摘要：目的研究rhIL-10对小鼠免疫功能的影响。方法用MTT还原法检测ConA诱导的T淋巴细胞增殖试验，中性红染色法检测NK细胞活性。结果rhIL-10能抑制小鼠T淋巴细胞及NK细胞活性(P＜0.01)，这种抑制作用随剂量增加而加强。结论rhIL-10能抑制小鼠T淋巴细胞及NK细胞活性，并呈剂量依赖关系。

中国图书资料分类法分类号：R392.12；R331.14%

Effects of recombinant human interleukin-10 on activity

of T lymphocytes and NK cells

Chen Feihu, Lu Jingtao, Chen Minzhu et al

(Clinical Institute of Pharmacology, Anhui Medical University, Hefei230032)

AbstractObjectiveTo investigate effect of exogenetic recombinant human interleukin-10 on immunologic functions of organism.MethodsProliferation model of T lymphocytes induced by ConA was tested with MTT reduction method and activity of NK cells was measured by method of neutral red staining.ResultsIt was found that recombinant human interleukin-10 under administration of 5,20 and 80 μg^．kg^-1 in vivo possessed inhibitory effect on activity of T lymphocytes and NK cells (P＜0.01). The potency was intensified with increase of dosage.ConclusionExogenetic recombinant human interleukin-10 can inhibit activity of T-lymphocytes and NK cells. There is relationship between effect and dosage.

MeSHinterleukin-10; T-lymphocytes; killer cells, natural

1989年，美国DNAX研究所Fiorention等发现TH₂细胞能产生一种细胞因子合成抑制因子，后命名为白细胞介素10(Interleukin-10, IL-10)，该因子对单核巨噬细胞的活性具有直接的抑制作用^〔1〕，亦可通过降低对单核巨噬细胞等抗原提呈细胞(APC)表面MHCⅡ类分子的表达，间接抑制TH₁细胞合成细胞因子和T细胞的增殖，因此IL-10被认为是一种抗炎和免疫抑制因子^〔2〕。同时它又是一种免疫刺激因子对B细胞、胸腺细胞和肥大细胞^〔3～5〕的生长具有协调和促进作用。IL-10的这些生物作用，提示其潜在的医学应用价值。本研究利用重组人白细胞介素10(rhIL-10)，给小鼠皮下注射，观察对小鼠T淋巴细胞及NK细胞活性的影响。

1材料

1.1药品与试剂rhIL-10由安徽桑尼生物技术研究所提供，批号980825；刀豆蛋白A(ConA)，Sigma产品，批号BP0337-4；噻唑兰(MTT)购于北京邦定生物医学公司，批号971010；RPMI-1640，GIBCO公司产品；L₉₂₉细胞株本室保存。

1.2动物C₅₇小鼠，体重18～22 g，♀♂各半，由安徽医科大学实验动物中心提供，合格证号：皖实动准字第01号。

1.3仪器Napro-6100 CO₂培养箱，美国杜帮公司产品；XSZ倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；EL301 Strip reader酶标仪，美国BioTek公司产品。

2方法与结果

2.1rhIL-10对ConA诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响取C₅₇BL小鼠随机分为4组：生理盐水组；rhIL-10三种剂量组：5，20，80 μg^．kg^-1每日皮下给药1次，连续7天，第8天将小鼠眼球放血后脱颈椎处死，接常规方法取脾脏，制成单个核细胞悬液，以RPMI-1640完全培养液(CM)调整细胞浓度为1×10^7．L^-1。于96孔细胞培养板中，每孔加入200 μl脾细胞悬液，再加入50 μl含ConA的培养液，ConA的终浓度为3 mg^．L^-1。置37℃，5% CO₂孵箱中孵育72 h，终止培养前4 h，轻轻吸取上清液200 μl。加不含小牛血清RPMI-1640稀释的MTT液0.5 g^．L^-1孔，继续培养4 h。届时，每孔加入200 μl酸性异丙醇，令紫色结晶全部溶解。用酶联免疫检测仪在波长570 nm处读取A值。应用SPSS统计软件对各组数据进行方差分析(F=85.0117，P＜0.0005)，组间比较用t检验，结果见表1。

