摘要目的探讨HLA-DQA1*0103、-DQA1*0201、-DQB1*0201、-DQB1*0303四种等位基因与皖籍汉族银屑病患者的相关性。方法利用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）法，对84名银屑病患者及40名健康对照进行PCR反应，记录以上四种等位基因在他们中的分布情况。结果①HLA-DQA1*0201与皖籍汉族银屑病患者具有明显的相关性（Pc=0.0000191，OR=8.47）；②HLA-DQA1*0103在无家族史患者中出现的频率较高（P=0.019）。结论①HLA-DQA1*0201可能是银屑病的易感基因或与易感基因相连锁；②有家族史与无家族史患者在其遗传基础上可能存在差异。

自由词HLA-DQA1；HLA-DQB1；聚合酶链反应-序列特异性引物

中图分类号R758.63

文献标识码A文章编号1000-1492(2000)01-0024-03

Study on the association of HLA-DQA1，-DQB1 alleles

and psoriasis in Anhui Hans

Liu Taofeng， Zhang Xuejun，Yang Sen et al

(Dept of Dermatology, First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei230022)

AbstractObjectiveTo explore the association between the four alleles HLA- DQA1*0103，-DQA1*0201，-DQB1*0201，-DQB1*0303 and psoriasis in Anhui Hans.MethodsPolymerase chain reaction-sequence specific primer(PCR-SSP) method was used to analyze the distribution of subtype HLA-DQA1*0103, -DQA1*0201, -DQB1*0201, -DQB1*0303 among 84 patients with psoriasis and 40 healthy persons.Results① HLA-DQA1*0201 was markedly correlated with psoriasis（Pc=0.0000191, OR=8.47）; ②HLA-DQA1*0103 had a higher frequency in patients with negative family history.Conclusion①HLA-DQA1*0201 may be the susceptible gene or it may have close linkage with the susceptible gene; ②There may be a difference in the genetic background between patients with positive and negative family history.

MeSHpsoriasis/genetic

Free wordsHLA-DQA1； HLA-DQB1； Polymerase chain reaction-sequence specific primer

银屑病(psoriasis，PS)是一种常见的慢性过度增生性炎症性疾病。其遗传特性以及流行病学资料使人们设计研究方案来确定MHC的HLA位点是否与银屑病的遗传有关^〔1〕。目前，国内外学者均在分子水平上对HLA基因型与银屑病的关系进行了研究。1993年，Schmitt^〔2〕等首次在DNA水平上检测到HLA-DQA1*0201、-DQB1*0303与Ⅰ型银屑病有关，Ikaheimo^〔3〕随后也发现HLA-DQA1*0201与银屑病有关，而国内尚无此方面报道。本研究选取了HLA-DQA1*0201、-DQB1*0303两个亚型，同时任选了HLA-DQA1*0103、-DQB1*0201两个亚型，用PCR-SSP法^〔4〕对以上四个亚型进行了研究，以了解它们与皖籍汉人银屑病的相关性，现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1血标本收集与处理本次实验共收集银屑病患者血标本84份，病源为我科门诊确诊的银屑病患者，均为皖籍汉族人，无血缘关系，其中男51例，女33例，年龄分布在8～69岁。每个病人共收集10 ml全血，放入含枸橼酸钠的试管内，2000 r·min^-1离心10 min，取出其中的白细胞，置于2 ml离心管内，放入-80℃冰箱保存。对照：共40例，为我院外科住院病人的健康家属（无任何皮肤病），与病例无任何亲缘关系，对照间亦无亲缘关系，其中男24例，女16例，年龄分布在11～70岁。以同法收集抗凝血10 ml，提出白细胞，放入-80℃冰箱保存备用。

1.2基因组DNA的制备以改良的盐析法从分离的白细胞中提取基因组DNA^〔5〕。

1.3DNA原液浓度的测定及模板DNA的配制用紫外可见分光光度计测出DNA原液浓度。根据DNA原液浓度配置成体积为100 μl，浓度为50 mg·L^-1的模板DNA，置于-80℃冰柜保存。124份模板DNA经CDK4检测后，均为阳性，表明所使用的模板均满足PCR反应的需要。

