摘要目的研究几种不同提取途径的茶叶多糖(TPS)对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫指标的影响。方法采用AA大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外培养技术研究几种TPS对其功能的影响。结果几种茶叶多糖提高AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2趋势，其中P2途径提取的TPS对脾淋巴细胞增殖反应和IL-2具有明显的促进作用(P＜0.05)；对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1，几种不同途径提取的TPS均有降低趋势，以P₂茶叶多糖的作用最显著(P＜0.05)。结论P₂TPS对AA大鼠免疫指标具有明显的调节作用。

中图分类号R282.71；R684.3；R332

文献标识码A文章编号1000-1492(2000)01-0027-03

Effects of TPS on immune index of rats with adjuvant arthritis

Zhang Yunfang, Jin Yong, Li Jun et al

(Institute of Pharmacology,Anhui Medical University,Hefei230032)

AbstractObjectiveTo study the effect of TPS (Tea poly-saccharides) extracted by different methods on immune function of rats with AA.MethodsUsing cultured spleen lymphocyte and peritoneal macrophage (PMΦ) in vitro for studing the effect of TPS on its action.ResultsAll of the TPS trended to increase the lower level of speen lymphocyte proliferative reaction and IL-2 in rats with AA. P₂ of the TPS could enhance markedly (P＜0.05). All of the TPS could decrease the higher level of IL-1 produced by PMΦ in rats with AA and P₂ of the TPS could also decrease markedly (P＜0.05).ConculsionP₂ may have markedly immunoregulatory effects on immune index of rats with AA.

MeSHarthritis, adjuvant; folium camelliae/chemistry; polysaccharides/pharmacology

茶叶为山茶科植物，其药用价值历史悠久。随着对茶叶成分、药理作用的深入研究，发现茶叶的医疗作用范围广泛。茶叶能提高人体免疫机能，这作用可能与茶叶多糖免疫调节有关^〔1～3〕。为了解茶叶多糖(Tea Polysaccharides, TPS)的免疫调节作用。本文观察了不同提取途径的TPS对佐剂性关节炎大鼠免疫指标的影响。

1材料和方法

1.1材料SD大鼠，体重200 g±20 g本校实验动物中心提供(皖医动准字002)；ConA、LPS，美国Sigma公司产品；P₁、P₂、P₃、P₄、P₅水提醇沉，采用不同方法精制的多糖，分子量约7000，由安徽农业大学茶叶系提供；FJ-2107型液体闪烁仪，西安262厂生产。

1.2方法

1.2.1CFA的制备参照文献^〔1〕将同一批号的BCG80℃ 1 h灭活，以高压灭菌的液体石蜡配成10 g·L^-1的乳剂，置4℃冰箱备用。

1.2.2大鼠AA的制备选取大鼠，体重180 g±20 g，于每鼠左足跖皮内注射0.1 ml致炎。

1.2.3ConA诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖反应^〔4〕用RPMI-1640培养液常规制备大鼠细胞悬液(10^10.L^-1)，在96孔培养板上，每孔加入100 μl脾淋巴细胞悬液(终浓度5×10^9.L^-1)、50 μl 5种TPS(P₁、P₂、P₃、P₄、P₅)(终浓度100 μmol·L^-1)、50 μl ConA(3 mg·L^-1)，终容积为200 μl，各设3个复孔，置37℃，5% CO₂培养箱中培养48 h，终止培养前6 h，每孔加入20 μl³H-TdR(7.4×10³ Bq·孔^-1)，用多头细胞收集器收集细胞于69型纤维滤纸上，用液闪仪测定cpm值，以3个复孔的均值表示结果。

