中国图书资料分类法分类号R979.1

8-氯腺苷（8-Cl-A）作为一种新型有效的抗肿瘤药物而越来越受到人们的重视，它可选择性地作用于肿瘤细胞，抑制其生长而达到抗肿瘤目的^〔1〕。本文进行了方法学探索，建立了测定8-Cl-A药物含量的反相高效液相色谱法。

1实验

1.1仪器及试剂Waters高效液相色谱仪，包括：510双泵，U 6 K进样器，484紫外可变波长检测器，810数据工作站。8-Cl-A对照品、8-Cl-A注射液（批号971119，971120，971121）均由南京生物工程医药科技发展有限公司提供。内标物：茶碱Sigma公司产品。甲醇为HPLC级（上海化学试剂站中心化工厂出品），磷酸二氢钠为GR级。

1.2色谱条件色谱柱：μBondapak C₁₈（3.9 mm×300 mm）；流动相：0.02 mol·L^-1磷酸二氢钠-甲醇（760∶240），使用前以0.45 μm滤膜过滤；柱温：室温；检测波长：263 nm；0.05AUFS；进样量10 μl。

1.3实验方法和方法学考查

1.3.1系统适应性试验分别取8-Cl-A、内标物茶碱、8-氯腺嘌呤（为8-Cl-A的降解产物）溶液各1.0 ml置同一个10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样10 μl，各峰的分离度均大于1.5，理论塔板数按8-Cl-A计算大于2 000。见图1。

1.3.2线性关系以8-Cl-A贮备液用流动相配或浓度为2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg·L^-1（含内标60 mg·L^-1），取10 μl注入色谱仪，以8-Cl-A与内标的峰面积比值为纵坐标，8-Cl-A浓度为横坐标作标准曲线。回归方程为=0.0236+1.999 X，r=0.9993

1.3.3精密度、稳定性、回收率试验精密吸取对照品溶液，重复进样5次，被测物峰面积与内标物峰面积积分比值的RSD为0.88％；于4、8、16、24、48 h对批号为971120测定。计算日内、日间误差，日内＜1.28％，日间＜2.38％。同时每隔3个月对同一批号针剂测定计算其RSD＜3.89％，在批号为971119制得试液中加入8-Cl-A对照品，测定5次，以平均结果计算回收率为99.05％，RSD为2.83％。

图18-氯腺苷RP-HPLC色谱分离图

1： 8-氯腺嘌岭，2： 内标，3： 8-Cl-A

1.4测定与结果

1.4.1对照品和内标物的制备精密称取经干燥至恒重的8-Cl-A对照品30 mg于50 ml量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，此液为0.6 g·L^-1的8-Cl-A标准贮备液；精取纯茶碱60.0 mg置100 ml量瓶中，以流动相制得0.6 g·L^-1内标液。

1.4.2供试品溶液制备以砂轮锯刀切开安瓿精密量取1.0 ml待测针剂置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度摇匀，精取该溶液与内标液各1.0 ml置10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀供测定，同理制备供测的标准系列样品。

1.4.3测定分别取对照品及供测品试液10 μl注入色谱仪测定，结果见表1。

含量测定结果（±s, n=3）

批号 含量（％） 971119 98.66±2.18 971120 99.31±1.66 971121 99.18±1.88

2讨论

2.1最大吸收波长经紫外全波段扫描，8-Cl-A在254和263处有最大吸收。本方法选择263 nm为测定波长，干扰少且峰形好。

2.2流动相甲醇—水，甲醇—0.02 mol·L^-1磷酸缓冲液，甲醇—0.174 mol·L^-1 HAc。选用甲醇—磷酸盐缓冲体系，峰形尖锐，无拖尾，被测组分与内标物分离度大于2.0。

2.3取样与样品保存8-Cl-A针剂样品为一种粘稠状液体，故在精密取样时，建议缓慢操作，以确保分取精确而减少误差。在室温下8-Cl-A的水溶液较不稳定，放置5天，分解约7％～8％，放置10天分解可达15％以上（其中主要分解代谢产物为8-氯腺嘌呤和8-氯肌苷）^[2]。故提倡样品保存在冰箱中，我们实验样品日间误差RSD＜2.38％。

作者简介：孙昕，男，38岁，工程师

参考文献

1方家椿，石永进，彭敬等.8-氯腺苷的抗肿瘤作用研究，中华肿瘤杂志，1995；17（1）：5～9

2张慰青，朱卫国，苏玉玲等.RP-HPLC测定血清中8-氯腺苷的浓度.见：卢佩章，张玉奎主编.第十次全国色谱学术报告会文集. 北京：中国化学色谱委员会，1995：422～423

1998-12-24收稿，1999-04-07修回