中国图书资料分类法分类号R977.12

用紫外分光光度法测定黄体酮的含量^〔1〕，其注射液是油剂，油溶剂对测定有干扰，因而药典一直采用HPLC法。本研究对茶油为溶剂的黄体酮注射液，直接用无水乙醇溶解并稀释至一定浓度，采用二阶导数零交截距法^〔2〕测含量，可消除茶油的干扰。

1仪器与药品

岛津UV-2401 PC分光光度计；无水乙醇：上海振兴化工一厂，批号9610355；黄体酮对照品：中国药品生物制品检定所，批号027-8004；茶油：由上海第九制药厂提供；岛津LC-10AD高效液相色谱仪（包括LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器，PC-6A数据处理器）；甲醇，上海溶剂厂。

2测定依据与参数的选定

2.1测定依据配制黄体酮无水乙醇溶液（6 μg·L^-1）：精密称取黄体酮对照品60 mg置100 ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，为贮备液。准确吸取上述贮备液1 ml置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度。

配制茶油无水乙醇溶液（6 μl·L^-1）：准确吸取茶油6 ml置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，为贮备液。准确吸取上述贮备液1 ml置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度、摇匀。

配制两种无水乙醇混合液：分别准确吸取上述两种贮备液各1 ml，置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

用上述3种溶液在200～300 nm波长范围内分别绘制吸收光谱（图1）与二阶导数光谱（图2）。

图1吸收光谱

○—○黄体酮；●—●茶油；▲—▲二者混合液

由二阶导数光谱图2看，茶油在242.5 nm波长处的零交点可作为黄体酮的测定波长，过此点对基线作垂线与混合液的光谱相交，量取交点O'与零交点O截距D值，可作为黄体酮的定量信息。D值与茶油的浓度无关，而与黄体酮的浓度成正比例，因而消除了茶油的干扰。

图2二阶导数光谱

○—○黄体酮；●—●茶油；▲—▲二者混合液

2.2测定参数狭缝：2 nm；扫描速度：中速；Δλ：4 nm（2 nd）；扫描因素：20；纵轴：±0.1。

3标准曲线制备

精密称取105℃干燥至恒重的黄体酮对照品10 mg，置100 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照液。准确量取对照液1.0，1.5，2.0，2.5 ml分别置25 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，置1 cm石英吸收池中，以无水乙醇作参比，按选定参数，在200～300 nm波长绘制二阶导数光谱，量取零交截距D值，结果见表1。

表1黄体酮浓度C与D值的关系（n=4）

C（μg·L^-1）

4.12

6.18

8.24

10.3 D（mm） 28.0 41.5 55.8 70.0 回归方程与相关系数D=-0.28+6.8Cr=0.999 9

4回收率试验

精密量取黄体酮对照液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml分别置25 ml量瓶中，按黄体酮注射液1 ml含10 mg黄体酮的比例分别加茶油无水乙醇溶液适量，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，按标准曲线制备项下方法绘制二阶导数光谱，量取D值，由回归方程计算回收率（％），结果见表2。

表2回收率试验结果（％，n=5）

加入量（μg） 测得量

（μg） 回收率 RSD

4.12

4.13

100.2 6.18 6.22 100.6 8.24 8.22 99.8 100.2 0.60 10.30 10.40 101.0 12.36 12.30 99.5

5样品测定

用内容量移液管精密量取本品1 ml，置100 ml量瓶中，用无水乙醇分数次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加无水乙醇适量稀释，振摇使油混溶后再加至刻度，摇匀。准确量取2 ml，规格1 ml∶10 mg者置25 ml量瓶中，1 ml∶20 mg者置50 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。按标准曲线制备项下方法绘制二阶导数光谱。量取D值，由回归方程计算黄体酮含量。另外，按药典方法（HPLC法）测得黄体酮含量。两结果比较，基本一致，具体结果见表3。

表3UV法与HPLC法含量测定比较（％，n=3）

批号 规格 UV法 HPLC法 941204-11 1 ml∶10 mg

98.0（0.4）

98.1 951003-111 1 ml∶20 mg 96.0（0.5） 95.7 970311 1 ml∶10 mg 100.3（0.4） 99.4

括号内为RSD（％）

6小结

6.1本法不需分离可直接测定以茶油为溶剂的黄体酮注射液的含量。操作简便、快速，与药典HPLC法比较，测定结果基本一致。

6.2黄体酮注射液1 ml在50 ml无水乙醇中不能完全混溶，因而两种规格均以量取1 ml，加无水乙醇至100 ml为宜。

6.3由于零交截距相交于谷的陡坡处，零交点所在波长的选择以及仪器波长准确与否对测定结果影响较大，测定时可用干扰组分（茶油）选定零交点波长，以便得到较准确的结果。

6.4样品的含量测定，采用外标一点法更为简便。

作者简介：徐静，女，33岁，主管药师

参考文献

1中华人民共和国卫生新药典委员会.中国药典·二部，北京：化学工业出版社，1985：474～475

2刘艳春.一阶导数紫外光谱法检查阿斯匹林及其片剂中的游离水杨酸.药物分析杂志，1994；14（2）：46

1998-03-18收稿，1998-12-16修回