang, Li Xijie, Yu Xueqing et al

(Dept of Nephrology, The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen

University of Medical Sciences, Guangzhou 510080)

Abstract Objective To investigate the changing role of granulocytes CD11b, CD62L expression in patients during hemodialysis. MethodsThe expressions of CD11b,CD62L on granulocytes were assessed by flow cytometry. Results A significant upregulation of the CD11b, and a downregulation of the CD62L were found in uremic patients before a single hemodialysis, as compared to normal group. Shortly after hemodialysis the expression of CD11b increased rapidly, while that of CD62L decreased significantly. There was no statistical difference between CU group and PS group in the magnitudes of these changes. Conclusion The turbulence of granulocytes CD11b, CD62L expression were found not only during hemodialysis but also before a single hemodialysis course. All of these changes are not associated with the dialyzer membranes.

MeSH uremia/therapy; hemodialysis; neutrophils; cell adhesion

目前的研究发现粘附分子的表达在炎症细胞的游走聚集、免疫细胞的激活过程中起重要作用。尿毒症毒素、代谢紊乱及血液透析可能通过影响白细胞表面粘附分子的正常表达而降低慢性血透患者免疫能力。因此，本研究探讨20例慢性透析患者透析过程中中性粒细胞CD11b、CD62L的表达规律及不同透析膜对其的影响。

1对象和方法

1.1研究对象的选择及分组20例均为我院人工肾透析的稳定性慢性终末期肾功能衰竭患者，原发病为慢性肾小球肾炎，每周透析3次，每次4 h，透析器均为首次应用，采用碳酸氢盐透析，维持透析时间≤12月，随机分为两组：①铜仿膜组(CU)，10例，男9例，女1例，年龄18～62岁，平均(43.0±14.5)岁，平均透析时间(5.4±4.0)月。②聚枫膜组(PS)：10例，男7例，女3例，年龄27～60岁，年龄27～60岁，平均(43.7±9.1)岁，平均透析时间(5.8±4.0)月。并设健康对照组，10例，为体检者及健康自愿者，男8例，女2例，年龄20～70岁，平均(39.1±14.6)岁。

1.2实验方法

1.2.1标本采集在血透患者透析前、透析开始后30 min、结束时(240 min)从血管通路动脉端各留取血标本1 ml，健康对照组于早晨08：00抽取空腹血标本1 ml，EDTA抗凝后送流式细胞仪室检查。

1.2.2白细胞的准备每份标本编两个试管，一管加入20 μl对照试剂，另一管加入FITC-CD62L、PE-CD11b单克隆抗体20 μl。每管各加入全血100 μl，在室温(18～25℃)下避光孵育15 min后加入流式细胞仪工作液，放入Q-prep标本制备仪上自动溶解红细胞。把溶解红细胞后的标本以2 000 r*min^-1离心5 min，去上清后加入0.3 ml磷酸盐缓冲液。

1.2.3流式细胞仪分析激光管预热30 min后用荧光微球调整仪器，使各放大器接受信号的HCV(half coefficient of variation)值＜2%，根据细胞大小、所含颗粒性质，用前向散光(forward light scatter,FSC)和侧向散光(linear side scatter,SSC)把中性粒细胞与单核细胞、淋巴细胞区分开来。以对照管作为空白定标，计算5 000个中性粒细胞，记录标本的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。

1.3统计学分析所有数据均以±s表示，采用单因素方差分析，所有统计均由SPSS 7.5完成。

2结果

2.1单次透析前中性粒细胞CD11b、CD62L表达与健康对照组比较见表1。从表1可见，透析组中性粒细胞CD11b表达密度明显升高，CD62L表达明显降低，与健康对照组比较差异有显著性，铜仿膜组与聚枫膜组相比无显著性差异。说明血液透析前就已存在中性粒细胞高CD11b，低CD62L现象。

2.2透析过程中性粒细胞CD11b、CD62L表达由表2可见，透析开始30 min后CD11b表达迅速上升，在透析结束时仍保持较高水平；而CD62L表达迅速下降，在透析结束时恢复到透前值，但在透析过程中各时段，铜仿膜组与聚枫膜组中性粒细胞CD11b、CD62L表达差异均无显著性。

表1单次透析前中性粒细胞CD11b、CD62L

表达与健康对照组比较(n=10)

组别 CD11b CD62L 对照组

20.2±3.5

3.25±1.50 CU组 28.5±11.4^* 1.56±0.56^** PS组 31.7±9.7^** 1.54±0.42^**

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2透析过程中性粒细胞CD11b、CD62L表达(n=10)

时间(min) CD11b(MFI) CD62L(MFI) CU组 PS组 CU组 PS组 0

28.5±11.4

31.7±9.7

1.56±0.56

1.54±0.42 30 40.3±8.4^** 37.2±10.7 0.95±0.38^* 1.06±0.44^* 240 39.1±11.3^** 40.6±6.6^* 1.57±0.64 1.64±0.56

与透析开始时比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

3讨论

CD62L又称白细胞选择素，主要表达在中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞表面，它通过与唾液酸化路易斯寡糖结合介导白细胞沿血管内皮细胞滚动；CD11b属整合素家族的成员，主要表达在中性粒细胞和单核细胞表面，它和免疫球蛋白超家族类粘附分子的相互作用介导中性粒细胞与血管内皮细胞紧密粘附，这两个过程是白细胞尤其是中性粒细胞发挥抗炎作用不可缺少的，它们的缺乏可导致机体反复发生严重而致命的感染^〔1,2〕。慢性血透患者感染的发生率与致死率高，可能是尿毒症毒素和血透通过影响粘附分子的正常表达而干扰了中性粒细胞向炎症部位游走、聚集和吞噬。

我们经研究发现，单次透析前患者外周血中性粒细胞已出现高CD11b、低CD62L表达，铜仿膜组与聚枫膜组透析前相比并无统计学意义，Zachee等^〔3〕研究发现间隔2天与间隔3天的血透患者透析前中性粒细胞CD11b、CD62L表达与从未透析终末期尿毒症患者比较无差异。这说明尿毒症毒素、尤其是循环中浓度相对稳定的中、高分子毒素可能是引起中性粒细胞CD11b表达上升CD62L表达下降的因素。

本组用铜仿膜透析时发现：中性粒细胞表达CD11b在透析30 min时达高峰，透析结束时比峰值稍低；CD62L表达在透析30 min时降至最低，透析结束时恢复到透析前水平，与文献^〔3〕报道相符；Himmelfarb等^〔4〕研究发现具有补体激活作用的透析膜才引起中性粒细胞CD11b(MAC-1)表达升高，CD62L(LAM-1)表达降低，并在体外研究中发现外源性C_5a可使中性粒细胞CD11b表达增加。因此认为激活的补体与白细胞上相应的受体结合，引起CD11b表达上调。但令人感兴趣的是：我们在通常认为生物学相容性好的合成膜(PS膜)透析时中性粒细胞也出现这种变化，而且在透析过程中各时段与铜仿膜透析组差异均无显著性，尽管聚枫膜并无明显的补体激活作用。国外也有文献观察到这种现象^〔3〕。推测其可能原因为：①生物学相容性好的透析膜引起极少量的补体激活，尽管常规方法无法测出，但足以引起中性粒细胞CD11b表达的增加^〔5〕；②循环的中性粒细胞与透析膜吸附的C3a反复作用^〔6〕；③除补体外