摘要目的评价6种冬虫夏草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法序贯注射卡介苗和脂多糖诱导小鼠免疫性肝损伤模型，在造模过程中，每日灌服6种冬虫夏草多糖每鼠各150 mg，共12天。检测血清转氨酶和肝匀浆超氧化物歧化酶的活力、肝匀浆丙二醛浓度、肝脾脏器指数，并做肝脏病理学检查。结果6种冬虫夏草多糖均有抗肝脏脂质过氧化作用，使肝匀浆丙二醛含量下降，超氧化物歧化酶活力升高(P＜0.05或0.01)。其中地顶孢霉菌株来源的冬虫夏草多糖尚可显著降低血清转氨酶活力和肝脾脏器指数(P＜0.05或0.01)，并改善肝坏死程度(P＜0.05)。结论在6种冬虫夏草多糖中，地顶孢霉菌株提取的虫草多糖具有较好的抗小鼠免疫性肝损伤作用。

中国图书资料分类法分类号R282.71

Evaluation for the protective effect of cordyceps

polysaccharides on immunological liver injury in mice

Xu Jianming, Ding Changhai, Li Liande et al

(Institute of Clinical Pharmacology, Anhui Midical University, Hefei230032)

AbstractObjectiveTo evaluate the protective effect of 6 kinds of cordyceps polysaccharides on immunological liver injury in mice.MethodsAn immunological liver injury model was induced by administration of lipopolysaccharide following injection of BCG vaccine into mice, while 6 polysaccharides from different origins of cordyceps was given at ig 150 mg*d^-1 for 12 days. The activities of serum transaminase (ALT, AST) and liver SOD, the concentration of liver MDA, the weighting indexes of liver and spleen, the liver pathology was comparatively observed to evaluate the effects of different cordyceps polysaccharides on immunological liver injury.ResultsThe lipid peroxidation of immunological liver injury in mice was inhibited by all kinds of cordyceps polysaccharides, as indicated by decreased level of MDA and increased activity of SOD in the liver homogenates (P＜0.05～0.01). It was especially found that polysaccharides from Acremonium terricola could significantly suppresed the elevation of serum transaminase and weighting indexes of liver or spleen(P＜0.05～0.01)， one of which also improved the necrosis in the liver(P＜0.05).ConclusionOf 6 cordyceps polysaccharides, the polysaccharide from Acremonium terricoal has better protective effect on immunological liver injury in mice.

MeSHcordyceps sinensis; liver/pathol; immunologic diseases; mice

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草〔Cordyceps sinensis(Berk.) Sacc〕寄生虫草蝙蝠的幼虫后形成的子座及干燥虫体。近年来国内外对冬虫夏草的化学成分及药理作用进行了广泛的研究，发现冬虫夏草的多糖成分可明显影响机体免疫功能，并可防治免疫损伤性肝硬化^{〔1，2〕〕}，但尚无冬虫夏草多糖对急性免疫性肝损伤的报道。本研究在卡介苗加脂多糖诱发的小鼠免疫性肝损伤模型中，试用6种冬虫夏草多糖并评价其抗肝损伤作用，以期筛选出具有较好保肝作用的冬虫夏草菌株及其多糖成分。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品6种冬虫夏草多糖由安徽农业大学提供，其菌株与多糖含量分别是：A.中国被毛孢菌phso 1，含多糖30%；B.中国被毛孢菌phso 4，含多糖80%；C.古尼拟青酶小孢菌变种ppGM，含多糖72.2%；D.地顶孢霉菌pAtol，含孢内多糖96%；E.地顶孢霉菌pAtolE，含孢外多糖97.1%；F.戴氏绿僵菌pMtol，含多糖70.1%。临用前以生理盐水配制。

1.1.2试剂卡介苗(BCG vaccine)购自安徽省结核病防治所，批号961101。脂多糖(LPS)系Sigma公司产品，1，1，3，3-四乙基丙烷(TEP)系Fluka公司产品。硫代巴比妥酸(TBA)和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)分别购自上海试剂二厂和上海前进试剂厂。丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒系上海荣盛试剂公司产品。

表16种冬虫夏草多糖对血清转氨酶和肝脏病理的影响(±s,n=8) 组别

血清转氨酶(kU·L^-1) 肝细胞坏死程度

ALT AST 正常对照

41.2±9.6

20.9±8.2 0 模型对照 83.5±26.4^△△ 51.7±9.6^△△ 2.4±0.6^△△ 冬虫夏草多糖处理 A 67.2±25.2 50.8±9.6 2.2±0.7 B 78.7±24.8 39.8±13.4 2.5±0.5 C 76.9±48.0 31.6±14.8^** 2.3±0.6 D 48.0±19.2^** 44.5±2.4^* 1.8±0.9 E 38.4±9.6^** 42.0±9.6^* 1.0±0.5^* F 52.8±28.8^** 53.6±12.6^* 2.2±0.7

与正常对照组比较：^△△P＜0.01；与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

表26种冬虫夏草多糖对肝匀浆MDA、SOD以及脏器指数的影响(±s,n=8)

组别 MDA

(nmol·g^-1湿重) SOD

(U·g^-1湿重) 脏器指数(mg·10 g^-1) 肝脏 脾脏 正常对照

105.6±18.6

228.0±48.0

580.0±50.0

59.0±10.0 模型对照 202.6±26.6^△△ 150.4±64.0^△△ 700.0±30.00^△△ 82.0±10.0^△△ 冬虫夏草多糖处理 A 133.3±26.6^** 244.0±108.0^* 670.0±30.0 90.0±8.0 B 129.3±45.3^** 296.0±28.0^** 720.0±100.0 90.0±20.0 C 82.6±8.0^** 292.0±26.4^** 660.0±60.0 100.0±20.0 D 96.0±16.0^** 304.0±4.0^** 620.0±60.0^* 70.0±4.0^* E 85.3±18.6^** 300.0±8.0^** 550.0±90.0^* 68.0±9.0^* F 82.6±5.3^** 272.0±27.6^** 670.0±30.0 86.0±10.0

与正常对照组比较：^△△P＜0.01；与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

1.1.3动物昆明系小鼠，♂，20 g±2 g，由安徽医科大学实验动物中心(皖医实动准字第01号)提供。

1.2方法

1.2.1小鼠免疫性肝损伤模型的制备与药物处理参照文献〔3〕制作小鼠免疫性肝损伤模型，即由尾静脉iv 0.2 ml内含BCG 2.5 mg的生理盐水悬液，12 d后每鼠iv LPS 10 μg，16 h后处死小鼠，取血和肝脾组织作有关检测。在造模过程中，每鼠每日灌胃6种冬虫夏草多糖各150 mg，连续12天；模型对照组灌胃等量生理盐水。

1.2.2肝损伤指标的检测按试剂盒说明书操作步骤，用改良金氏法测定血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。称量肝脏和脾脏的湿重，计算脏器指数。选肝右叶用冷生理盐水漂洗去除积血，拭净后再用冷生理盐水制备100 g·L^-1肝匀浆，分别按TBA法^〔4〕和核黄素-NBT法^〔5〕测定丙二醛(MD