中国图书资料分类法分类号R734.2

摘要目的探讨肺腺癌组织p16蛋白表达与其预后关系。方法采用免疫组织化学S-P方法观察42例肺腺癌组织p16蛋白的表达情况。结果①肺腺癌组织中p16蛋白表达的阳性率为76.2%，与分化程度和临床分期有关，并随着分化程度的降低而下降，高分化和低分化腺癌之间p16蛋白表达阳性率的差异有显著性(P＜0.01)，并且临床分期越高，p16蛋白表达阳性率就越低，Ⅰ期、Ⅱ期肺腺癌p16蛋白表达与Ⅲ_a期、Ⅲ_b期比较差异有显著性(P＜0.05)。②肺腺癌组织p16蛋白表达阳性和阴性两组术后3年生存率两组差异有显著性(P＜0.05)。结论p16蛋白表达缺失与肺癌发生发展有关，并与预后有相关(P＜0.05)，检测肺癌组织有无p16蛋白表达可作为判断临床预后的指标。

Relationship between

expression of p16 protein and prognosis of lung adenocarcinoma

Lu Youjin, Tang Yizhen, Liu Lihua et al

(Respiratory Dept, The First Affilliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei230022)

AbstractObjectiveTo examine the expression of p16 protein in lung adenocarcinoma and to approach the relationship of prognosis of lung adenocarcinoma between the p16 protein positive and the negative.MethodsUsing a rabbit polyclonal antihuman p16, the expression by p16 protein was studied immunohistochemically by formalin-fixed paraffin-embeded sections.ResultsThe expressions of p16 protein in lung adnenocarcinoam tissues were 76.2% and correlated with tumor differentiation and different clinical stage and lower in poorly-differentiated adenocarcinomas compared with those in well-differentiated adenocarcinomas (P＜0.05) and the expressions of p16 protein in stage Ⅰ and stage Ⅱ were higher than those in stage Ⅲ_a and stage Ⅲ_b(P＜0.05);If compared the positive expression of p16 protein with the negative expression,three-year survival rates of postoperation was significantly different (P＜0.05). ConclusionLoss of expression of p16 protein is correlated with the carcinoma genesis and prognosis(P＜0.05). To examine the expression of p16 protein in lung adenocarcinoma may be considered as an index to predict prognosis

MeSHlung neoplasms/genet; adenocarcinoma; genes, tumor, suppressor; immunohistochemistry

p16基因是一种肿瘤抑制因子又称多肿瘤抑制因子₁(MTS₁，Multiple tumor suppressor)或CDKN₂基因，定位于人染色体9p²¹区域，编码16 000D的蛋白产物，是在细胞周期中起重要作用的CDK₄(cyclin-dependent kinase 4)抑制物，它的缺失可增加CDK₄的活性，导致Rb蛋白磷酸化，促进细胞从G₁期向S期转变和细胞增殖，与非小细胞肺癌(NSCIC)及其它肿瘤发生、发展有密切相关。因此，该基因一经发现即引起人们的极大关注，并发现在人体多种肿瘤细胞系中存在该基因的缺失和突变^〔1〕。我们应用免疫组织化学(简称免疫组化)方法观察肺腺癌组织p16蛋白表达情况，着重探讨与其预后的关系。

1材料与方法

1.1标本42例肺腺癌标本来自我科及胸外科1985～1995年间有完整随访资料的手术切除标本，取材后用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 μm厚切片。每例肺癌组织切片均作HE染色。按国内肺腺癌组织学分级标准，将42例腺癌分为低分化腺癌12例，中分化腺癌14例，高分化腺癌16例，其中男性18例，女性24例，年龄46～73岁，平均(59±13)岁。按国际抗癌联盟1985年所订的分期法，Ⅰ期8例，Ⅱ期19例，Ⅲ_a期11例，Ⅲ_b期4例。42例均已死亡，并有完整随访资料。

