中国医学科学院学报2000年第22卷第4期

韩晓男阮英茆王红月宋润兰李亚辉李小惠褚艳张旭晨朱明娟

摘要目的观察中药脑肺康对缺氧性肺动脉高压和肺气肿的防治效果并探讨其作用机制。方法以弹性蛋白酶溶液滴注入金黄地鼠气管内，正常饲养30 d后，常压下缺氧15 d，分别设立中药脑肺康预防组、治疗组、肺气肿+缺氧组及正常对照组。于处死动物前，测量平均肺动脉压，取静脉血进行循环内皮细胞计数；处死后测量右心肥大指数，光镜下计数左侧肺支气管肺泡灌洗液内细胞总数，对右侧肺进行光镜图像分析。结果中药脑肺康预防组和治疗3个月组平均肺动脉压、循环内皮细胞数、支气管肺泡灌洗液细胞总数、肺泡平均内衬间隔和肺细小动脉平均中膜面积百分比均明显低于肺气肿+缺氧组(P＜0.05或P＜0.01)。结论中药脑肺康可降低肺动脉压，保护血管内皮细胞及减轻肺内炎症反应，减缓肺气肿病变的发展，减轻缺氧造成的肺血管重建。

关键词：肺动脉高压；肺气肿；支气管肺泡灌洗液；循环内皮细胞

肺气肿和肺动脉高压存在着密切的关系，严重的肺气肿可导致肺动脉高压，而且迄今尚无理想的防治措施。中药脑肺康是中国医学科学院血液学研究所从丹参提取液中精制而成的一种新的中药制剂，本研究采用向金黄地鼠气管内滴注弹性蛋白酶和常压缺氧复制肺气肿+肺动脉高压模型^［1］，测量肺动脉压，作循环内皮细胞计数、支气管肺泡灌洗液细胞计数及肺组织、肺血管光镜形态定量观察等方法，观察中药脑肺康对地鼠实验性肺气肿及肺动脉高压的防治效果并探讨其作用机制。

材料和方法

实验动物及试剂50只雄性3月龄金黄地鼠，体重120 g左右，购自卫生部生物制品研究所；猪胰弹性蛋白酶购自Boehringer mannheim公司，130 U/mg；中药脑肺康由中国医学科学院血液学研究所研制，批号：98津卫药制剂437WT试第27号。

肺气肿、肺动脉高压模型的复制按文献［2］方法，将弹性蛋白酶液(60 u/100 g体重)滴注入气管内，地鼠经正常饲养30 d后，放进常压低氧舱内，氧浓度为(10±0.5)%，每天8 h，共15 d。

动物分组随机分为4组。(1) 正常对照(N)组：20只；(2)肺气肿+缺氧(EH)组：10只，肺气肿30 d+缺氧15 d后处死动物；(3)预防(Prv)组：10只，从注射弹性蛋白酶前15 d用中药脑肺康灌胃，每100 g体重给4 g/d生药至缺氧结束，共60 d；(4) 治疗(T)组：10只，模型形成后用中药脑肺康灌胃(剂量同上)90 d。

平均肺动脉压(MPAP)和右心肥大指数(RVHI)按文献［3］的方法测量MPAP。处死地鼠后，取出心脏，用滤纸拭干，去除心房，分离右心室和左心室+室间隔。分别称量右心室和左心室+室间隔重量，计算RVHI值［右心室/(左心室+室间隔)×100%］。

循环内皮细胞(CEC)计数按文献［4］的方法进行，同一标本计数4次，取平均值，结果以个/mm³表示。

支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数以生理盐水灌洗地鼠左肺，将灌洗液于4℃、400×g离心10 min，弃上清，取沉淀加入等量生理盐水振荡制成细胞悬液，取少许滴于血球计数池中，在倒置显微镜下计数，同一标本计数4次，并计算每g肺湿重每ml灌洗液细胞数［cells/(ml*g)］。同时取适当悬液甩片，以苏木素+伊红(HE)染色，以备细胞分类计数。