表1rhIL-10对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性的影响(±s,n=6)

组别 剂量

μg^．kg^-1 A值

(570 nm) 生理盐水 0.523±0.029 rhIL-10 5 0.446±0.021^** rhIL-10 20 0.424±0.014^** rhIL-10 80 0.343±0.080^**

与生理盐水组比较，^**P＜0.01结果表明，rhIL-10三个剂量均能显著抑制小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应，经药效与剂量依赖关系统计分析P＜0.01，表明这种抑制作用呈剂量依赖关系。

2.2rhIL-10对小鼠NK细胞活性的影响分组与给药同前，按常规方法取小鼠脾脏，制成单个核细胞悬液，以CM调整细胞浓度为1×10^7．L^-1作为效应细胞。靶细胞为取对数生长期的L₉₂₉细胞，以4‰中性红染色，用CM调整靶细胞浓度为1×10^6．L^-1，取100 μl加入96孔培养板各孔中，放37℃孵育4 h，取出培养液，用PBS洗一次以除去效应细胞和被杀伤而脱落下来的靶细胞，每孔加入200 μl醛酸乙醇溶解留下的靶细胞，摇匀，离心自每孔取100 μl至酶标板，用酶标仪在540 nm处测A值。

应用SPSS统计软件对各组数据进行方差分析(F=30.2291，P＜0.00005)组间比较用t检验，结果见表2。

表2rhIL-10对小鼠NK细胞活性的影响(±s,n=6)

组别 剂量(μg^．kg^-1) 溶解(%) 生理盐水 36.37±3.28 rhIL-10 5 26.88±3.51^** rhIL-10 20 23.34±3.88^** rhIL-10 80 16.82±3.45^**

与生理盐水组比较，^**P＜0.01结果表明rhIL-10三个剂量均能抑制小鼠NK细胞活性，经药效与剂量依赖关系统计分析P＜0.01，表明这种抑制作用呈剂量依赖关系。

3讨论

rhIL-10主要由活化的巨噬细胞、B细胞和TH₂细胞分泌，能抑制MΦ表达MHC Ⅱ类分子，直接刺激B细胞增殖和分化，促进抗体产生，同时它能抑制单核细胞分子的分泌，间接抑制TH₀和TH₁细胞分泌IL-2、IFN-γ^〔3～5〕。研究表明：IL-10是一种重要的免疫调节剂，在细胞免疫和体液免疫中的平衡与稳定的调控中起关键作用。机体IL-10表达和分泌异常，将会导致一系列免疫应答和反应的紊乱，从而诱发机体免疫性疾病的发生。我们用rhIL-10 5，20，80 μg^．kg^-1给小鼠注射，增加小鼠体内外源性rhIL-10含量，结果表明不同的rhIL-10均能抑制机体T淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性，这种抑制作用与剂量呈依赖关系。提示运用rhIL-10能改变机体的免疫状态，可用于某些免疫异常疾病的治疗，进一步研究尚待深入。

作者简介：陈飞虎，男，37岁，副教授，博士生；

陈敏珠，女，66岁，教授，博士生导师

参考文献

1Wang P, Wu P， Siegel MI et al. IL-10 inhibits transcription of cytokine genes in human peripheril blood mononulear cells. J Immunol,1994;153(2):811

2David FF, Albert Z, Paulo V et al. IL-10 acts on the antigen-presenting cells to inhibit cytokine production by TH₁ cells. J Immunol,1991;146(2):344

3Finke J, Ternes P, Lange W et al. Expression of interleukin 10 in B lymphocytes of different origin. Leukemia,1993;7(11):1 852

4Takashi S, Anne OG, Ian MN et al. Identification of a novel thymocyte growth-promoting factor derived from cell lymphomas. Cell Immunol,1990:129(1)：228

5Thompson SL, Dhar V, Bond MW et al. Interleuk