1.2免疫组化染色采用S-P法。S-P试剂盒和兔抗p16多克隆抗体分别为福州迈新生物技术开发公司和Maxim Biotech,Inc产品，染色具体步骤如下：(1)石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS (pH 7.42)冲洗3次，每次3～5 min。(2)每张切片加1滴或50 μl过氧化酶阻断溶液(试剂A)，以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10 min。(3)PBS(pH 7.4)冲洗(3×5 min，下同)。(4)每张切片加1滴或50 μl的非免疫性动物血清(试剂B)，室温下孵育10 min，为减少非特异性背景，不必冲洗，只需吸去多余的液体。(5)每张切片加1滴或50 μl的第一抗体，室温下孵育60 min或4℃过夜。(6)PBS冲洗3×5 min。(7)每张切片加1滴或50 μl生物素标记的第二抗体(试剂C)，室温下孵育10 min。(8)PBS冲洗3×5 min。(9)每张切片加1滴或50 μl链亲和素—过氧化物酶溶液(试剂D)，室温下孵育10 min。(10)PBS冲洗3×5 min。(11)每张切片加2滴或100 μl新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3～10 min。(12)自来水冲洗，苏木精复染，中性树胶封固。

1.3结果判断以细胞呈清晰棕色为阳性，按阳性细胞范围分为：+，细胞数＜25%；┼┼，细胞数占25%～50%；┼┼┼，细胞数＞50%。

1.4结果统计用卡方检验。

2结果

2.1肺腺癌组织p16蛋白的表达

2.1.1p16蛋白在肺腺癌组织中表达的阳性率为76.2%。见表1。

表1肺腺癌组织p16蛋白的表达

组织学类型 n - + ┼┼ ┼┼┼ 阳性率(%) 腺癌 42 10 7 16 8 76.2

2.1.2肺腺癌p16蛋白表达的阳性率随着分化程度的降低而下降。见表2。

表2p16蛋白表达与肺腺癌分化程度的关系

分化程度 n 阳性例数

阳性率(%) 高分化腺癌 16 15

93.7^* 中分化腺癌 14 11 78.5 低分化腺癌 12 6 50.0

^*与低分化腺癌比较：^**P＜0.012.1.3在肺腺癌中p16蛋白表达因不同的病期而不同，肺腺癌分期越高，p16蛋白表达缺乏频率也越高。见表3。

表3p16蛋白表达与肺腺癌临床分期的关系

分期 n 阳性例数

阳性率(%) Ⅰ期 8 7

87.5 Ⅱ期 19 17 89.5^△ Ⅲ_a期 11 6 54.5 Ⅲ_b期 4 2 50.0

与Ⅲ_b期肺癌比较：^△P＜0.052.2肺腺癌组织p16蛋白表达与其预后关系肺腺癌组织p16蛋白表达阳性和阴性两组，术后3年生存率有显著差异(P＜0.05)，术后1年和5年生存率无显著性差异(P＞0.05)。见表4。

表4肺腺癌组织p16蛋白表达与其术后生存率的关系

组别 随访例数 ≥1年 ≥3年 ≥5年 p16蛋白表达(+) 32 26(81.2%) 18(56.2%)^* 6(18.7%) p16蛋白表达(-) 10 8(80.0%) 2(20.0%) 0(0%)

两组比较：^*P＜0.053讨论

我们应用免疫组化S-P方法研究42例人原发性肺腺癌p16蛋白的表达，结果发现：肺腺癌组织有p16蛋白表达，p16蛋白主要位于细胞浆，亦见细胞核和细胞膜阳性呈弥漫性或局灶性分布(见图1、2)。在肺腺癌组织中p16蛋白表达的阳性率为76.2%，表明在肺腺癌组织中存在明显的p16蛋白表达缺失，这与国内姜彦多等^〔2〕报道一致。

我们在研究中发现p16蛋白在肺腺癌中有较高的表达，阳性率为76.2%；p16蛋白的阳性率随着肺腺癌的分化程度的降低而下降，且差异有显著性(P＜0.01)，表明p16基因失活不仅与肺癌的发生有关，也与肺癌的分化不良有关，国内姜彦多等^〔2〕报道p16蛋白在肺腺癌中表达的阳性率为87%，高于鳞癌和小细胞肺癌(P＜0.01)，且鳞癌和腺癌p16蛋白的阳性率随着分化程度的降低而下降，高分化与低分化癌之间p16蛋白阳性率的差别有显著性(P＜0.05)，与我们的报道一致。