摘要目的研究芪加合剂对荷瘤(Lewis肺癌)小鼠免疫功能的影响。方法检测脾细胞产生IgM、血清中IgG含量和鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF)，以及鼠外周血象的测定。结果芪加合剂(13.75～27.5 g·kg^-1)可使荷瘤小鼠低下的IgM、血清中IgG含量恢复至接近正常水平，可促进荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF；还可使荷瘤小鼠低下的红细胞数、血红蛋白量、白细胞数和血小板数等血常规指标恢复至接近正常水平。结论芪加合剂抑制肿瘤作用可能与其提高荷瘤小鼠的免疫功能有关。

中图分类号R734.2； R979.14

文献标识码A文章编号1000-1492(2000)02-0118-03

Effect of Qijiaheji on immune function

of mice bearing tumor

Zhang Yunfang, Li Jun, Jin Yong et al

(Institute of Clinical Pharmacology,Anhui Medical University, Hefei230032)

AbstractObjectiveTo study the effect of Qijiaheji on immune function in mice with Lewis lung carcinoma. MethodsThe content of IgG in serum, IgM produced by spleen cells, the production of TNF in peritoneal macrophage and the number of blood cells in peripheral blood were determined. ResultsQijiaheji (13.75～27.5 g·kg^-1 ig×7 days or 15 days) could enhance markedly not only the content of IgG in serum and IgM produced by spleen cells, but also TNF level produced by peritoneal macrophage in mice with lung carcinoma. Qijiaheji could also restore the number of RBC，Hb，WBC，BPC etc in mice with lung carcinoma. ConclusionInhibition of Qijiaheji on Lewis lung carcinoma in mice may be related to the improvement of the immune function.

MeSHlung neophasms/immunol; astragalus membranceus/pharmacol; mouse芪加合剂为中药复方制剂，能提高荷瘤小鼠细胞免疫功能^〔1〕。为进一步研究芪加合剂的作用机制，本实验研究芪加合剂对Lewis肺癌小鼠体液免疫功能及肿瘤坏死因子(TNF)的影响。1材料与方法

1.1药品与试剂芪加合剂，同济医科大学附属同济医院药剂科提供，批号：930426，含量2 200 g·L^-1；临用前用生理盐水稀释，供体内给药。环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)，批号：930505，上海第十二制药厂产品。参芪片，批号：940302，吉林市制药厂产品。重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-α)，4×10¹⁰ U·g^-1 Pro，BASF/Knoll公司产品。噻唑蓝〔3-(4,5-dimethy-2-thiazolyl)-2, 5-diphonyl-tetrazolium-bromid,MTT〕,Fluka AG公司产品。小鼠IgG标准品以及兔抗小鼠IgG血清，购于安徽医学研究所病毒室。

1.2动物与瘤细胞C₅₇BL/6J小鼠，♀♂兼用，6～8周龄，体重18 g±3 g，由安徽医科大学实验动物中心提供(皖科实动准字001号)。Lewis肺癌瘤株，从上海药物所引进。本实验用同系C₅₇BL/6J小鼠皮下接种传代；L929细胞株(小鼠纤维瘤细胞)购于山东医科院免疫室，在含有10%小牛血清的RPMI 1640小牛血清中传代培养。

1.3仪器GXM-201型酶标光度计，四川分析仪器厂生产。

1.4荷瘤小鼠模型的制备^〔2〕无菌取出Lewis肺癌瘤块，用2.5 mg·L^-1胰蛋白酶0.4 mg·L^-1 EDTA消化30 min，经200目尼龙网磨碎过滤，离心(1 500 r·min^-1,5 min)，洗涤2次，活细胞计数并配成浓度1×10¹⁰个·L^-1，每鼠右足跖皮下注射0.1 ml，48 h后ig给予受试药物或等量溶媒，并观察药物对荷瘤小鼠治疗作用及免疫功能的影响。

