摘要目的研究芸香苷（Ru）的胃粘膜保护作用与抗氧化作用的关系。方法利用大鼠冷冻—束缚应激模型，测定胃粘膜中黄嘌呤氧化酶（XO）活性、还原型谷胱甘肽（GSH）含量，并观察了Ru与抗氧化剂（超氧化物歧化酶，别嘌呤醇、二甲基亚砜）联合用药对胃粘膜损伤的影响。结果Ru(5、20 mg·kg^-1，每天2次，共5天,ig)在减轻大鼠冷冻—束缚应激引起的胃粘膜损伤的同时，抑制胃粘膜XO活性，提高胃粘膜GSH含量，Ru还可提高抗氧化剂的胃粘膜保护作用。结论Ru可以明显减轻大鼠应激性胃粘膜损伤，抗氧化作用是它的可能机制。

自由词芸香冷冻—束缚应激

中国图书资料分类法分类号R971.91

Relationship between protective effects of rutoside on

gastric mucosa and antioxidative effects

Wang Yuling, Zhao Weizhong, Song Biwei et al

(Dept of Pharmacology, Anhui Melical University, Hefei230032)

AbstractObjectiveTo study the relationship between protective effects of rutoside(Ru) on gastric mucosa and antioxdative effects.MethodsThe rat model of restrain-cold stress (RCS) was used to examine xanthine oxidase (XO) activity， the contents of GSH in gastric mucosa and changes of gastric mucosal injury after the synergism between Ru and antioxygen were observed.ResultsRu (5, 20 mg*kg^-1,bid,ig) markedly inhibited the gastric mucosal injury induced by RCS, enhanced the contents of GSH, and inhibited XO activity.Ru could also enhance the gastric mucosal protective effects of antioxygen.ConclusionRu had protective effect on gastric mucosa of rats, the protective effects might be partially related to its antioxidative effects.

MeSHxanthine oxidase; glutathine; gastric mucosa/pathol; antioxidants

Free wordsrutoside; restrain-cold stress

芸香苷（Rutoside, Ru）属黄酮类化合物。有资料^〔1〕表明，Ru在保护红细胞的自氧化溶血损伤方面反映出Ru可能具有抗脂质过氧化作用，药理学研究已证实其具有胃粘膜保护作用^〔2〕。近年来的研究表明，许多类型的胃十二指肠溃疡与活性氧有着密切的关系，特别在急性胃粘膜损伤中，氧自由基可能是一个主要的起始因子和独立的致病因素^〔3，4〕。我们在证实了Ru的胃粘膜保护作用的基础上，进一步探讨了Ru的胃粘膜保护作用与抗氧化作用之间的关系。

1材料

1.1实验动物健康Wistar大鼠，(200±30) g，♂，由安徽医科大学动物中心（皖医实动准字第01号）提供。

1.2药品试剂芸香苷：蚌埠制药厂产品。次黄嘌呤（HX）：衢州化学工业公司试剂厂，批号930518。5，5′-二硫化对硝基苯酚（DTNB）：Fluka产品（美国）。吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）：Fluka产品（美国）。超氧化物歧化酶（SOD）：中国医药公司上海分公司，批号950113。二甲基亚砜：洪声化工厂出品。西咪替丁：上海第一制药厂，批号950807。别嘌呤醇：上海衡山药业有限公司，批号950611。其它试剂均为国产AR级试剂。

2方法

2.1冷冻—束缚应激（RCS）模型制备及胃粘膜损伤指数的评分大鼠饲以实验室平衡饲料，实验前禁食24 h，自由饮水，实验时在乙醚浅麻醉下将大鼠缚于铁栅上，待动物清醒后放入4℃冰箱应激，3 h后从冰箱取出，颈椎脱臼处死。剖腹，取胃，按文献记录病灶长度并打分^〔5〕。

2.2大鼠胃粘膜XO活性测定取腺胃粘膜100 mg在Tris缓冲液中配成10％匀浆，离心12 000 r·min^-1（低温高速离心机），20 min，取含嘌呤氧化酶提取物的上清液。按吴晓生等^〔6〕的NBT比色法测定胃粘膜XO活性，以37℃条件下，以每分钟使1 μmol NBT还原成甲月赞的酶量作为1个活性单位（U），结果以U·g^-1(组织湿重)表示。