1.2.4IL-2的产生与检测^〔5〕以RPMI-1640培养液常规制备大鼠脾细胞悬液(10^10.L^-1)，在24孔培养板上，每孔加入0.5 ml上述脾细胞悬液(终浓度为5×10^9.L^-1)，0.25 ml ConA(终浓度为3 mg·L^-1)和0.25 ml几种不同的TPS(终浓度100 μmol·L^-1)置37℃、5% CO₂培养箱中培养24 h后，离心(2000 r·min^-1，10 min)收集上清，即为IL-2活性的上清液，-20℃保存待测。参照文献^〔4〕制备ConA活化的小鼠脾细胞，用以测定IL-2活性。在96孔培养板上，每孔加入不同稀释度的IL-2待测上清，每一稀释度设3个复孔，然后加入100 μl活化的小鼠脾细胞悬液。置37℃，5% CO₂培养箱培养24 h，终止培养前6 h加入20 μl³H-TdR，培养结束后，用多头细胞收集器收集细胞69型纤维滤纸上，用液闪仪测定放射性，结果以3个复孔的cpm均值表示。

1.2.5IL-1的产生与检测^〔6〕以RPMI-1640培养液常规制备大鼠腹腔巨噬细胞悬液(2×10^9.L^-1)，加入24孔培养板，每孔1 ml，置37℃，5% CO₂培养箱中培育2 h，弃去培养液，并以5% NBS-Duleccos洗3遍，除去非粘附细胞，获单层MΦ，然后每孔加入LPS 0.5 ml(终浓度6 mg·L^-1)和0.5 ml几种不同TPS(终浓度100 μmol·L^-1)，置37℃，5% CO₂培养箱中培养48 h，收集上清即含IL-1活性的上清液，-20℃保存待测。参照文献^〔5〕，用小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1，用正常C₅₇ BL/6J小鼠，无菌取胸腺制成不同浓度。于96孔培养板上，每孔加入不同稀释度的上清100 μl，每一稀释度设3个复孔，加入50 μl胸腺细胞悬液和50 μl ConA(终浓度为3 mg·L^-1)，置37℃，5% CO₂培养箱中培养48 h，终止培养前6 h，每孔加入20 μl ³H-TdR，培养结束后收集细胞用液闪仪测定放射性，以3个复孔的cpm均值表示结果。

2结果

2.1TPS对ConA诱导的AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响表1所示，AA大鼠脾细胞增殖反应明显降低，而体外给予几种TPS(100 mg·L^-1)对AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应均有不同程度的恢复作用，其中P₂TPS能显著提高AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应(P＜0.05)。

表1TPS对ConA诱导的大鼠脾淋巴细胞

增殖反应的影响(±s, n=8)

组别ConA 剂量

(μmol·L^-1) 诱导的增殖反应

(cpm×10^-4) 正常

- 2.06±0.41^## AA - 0.91±0.32 AA+P₁ 100 1.08±0.41 AA+P₂ ¹⁰⁰ 1.35±0.39^# AA+P₃ 100 1.15±0.43 AA+P₄ 100 1.01±0.38 AA+P₅ 100 0.95±0.34 AA+地塞米松 100 0.80±0.21

与AA组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.012.2TPS对AA大鼠IL-2的影响表2所示，AA大鼠脾细胞产生的IL-2明显降低，而几种TPS(100 mg·L^-1)对AA大鼠脾淋巴细胞产生过低的IL-2均有恢复趋势，其中P₂TPS能显著提高AA大鼠过低的IL-2水平(P＜0.05)。

表2TPS对AA大鼠IL-2产生的影响(±s, n=8)

组别 剂量(μl·L^-1) IL-2含量

(cpm×10^-3) 正常 -

7.0±1.2 AA - 3.5±1.0^## AA+P₁ 100 4.0±1.4 AA+P₂ 100 4.9±1.4^· AA+P₃ 100 3.9±1.2 AA+P₄ 100 3.6±1.0 AA+P₅ 100 3.7±1.1 AA+地塞米松 100 3.1±1.3

与AA组比较，^·P＜0.05;与正常组比较，^##P＜0.012.3TPS对AA大鼠IL-1产生的影响表3所示，AA大鼠腹腔巨噬细胞产生的IL-1明显增高，而几种TPS(100 mg·L^-1)对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1有抑制趋势