1.5脾细胞IgM抗体的诱生与检测参照文献^〔3〕，每鼠ip 10%绵羊红细胞悬液0.2 ml(含4×10⁸个细胞)，在致敏后第5天，杀死小鼠制备脾细胞悬液(1×10¹⁰ ml·L^-1)，每管加入脾细胞悬液，0.2%绵羊红细胞和1∶10稀释的豚鼠血清各0.5 ml，混匀。置37℃水浴中温育1 h，离心(3 000 r·min^-1，5 min)，取上清液用721分光光度计(λ=413 nm)检测脾细胞的IgM生成量，结果以A值表示。

1.6血清中IgG含量的测定参照文献^〔4〕，采用单向免疫扩散法。

1.7TNF诱生与检测^〔5，6〕诱生TNF的方法基本同IL-1，见文献^〔1〕，但培养时间为6 h。将rhTNF标准品和待测上清均稀释成不同倍数(1∶4～1∶1 024)，用MTT法和酶标光度计(λ=570 nm)测定TNF对L929细胞的杀伤效应，并计算杀伤百分率［1-(实验孔A值/对照孔A值)×100%］。分别求出对L929细胞50%最大杀伤率时的标准品及待测上清相应的稀释倍数，两者倒数之比，乘以标准品的活性单位，即为待测上清的TNF活性单位。

1.8血常规检测方法小鼠从眼眶放血，用肝素抗凝管收集，参照文献^〔7〕，分别检测红细胞(RBC)数，血红蛋白(Hb)量，白细胞(WBC)数，血小板(BPC)数。

1.9数据处理各组实验数据以±s表示，计量资料组间比较采用t检验。

2实验结果

2.1芪加合剂对荷瘤小鼠体液免疫的影响表1结果表明，荷瘤小鼠脾细胞产生IgM明显低于正常对照组，芪加合剂(13.75～27.5 g·kg^-1)治疗可使其低下的IgM生成恢复至接近正常水平，且疗效与参芪片相当。表2结果表明，芪加合剂治疗7天，各组小鼠血清中IgG含量无明显差异；芪加合剂治疗15天后，可使荷瘤小鼠血清中低下的IgG含量恢复至接近正常水平，而Cy组对荷瘤小鼠低下的IgG、IgM均无明显作用。

表1芪加合剂对荷瘤小鼠脾细胞产生IgM的影响(±s,n=10)

组别 剂量

/g·kg^-1.d^-1

A值 给药7天 给药15天 正常对照 0.58±0.07 0.60±0.09 肿瘤对照 0.37±0.04^** 0.33±0.04^** 芪加合剂

6.88 0.40±0.05^** 0.36±0.03^** 13.75 0.45±0.05^**## 0.49±0.06^**## 27.50 0.54±0.06^## 0.56±0.08^## 参芪片 0.55 0.63±0.09^## 0.62±0.08^## Cy 0.02 0.35±0.02^** 0.29±0.02^**#

与正常对照组相比：^**P＜0.01；与肿瘤对照组相比：^#P＜0.05,^##P＜0.01

表2芪加合剂对荷瘤小鼠血清中IgG生成的影响(±s，n=10)

组别 剂量

/g·kg^-1.d^-1

IgG/g·L^-1 给药7天 给药15天 正常对照

11.7±1.3

11.8±0.8 肿瘤对照 10.6±1.4 9.3±1.2^** 芪加合剂 6.88 10.8±1.1 10.0±1.2^** 13.75 11.3±1.3 11.2±1.4^## 27.50 11.8±2.1 11.9±1.0^## Cy 0.02 10.3±1.2 8.9±1.3^**

与正常对照组相比：^**P＜0.01；与肿瘤对照组相比：^##P＜0.012.2芪加合剂对荷瘤小鼠产生TNF的影响表3结果表明，肿瘤对照小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF高于正常对照组。芪加合剂(13.75～27.5 g·kg^-1)治疗7天与15天均可明显提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞生成TNF，Cy组对荷瘤小鼠的TNF产生无明显影响。

表3芪加合剂对荷瘤小鼠巨噬细胞产生TNF的影响(±s,