2.3大鼠胃粘膜GSH含量测定取胃粘膜置于0℃ NS中漂洗，用滤纸吸干表面水分，按组织∶0.3 mol·L^-1三氯醋酸（0℃）为1∶10制备匀浆，离心15 min（3 000 r·min^-1），重复1次，取上清液按DTNB法测定，GSH含量按以μg·g^-1(组织)表示^〔7〕。

2.4病理组织学观察

2.5实验分组和给药方式将大鼠随机分组，设正常对照组、应激对照组、若干给药组（应激对照组给予NS灌胃）。灌胃连续5天，每天2次，末次灌胃后1 h制备应激模型。

2.6统计学处理所有数据均用±s表示，用t检验进行统计学处理。

3结果

3.1Ru对大鼠胃粘膜损伤的影响表1结果表明，Ru可以明显减轻大鼠冷冻—束缚应激引起的胃粘膜损伤（P＜0.01）。

3.2Ru对大鼠应激后胃粘膜XO活性和GSH含量的影响表2结果表明，大鼠应激后胃粘膜XO活性升高，GSH含量降低，而Ru可以抑制胃粘膜XO活性的升高，提高降低的GSH含量。

表1Ru对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响（±s, n=8）

组别 剂量（mg·kg^-1） 胃粘膜损伤指数 损伤抑制率(%) NS -

60.75±6.43 - Ru 5 44.38±5.85^△△ 26.95 20 34.50±4.99^△△ 43.21 Cimetidine 140 33.00±2.84^△△ 45.66

与NS组比较：^△△P＜0.01

表2Ru对大鼠应激后胃粘膜XO活性和GSH含量的影响（±s, n=8）

组别 剂量（mg·kg^-1） XO活性（U·g^-1） GSH含量（μg·g^-1） 正常 - 0.307±0.014 2 204±121.9 NS+RCS - 0.402±0.019^△△ 1 257±100.1^△△ Ru+RCS 5 0.354±0.024** 1 537±121.6** 20 0.363±0.014** 1 559±115.0**

与正常组比较：^△△P＜0.01；与NS+RCS组比较，**P＜0.013.3Ru与抗氧化剂合用对胃粘膜损伤的影响表3结果表明，SOD（用双蒸水溶解）连续灌胃5天后，可以减轻大鼠应激后的胃粘膜损伤，而Ru（5、20 mg·kg^-1）与之合用，可以增强SOD的胃粘膜保护作用。

表4结果表明，Ru(5、20 mg·kg^-1)与别嘌呤醇（用双蒸水溶解）合用后，可提高别嘌呤醇的胃粘膜保护作用。

表5显示Ru(5、20 mg·kg^-1)与二甲基亚砜（DMSO）合用后，可提高DMSO的胃粘膜保护作用。

3.4Ru对大鼠胃粘膜的保护作用（病理组织学观察）

3.4.1应激组镜下均见胃粘膜层明显充血、出血，出血区多集中于表浅部，部分区域深达粘膜肌层，并见较多的急慢性炎细胞浸润。出血区粘膜表浅部脱落，形成多个深浅大小不一的糜烂面；粘膜下层充血水肿，有散在个别炎细胞浸润，肌层及浆膜层未见明显改变。

3.4.2用药组（Ru 5、20 mg·kg^-1）粘膜层出血明显减轻，粘膜层糜烂面逐渐减少，大剂量组的粘膜糜烂面基本消失；炎症反应也随着剂量加大而减少。粘膜下层尚可见轻度局灶性充血水肿及个别炎细胞反应，均属正常现象，肌层及浆膜层未见改变。

病理组织学结果反映Ru对大鼠胃粘膜损伤具有明显的保护作用。

4讨论

本研究应用大鼠冷冻—束缚应激模型，就Ru的胃粘膜保护作用与抗氧化之间的关系做了进一步探讨。近年来的研究显示氧自由基与应激性胃粘膜损伤的发生有着密切关系，而在体内多种生成自由基的方式中，又以黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶（XO）途径在应激性胃粘膜损伤中最为重要。酶组织化学研究显示，XO是应激过程中氧自由基产生的重要源泉^〔8〕；此外，在胃粘膜上皮细胞也存在自身抗氧化系统，包括GSH、SOD、GSH