1.4四种等位基因的引物序列HLA-DQA1·0103，5′-引物：5′ACG GTC CCT CTG GCC GTT3′，3′-引物：5′ATG ATG TTC AAG TTG TGT TTT GC3′；HLA-DQA1*0201，5′-引物：5′ACG GTC CCT CTG GCC GTT3′，3′-引物：5′CAG GAT GTT CAA GTT ATG TTT TAG3′；HLA-DQB1*0201，5′-引物：5′GTG CGT CTT GTG AGC AGA AG3′，3′-引物：5′GCA AGG TCG TGC GGA GCT3′；HLA-DQB1*0303，5′-引物：5′GACGGAGCGCGTGCGTTA3′，3′-引物：5′CTGTTCCAGTACTCG-GCGT3′。以上引物由上海生物工程公司合成。

1.5PCR反应参考文献^〔4〕行PCR反应，记录下反应结果

1.6统计学分析方法分别统计出病例组与对照组中所测4种等位基因阳性的例数，以比值比（OR）表示具有某种基因的人群患病率为无该种基因人群患病率的倍数：

同时采用χ²检验，求得P值。

表1皖籍汉族银屑病患者与健康对照4种HLA-DQ等位基因分布频率比较

HLA-DQ

allele 病例组（84例） 对照组（40例） χ² OR P 阳性例数 分布频率 阳性例数 分布频率 DQA1*0103 27 0.321 10 0.250 0.36 1.42

0.55 DQA1*0201 46 0.548 5 0.125 18.28 8.47 ＜0.01 DQB1*0201 5 0.060 0 0.000 1.18 0.28 DQB1*0303 2 0.024 1 0.025 0.34 0.95 0.56

表2Ⅰ、Ⅱ型银屑病患者间HLA-DQA1*0201分布频率的比较

型别 HLA-DQA1*0201 χ² P

阳性 阴性 Ⅰ型 40 30 Ⅱ型 6 8 0.961 0.327

2结果

2.1四种HLA-DQ等位基因PCR结果见图1。

图1四种HLA-DQ等位基因PCR结果

1为HLA-DQB1*0201阳性条带，2为HLA-DQB1*0201阴性条带，3为HLA-DQB1*0303阳性条带，4为HLA-DQB1*0303阴性条带，5为HLA-DQA1*0103阳性条带，6为HLA-DQA1*0103阴性条带，7为HLA-DQA1*0201阳性条带，8为HLA-DQA1*0201阴性条带，M为100bp DNA Ladder

2.24种HLA-DQ等位基因与皖籍汉族银屑病患者的相关性结果见表1。从表1可以看出，HLA-DQA1*0201与皖籍汉族银屑病患者具有显著的相关性。

2.3Ⅰ、Ⅱ型银屑病患者间HLA-DQA1*0201分布频率的比较根据Henseler^〔6〕的分类，把银屑病分为Ⅰ型和Ⅱ型，结果见表2。从表2可以看出，Ⅰ、Ⅱ型银屑病患者间HLA-DQA1*0201的分布差异无显著性。

2.44种HLA-DQ等位基因在有家族史与无家族史患者中的分布结果见表3。从表3可以看出，HLA-DQA1*0103在无家族史患者中出现的频率显著高于有家族史患者，其它三种等位基因在两组病例中差异无显著性。

3讨论

目前，中外不少学者都用分子生物学的方法研究了HLA与银屑病的相关性。刘述文等^〔7〕用PCR/SSO法对30例银屑病患者进行了HLA-DR基因分型，并与255例北方汉族正常人HLA-DR基因频率进行了比较，发现HLA-DR7基因频率在银屑病患者较正常对照组明显增高（Pc＜0.05, RR=2.446），而HLA-DR9基因频率较正常对照组低（Pc＜0.05, RR=0.218）。最近，翟宁等^〔8〕用PCR-SSP法对寻常型银屑病患者HLA-DQB1等位基因多态性进行了分析，结果提示寻常型银屑病与HLA-DQB1*0602等位基因相关。

1993年，Schmitt等^〔2〕首次在DNA水平上检测到HLAⅡ类等位基因与Ⅰ型银屑病有明显的联系。他们用序列特异的寡核苷酸探针对47名Ⅰ型（40岁前发病，有阳性家族史）及17名Ⅱ型（40岁后发病，无家族史）银屑病患者进行了基因分型，发现HLA-DQA1*0201、