病理学观察和形态学定量取地鼠右肺，经灌注固定，包埋切片，行HE和弹性纤维染色，光镜观察并用显微图像分析仪(北京惠中公司)进行如下测定：(1)平均内衬间隔(MLI)：在10倍物镜下对每只动物HE切片随机选取10个视野(避开大血管和支气管)，在每个视野正中划“十”字交叉线，计数与十字线相交的肺泡隔数(Ns)，同时测出十字线总长(L)，按公式MLI=L/Ns计算平均内衬间隔^［5］，以表示肺泡平均内径。(2)肺细小动脉平均中膜面积百分比(MS%)：在弹力纤维染色切片上选择截面为圆形或类圆形的细小动脉，在20倍物镜下用图像分析仪分别测量伴行呼吸性细支气管和肺泡管的环肌型动脉和部分肌型动脉血管外径(外弹力膜间距)以及血管内径(内弹力膜间距)，计算中膜截面积MS(media section)，每张切片选择15～20个血管。按公式MS%=(MS/血管截面积)×100%分别计算中膜面积百分比^［6］，并求出平均值。

统计学处理采用SPSS for windows 6.0进行方差分析和q检验，数据用(±s)表示。

结果

各实验组MPAP和RVHI的比较EH组的MPAP和RVHI与N组相比，差异有显著意义(P＜0.01)；Prv组和T组MPAP均明显低于EH组(P＜0.05，P＜0.01)，且与N组相比差异均无显著性(P＞0.05)；T组RVHI与EH组相比差异无显著意义(P＞0.05)(表1)。

表1各组平均肺动脉压和右心肥大指数的比较

table 1Comparison of mean pulmonary artery pressure

and right ventricle hypertrophy index in

the experimental groups (±s)

Groups MPAP(kPa) RVHI(%) N 2.54±0.48 (n=9) 19.45±3.37 (n=11) EH 4.39±0.87^▲ (n=8) 27.42±3.17^▲ (n=9) Prv 2.81±0.38^** (n=8) 23.89±5.62 (n=8) T 3.10±0.25^* (n=6) 25.08±1.63 (n=8)

*P＜0.05，**P＜0.01 compared with EH group；▲P＜0.01 compared with N group; N:control; EH:(emphysema+hypoxia)；Prv:prevention group; t:treatment group; MPAP:mean pulmonary artery pressure; RVHI:right ventricle hypertrophy index各实验组CEC计数和BALF细胞总数的比较Prv组和T组CEC计数均明显低于EH组(P＜0.01)，T组与N组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。Prv组和T组BALF细胞总数均明显低于EH组(P＜0.05，P＜0.01)，且T组与N组相比差异无显著意义(P＞0.05)(表2)。细胞分类计数显示，各组肺泡巨噬细胞(AMs)在灌洗液各类细胞中的比例如下：N组：(95.7±0.5)%、EH组：(97.0±2.5)%、Prv组：(96.8±2.7)%、T组：(96.3±2.1)%，各组间差异无统计学意义。

病理学观察和形态定量N组：支气管、肺泡和肺血管结构正常；EH组：绝大多数区域细支气管、呼吸性细支气管、肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张，肺泡壁薄厚不均并有不同程度的断裂，同时融合为肺囊泡，腺泡内肌型动脉中膜平滑肌细胞增生，中膜明显肥厚，无肌小动脉肌型化；Prv组和T组：肺气肿病变有一定程度减轻并且较为局限，其中以Prv组较为明显，但无1例恢复至正常状态；与EH组相比，两组肺内细小动脉病变均明显改善，其中膜厚度基本接近正常。Prv组和T组MLI和MS%均明显低于EH组，但是仍高于N组(P＜0.01，P＜0.05)(表2)。

表2各实验组循环内皮细胞数、支气管肺泡灌洗液细胞总数、平均内衬间隔和平均中膜面积百分比的比较

table 2Comparison of circulating endothelial cells, cells recoveries from bronchoalveolar lavage fluid,

mean linear intercept, and percentage of arterial media area in the experimental groups (±s)

Groups n CEC(cells/mm³) BALF［cells/(ml*g)］ MLI(μm) MS%(%) N 10 2.02 ±1.39 85.73 ±29.40 35.92 ±4.77 26.94 ±4.99 EH 8 7.74 ±1.24^## 324.25 ±75.92^## 146.62 ±26.87^## 54.42 ±6.88^## Prv 10 2.59 ±1.24^** 179.86 ±57.52^*# 58.88 ±9.14^**# 35.02 ±3.40^*# T 7 2.50 ±1.40^** 91.35 ±22.60^** 57.42 ±11.53^**# 32.50 ±2.76^**#

*P＜0.05，**P＜0.01 compared with EH group;＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 compared with N group;N,EH,Prv,and T:see table 1; CEC:circulating endothelial cell;BALF:bronchoalveolar lavage fluid; MLI:mean linear intercept; MS:media section讨论

中药脑肺康是中国医学科学院血液学研究所由丹参提取液中精制而成的一种新的中药制剂，有抗